动物细胞融合与单克隆抗体·.ppt

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1、欢迎走进现代生物科技专题课堂欢迎走进现代生物科技专题课堂细细胞胞工工程程植物植物组织培养组织培养 VS 比较项目比较项目植物植物组织培养组织培养动物细胞动物细胞培养培养原理原理细胞细胞的全能性的全能性细胞的增殖细胞的增殖培养基培养基（半）半）固体、营养、固体、营养、植物激素植物激素液体、营养、液体、营养、动物血清动物血清结果结果培养成植株培养成植株培育成细胞系（培育成细胞系（株）株）培养目的培养目的快速繁殖，快速繁殖，培育无病毒植株。培育无病毒植株。获得细胞的产物等获得细胞的产物等思考：思考：思考：思考：植物细胞工程中，除了植物组织培养技术外，植物细胞工程中，除了植物组织培养技术外，还有什么技

2、术？过程如何？还有什么技术？过程如何？动物细胞动物细胞培养培养温故而知新温故而知新植物细胞杂交植物细胞杂交植物细胞杂交植物细胞杂交（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）（马铃薯番茄）融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生出出细细胞胞壁壁植物细胞的融合植物细胞的融合杂杂种种细细胞胞AB杂杂种种植植株株脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物组织培养植物组织培养原生质体原生质体B原生质体原生质体A去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？动物细胞可以融合吗？如果可以，两者相同吗？如果可以，两者相

3、同吗？如果可以，两者相同吗？如果可以，两者相同吗？带带着着问题走进课堂？问题走进课堂？2.2 动物细胞工程自主阅读，自主阅读，p52p52第第第第2 2自然段，自然段，自然段，自然段，思考下列问题：思考下列问题：1 1、什么叫、什么叫动物细胞融合动物细胞融合？（概念要点）（概念要点）两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用 两个或多个动两个或多个动物细胞物细胞 一个细胞一个细胞（杂交（杂交单核单核细胞）细胞）原理？原理？诱导细胞融合物质：诱导细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇PEG诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。思考讨论：

4、思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得获得杂种植株杂种植

5、株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性去去除细胞壁除细胞壁后诱导后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱导使细胞分散后诱导细胞融合细胞融合物理（离心、振荡、物理（离心、振荡、电刺激）电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒 3、动物、动物细胞融合技术细胞融合技术的发展简史告的发展简史告诉我们诉我们：科学科学技术是不断发展的技术是不断发展的。那么，。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；可能；广泛

6、应用广泛应用多个学科领域多个学科领域；重要用途：重要用途：制备单克隆抗体。制备单克隆抗体。1 1、抗体抗体1.1 1.1 概念：概念：抗体是机体受抗抗体是机体受抗原刺激后产生的、并原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功性结合的具有免疫功能的球蛋白能的球蛋白 Ig。1.2 1.2 来源：来源：B B淋巴细胞。淋巴细胞。B B淋巴细胞与抗体的关系：淋巴细胞与抗体的关系：B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。生抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生百淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原万种以上的抗体，每种抗

7、体对特定的抗原具有特异性免疫作用。具有特异性免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？怎样解决这个问题？缺陷是什么？怎样解决这个问题？2、单克隆抗体单克隆抗体McAb（概念）（概念）由单个由单个B B淋巴细胞经过淋巴细胞经过无性繁殖无性繁殖（克隆）（克隆），形成基因型相同的细胞群，形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为异性强的抗体称为单克隆抗体单克隆抗体。特点：特点：特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高、纯纯 度度

8、 高、产高、产 量量 大大。如何大量生产单克隆抗体？如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将利用细胞融合的技术将两种细胞融两种细胞融合合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的性的杂交瘤细胞杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞如何筛选？如何筛选？融融合合方方式式？生生产产单单克克隆隆抗抗体体需需要要那那些些物物质质和和技技术术呢呢？3、单克隆抗体单克隆抗体McAb制备过程制备过程专一专一抗体抗体检验检验阳性阳性单克隆抗

9、体单克隆抗体 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合细胞融合杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔筛选筛选创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦创始人：米尔斯坦思考思考问题问题：1 1、本过程利用了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承

10、了双亲细胞这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有的遗传物质，不仅具有B B细胞细胞分泌抗体分泌抗体的能的能力，而且还有力，而且还有无限增殖无限增殖的本领，因而可以获的本领，因而可以获得大量单克隆抗体得大量单克隆抗体4 4、单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与与常规抗体相比，单克隆抗体常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特产量高，特异性强，灵敏度高，异性强，灵敏度高，优越性十分明显。优越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1 1、临床诊断、临床诊断、治疗疾病。、治疗疾病。2 2、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿瘤治疗肿瘤。课堂课堂

11、小结小结动物细胞动物细胞融合融合过程过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程两个过程两个过程三三个个“一一”一个诱导细胞融合的新方法灭活一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势1、动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞2、动物细胞融合过程中所用的诱导剂动物细胞融合过程中所用的诱导剂灭灭活的病毒，抗原性和感染力的有无是活的

12、病毒，抗原性和感染力的有无是（）A.失去抗原性，具有感染力失去抗原性，具有感染力 B.具有抗原性，也具有感染力具有抗原性，也具有感染力 C.失去抗原性，也失去感染力失去抗原性，也失去感染力 D.具有抗原性，失去感染力具有抗原性，失去感染力BD 3、单克隆抗体是指（单克隆抗体是指（）A.单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B.单个单个B淋巴细胞增殖产生的抗体淋巴细胞增殖产生的抗体 C.单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体体 D.单个抗体通过克隆化，产生大量抗体单个抗体通过克隆化，产生大量抗体4、生产单克隆抗体时，在培养液中加入某种试生产

13、单克隆抗体时，在培养液中加入某种试剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（剂能筛选出杂交瘤细胞，因为该试剂（）A.能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的能抑制淋巴细胞和杂交瘤细胞的DNA复制复制 B.能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活能阻止淋巴细胞的原癌基因被激活 C.选择性抑制骨髓瘤细胞的选择性抑制骨髓瘤细胞的DNA复制复制 D.能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的能阻止杂交瘤细胞核糖体上所有蛋白质的合成合成CC5 5、“生物导弹生物导弹”是指是指 （）A.A.单克隆抗体单克隆抗体 B.B.杂交瘤细胞杂交瘤细胞 C.C.产生特定抗体的产生特定抗体的B B淋巴细胞淋巴细胞 D.D.在单克隆抗体上连接抗癌药物在单克隆抗体上连接抗癌药物 D6、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 B.未经过免疫的未经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 C.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 D.未经过免疫的未经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 C