临床生化检验方法的选择和评价教学提纲.ppt

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1、临床生化检验临床生化检验(jinyn)方方法的选择和评价法的选择和评价 临床生化检验方法的选择和评价，是临床生化检验方法的选择和评价，是临床生化检验质量控制的重要基础工作。临床生化检验质量控制的重要基础工作。当建立一个新的方法，或引进新的方法、当建立一个新的方法，或引进新的方法、都应对它们的技术都应对它们的技术(jsh)(jsh)性能作出评价，性能作出评价，以便科学的选择和应用。以便科学的选择和应用。第一页，共87页。2022/12/51齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第二页，共87页。2022/12/52齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室一一 检验方法检验方法(fngf)和标准

2、品的分级和标准品的分级v（一）方法的分级（一）方法的分级 临床生化检验方法根据其准确度与精密度的临床生化检验方法根据其准确度与精密度的不同可以不同可以(ky)(ky)分为决定性方法、参考方法、分为决定性方法、参考方法、常规方法等三级。常规方法等三级。第三页，共87页。2022/12/53齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v1 1决定性方法（决定性方法（definitive methoddefinitive method）是指准确度最高，系统误差最小，经过详是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面某些方面(fngm

3、in)(fngmin)不够明确的方法。用不够明确的方法。用于发展及评价参考方法和一级标准品。于发展及评价参考方法和一级标准品。第四页，共87页。2022/12/54齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2 2参考方法（参考方法（reference methodreference method）是指准是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素扰因素(yn s)(yn s)少，系统误差与重复测定的少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法在度、特异性及较宽

4、的分析范围。这类方法在条件许可的实验室中应经常使用。用于评价条件许可的实验室中应经常使用。用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。第五页，共87页。2022/12/55齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室3 3常规方法（常规方法（routine methodroutine method）指性能指指性能指标符合临床或其他目的标符合临床或其他目的(md)(md)的需要，有足的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。这类方法经有关学术范围，而且经济实用。这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法

5、（组织认可后可称为推荐方法（recommended recommended methodmethod），推荐方法应具有足够的实验证据），推荐方法应具有足够的实验证据第六页，共87页。2022/12/56齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室 三级方法三级方法(fngf)(fngf)的相互关的相互关系系常规常规(chnggu)方法方法参考方法参考方法 决定性方法决定性方法准准确确度度增增加加(zngji)应应用用范范围围增增加加第七页，共87页。2022/12/57齐齐哈尔医学院生化教研室（二）标准（二）标准(biozhn)品的分级品的分级v国际标准化委员会将标准品（参考物）国际标准化委员会将

6、标准品（参考物）的定义为：一类具有一种或多种成分的定义为：一类具有一种或多种成分(chng fn)(chng fn)、且含量均匀确定的物质。、且含量均匀确定的物质。；被用于校正仪器或用于评价一种测定；被用于校正仪器或用于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。方法的物质，并将其分成三级。第八页，共87页。2022/12/58齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（二）标准（二）标准(biozhn)品的分级品的分级1 1一级标准一级标准(biozhn)(biozhn)品（原级参考物，品（原级参考物，primary reference material primary reference mat

7、erial）是一是一种稳定而均一的物质，它的数值已由决种稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法确定，或由高度准确的若干方定性方法确定，或由高度准确的若干方法确定，所含杂质也已经定量，且有证法确定，所含杂质也已经定量，且有证书；用于校正决定性方法，评价及校正书；用于校正决定性方法，评价及校正参考方法以及为二级标准参考方法以及为二级标准(biozhn)(biozhn)品品定值。定值。第九页，共87页。2022/12/59齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2 2二级标准品（次级参考物，二级标准品（次级参考物，secondary secondary reference material re

8、ference material）包括用于常规分析包括用于常规分析的标准液。这类标准品可由实验室自已配制的标准液。这类标准品可由实验室自已配制或为商品，它的示值必须用一级标准品和参或为商品，它的示值必须用一级标准品和参考方法考方法(fngf)(fngf)并由训练有素的，能熟练掌并由训练有素的，能熟练掌握参考方法握参考方法(fngf)(fngf)的操作者确定；主要用的操作者确定；主要用于常规方法于常规方法(fngf)(fngf)的评价或为控制物定值的评价或为控制物定值和常规测定的结果计算。和常规测定的结果计算。第十页，共87页。2022/12/510齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室3 3

9、校准品（校准品（calibratorcalibrator）用二级标准品和常用二级标准品和常规方法测定得到校准品，用于常规测定中的规方法测定得到校准品，用于常规测定中的标准标准4.4.控制物（控制物（control materialcontrol material）具有与检测具有与检测(jin c)(jin c)过程相适应的特性，其成分及基质过程相适应的特性，其成分及基质与检测与检测(jin c)(jin c)样本相同或相似，且均匀、样本相同或相似，且均匀、稳定。稳定。用于质量控制，控制患者样本的测定误差用于质量控制，控制患者样本的测定误差第十一页，共87页。2022/12/511齐齐哈尔医学院

10、生化(shn hu)教研室各级实验方法与参考物的相互各级实验方法与参考物的相互(xingh)关系关系决定性方法决定性方法决定性方法决定性方法用途：评价参考方法用途：评价参考方法用途：评价参考方法用途：评价参考方法及为一级参考物定值及为一级参考物定值及为一级参考物定值及为一级参考物定值一级参考物一级参考物一级参考物一级参考物用途：发展和评价参考方法，用途：发展和评价参考方法，用途：发展和评价参考方法，用途：发展和评价参考方法，校正决定性方法和参考方法，校正决定性方法和参考方法，校正决定性方法和参考方法，校正决定性方法和参考方法，产生二级参考物产生二级参考物产生二级参考物产生二级参考物参考方法参考

11、方法参考方法参考方法用途：为二级参考物及控制物定值，用途：为二级参考物及控制物定值，用途：为二级参考物及控制物定值，用途：为二级参考物及控制物定值，评价常规方法（标准化、偏差、干扰评价常规方法（标准化、偏差、干扰评价常规方法（标准化、偏差、干扰评价常规方法（标准化、偏差、干扰因素）因素）因素）因素）二级参考物二级参考物二级参考物二级参考物用途：常规方法的工作用途：常规方法的工作用途：常规方法的工作用途：常规方法的工作标准及为控制物定值标准及为控制物定值标准及为控制物定值标准及为控制物定值第十二页，共87页。2022/12/512齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室二二 常规方法常规方法(f

12、ngf)(fngf)选择的原则选择的原则v（一）适用性（一）适用性 v微量快速微量快速v方法简便方法简便(jinbin)(jinbin)v安全可靠安全可靠v成本低廉成本低廉v（二）可靠性（二）可靠性v较高精密度、准确度较高精密度、准确度v较好检测范围较好检测范围第十三页，共87页。2022/12/513齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（二）方法选择（二）方法选择(xunz)的步骤的步骤v（一）提出要求（一）提出要求v（二）获取资料（二）获取资料v（三）选定候选方法（三）选定候选方法v（四）候选方法的初步试验（四）候选方法的初步试验(shyn)(shyn)v标准曲线的线性范围和重复性；标

13、准曲线的线性范围和重复性；v重复试验重复试验(shyn)(shyn)精密度；精密度；v对比试验对比试验(shyn)(shyn)准确度；准确度；第十四页，共87页。2022/12/514齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第二节第二节 临床生化临床生化(shn hu)检验检验方法学评价方法学评价v方法学评价（方法学评价（evaluation of evaluation of methodologymethodology）通过）通过(tnggu)(tnggu)实验途径测实验途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否能定分析方法的技术性能，并评价其是否能接受。接受。评价实验的过程就是对误差的测定。

14、评价实验的过程就是对误差的测定。一、方法学评价的意义一、方法学评价的意义(yy)和内容和内容第十五页，共87页。2022/12/515齐齐哈尔医学院生化教研室主要的方法技术性能指标：主要的方法技术性能指标：准确度准确度(accuracy)(accuracy)灵敏度灵敏度(sensitivity)(sensitivity)特异度特异度(specificity)(specificity)分析测量范围分析测量范围(analytical measure range,(analytical measure range,AMR)AMR)评价评价(pngji)(pngji)实验的过程就是对误差实验的过程就是

15、对误差的测定。的测定。第十六页，共87页。2022/12/516齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室1.1.确定方法的质量目标确定方法的质量目标2.2.选定及进行适当的揭示分析误差类选定及进行适当的揭示分析误差类型的实验型的实验3.3.收集试验数据收集试验数据(shj)(shj)，进行统计，进行统计学分析学分析4.4.判断方法判断方法 的可接受性的可接受性二、方法学评价的基本二、方法学评价的基本(jbn)步骤步骤第十七页，共87页。2022/12/517齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室三、误差三、误差(wch)的分类和表示的分类和表示1.系统误差（系统误差（SE）定义：定义：指测定

16、值与真值存在的同一倾向的偏差。指测定值与真值存在的同一倾向的偏差。系统误差或正或负，即具有单向性，一般系统误差或正或负，即具有单向性，一般由恒定由恒定(hngdng)的因素引起，并在一定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。条件下多次测定中重复出现。第十八页，共87页。2022/12/518齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室三、误差的分类三、误差的分类(fn li)和表示和表示2.系统误差分类系统误差分类(fn li)恒定系统误差（恒定系统误差（CE）指测定值与真值之间存在恒定的误指测定值与真值之间存在恒定的误差，其大小与干扰物浓度相关，而与被差，其大小与干扰物浓度相关，而与被测

17、物浓度无关。测物浓度无关。比例系统误差（比例系统误差（PE）误差大小与被测物浓度成正比。误差大小与被测物浓度成正比。第十九页，共87页。2022/12/519齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室三、误差三、误差(wch)的分类和表示的分类和表示3.随机误差（随机误差（RE）定义：定义：多次重复测定某一物质时出现的误差，多次重复测定某一物质时出现的误差，误差无一定的大小误差无一定的大小(dxio)和方向，数和方向，数据呈正态分布。据呈正态分布。第二十页，共87页。2022/12/520齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室 误差误差(wch)(wch)类型类型示意图示意图比较方法结果比较方

18、法结果试试验验方方法法结结果果比例系统误差比例系统误差恒定系恒定系统误差统误差随机误差第二十一页，共87页。2022/12/521齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室揭示揭示(jish)(jish)误差类型的实验误差类型的实验 误差类别误差类别 实验实验随机误差（随机误差（RERE）重复性重复性 比例误差（比例误差（PEPE）回收回收 恒定误差（恒定误差（CECE）干扰干扰 系统误差（系统误差（SESE）方法对比方法对比总误差总误差 （TETE）重复性和方法重复性和方法对比对比第二十二页，共87页。2022/12/522齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室一、方法(fngf)评价方案v

19、（一）精密度评价1目的要求 v反映(fnyng)精密度好坏的指标是变异系数CV，CV越小精密度越好，反之则差，故有人称其为不精密度。v变异系数CV包括：批内、批间、日间和总CV，其中总CV最重要，它代表整个分析体系的可重复程度。第二十三页，共87页。2022/12/523齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2评价前的准备 v对于评价对象和评价方案均应熟悉。v实验试剂应是同批次配制，或同一批号的商品试剂盒和参考物，仪器也应处于良好的工作状态v实验用标本一般选择2个（亦可更多），一个在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值，实验标本的介质(jizh)应与临床标本一致。v先作一个初步的批

20、内精密度测定，即一个标本重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数第二十四页，共87页。2022/12/524齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v3评价步骤 用2个标本每天测定2次（2次测定间隔不得(bu de)少于2小时），每次测定均作双份，共测定20天。每次测定至少做一个质控。第二十五页，共87页。2022/12/525齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（二）准确度评价(pngji)v1 1方法比较方法比较(bjio)(bjio)试验试验 v将试验方法（待评价或待验证的方法）与比将试验方法（待评价或待验证的方法）与比较较(bjio)(bjio)方法（参考方法或准确度已知的方法

21、（参考方法或准确度已知的方法）进行比较方法）进行比较(bjio)(bjio)，用于评价试验方，用于评价试验方法的恒定和比例系统误差。法的恒定和比例系统误差。第二十六页，共87页。2022/12/526齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（二）准确度评价（二）准确度评价(pngji)v1 1方法比较试验方法比较试验 v(1)(1)要求要求 比较方法应是参考方法或推荐方比较方法应是参考方法或推荐方法，如该测定没有参考方法或推荐方法亦法，如该测定没有参考方法或推荐方法亦可用公认的常规可用公认的常规(chnggu)(chnggu)方法。方法。v但须具备：但须具备：v比较试验方法有更好的精密度。比较

22、试验方法有更好的精密度。v干扰影响已知。干扰影响已知。v与试验方法使用相同的计算单位。与试验方法使用相同的计算单位。第二十七页，共87页。2022/12/527齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v(2)(2)比较前准备比较前准备 v实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比实验者应熟悉所用的仪器、试验方法、比较方法和评价方案。较方法和评价方案。v实验标本应收集新鲜的正常实验标本应收集新鲜的正常(zhngchng)(zhngchng)和异常的临床标本，应有足够宽的浓度范围，和异常的临床标本，应有足够宽的浓度范围，各浓度应有合适的比例。如不能及时测定，各浓度应有合适的比例。如不能及时测定，标本应妥

23、善保存并应在分析物的稳定期内测标本应妥善保存并应在分析物的稳定期内测定。定。第二十八页，共87页。2022/12/528齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v(3)(3)方法比较步骤方法比较步骤 v样本数至少为样本数至少为4040个标本，每个标本用个标本，每个标本用2 2种种方法分别作双份测定方法分别作双份测定(cdng)(cdng)，如临床标本，如临床标本的量太少可将的量太少可将2 2份含量相近的标本混合。份含量相近的标本混合。v每天测定每天测定(cdng)8(cdng)8个标本，双份测定个标本，双份测定(cdng)(cdng)时第一次按顺序时第一次按顺序1 1，2727，8 8，第，第

24、二次二次8 8，7272，1 1，共测试，共测试5 5天。天。第二十九页，共87页。2022/12/529齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室结果分析结果分析(fnx)(fnx)(1)(1)作图分析作图分析(fnx)1)(fnx)1)差异分析差异分析(fnx)(fnx)2)2)对比分析对比分析(fnx)(fnx)差异图差异图:Y Y轴轴:试验方法与比较方法之差试验方法与比较方法之差 X X轴轴:比较方法的测定值比较方法的测定值 对比图对比图:Y Y轴轴:试验方法测定值试验方法测定值 X X轴轴:比较方法的测定值比较方法的测定值第三十页，共87页。2022/12/530齐齐哈尔医学院生化(s

25、hn hu)教研室差异差异(chy)分析图分析图对比对比(dub)分析图分析图比较方法结果零线差异（试验比较）比较方法结果测定方法结果第三十一页，共87页。2022/12/531齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2 2回收试验回收试验 所谓回收即分析方法正确所谓回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。目的是测定比例系统误差，以衡能力。目的是测定比例系统误差，以衡量候选方法的准确度。量候选方法的准确度。（1 1）方法：将被分析的纯品标准液加入）方法：将被分析的纯品标准液加入样品中，成为分析样品，原样品加入同样品中，成为分析样品，原样品加

26、入同量的无分析物的溶液作基础样品，然后量的无分析物的溶液作基础样品，然后(rnhu)(rnhu)用实验方法分析，两者测定结用实验方法分析，两者测定结果的差值为回收量。果的差值为回收量。第三十二页，共87页。2022/12/532齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v（2 2）回收率计算：理想的回收率为）回收率计算：理想的回收率为100%100%，如某法测血钙的回收率为，如某法测血钙的回收率为95.7%95.7%，有，有4.3%4.3%的比例误差的比例误差(wch)(wch)，表明一个含钙，表明一个含钙真值为真值为2.5mmol/l2.5mmol/l的标本的标本,若用该方法测定若用该方法测定

27、,约为约为2.39mmol/l(2.595.79%)2.39mmol/l(2.595.79%)，误差，误差(wch)(wch)为为0.11mmol/L(2.54.3%)0.11mmol/L(2.54.3%)。第三十三页，共87页。2022/12/533齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v（3 3）注意事项：）注意事项：准确吸量准确吸量,因为被分析因为被分析物的理论值是根据加入标准液体积及原样品物的理论值是根据加入标准液体积及原样品的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响的体积计算所得，吸量稍有不准，就会影响结果；结果；样品中加入标准液后样品中加入标准液后,总的浓度总的浓度必须在方法的分析范

28、围内，一般须加入高、必须在方法的分析范围内，一般须加入高、中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收中、低不同浓度做回收试验，计算平均回收率；率；加入标准液后，最好使实验样品的加入标准液后，最好使实验样品的被测浓度达到医学决定浓度；被测浓度达到医学决定浓度；加入标准加入标准液的体积一般在液的体积一般在10%10%以内。若稀释过大，误以内。若稀释过大，误差将发生改变差将发生改变(gibin)(gibin)，甚至消失。，甚至消失。第三十四页，共87页。2022/12/534齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（三）线性评价（三）线性评价(pngji)v1 1目的要求目的要求 线性范围是分析方法的一

29、个线性范围是分析方法的一个重要重要(zhngyo)(zhngyo)技术指标，它能判断对某技术指标，它能判断对某一分析方法测得的浓度或活性值与设定的一分析方法测得的浓度或活性值与设定的浓度或活性值之间的比例关系的范围。常浓度或活性值之间的比例关系的范围。常规方法应具有较宽的分析范围，一般应覆规方法应具有较宽的分析范围，一般应覆盖临床可能出现的高值。盖临床可能出现的高值。第三十五页，共87页。2022/12/535齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2 2评价前准备评价前准备 v熟悉仪器、评价方案和试剂。熟悉仪器、评价方案和试剂。v评价标本的介质应与实际测定的标本评价标本的介质应与实际测定的

30、标本相一致，理想的标本是病人相一致，理想的标本是病人(bngrn)(bngrn)的的低值或高值标本，这往往不易收集到，低值或高值标本，这往往不易收集到，亦可用病人亦可用病人(bngrn)(bngrn)的混合标本加入分的混合标本加入分析物作为高值标本，用正常人标本作为析物作为高值标本，用正常人标本作为低值标本。低值标本。v浓度范围应以分析项目的线性要求为浓度范围应以分析项目的线性要求为准。准。第三十六页，共87页。2022/12/536齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v线性评价应有线性评价应有5 5个不同个不同(b tn)(b tn)浓度，浓度，可选择低值和高值标本各一个，低值标可选择低

31、值和高值标本各一个，低值标本为本为1 1号，高值标本为号，高值标本为5 5号，二者号，二者3 3：1 1混混匀为匀为2 2号，等份混匀为号，等份混匀为3 3号，号，1 1：3 3混匀为混匀为4 4号，号，2-42-4号标本的浓度按下式计算：号标本的浓度按下式计算：标本浓度标本浓度=（C1V1+C5V5C1V1+C5V5）/（V1+V1+V5V5）vC C：浓度，：浓度，V V：体积。：体积。第三十七页，共87页。2022/12/537齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室（四）干扰（四）干扰(gnro)试验试验v1 1目的要求目的要求 v判断评价方法给出的结果是否受非分析物判断评价方法给出的

32、结果是否受非分析物影响及影响程度。影响及影响程度。v干扰是指在测定某分析物的浓度或活性干扰是指在测定某分析物的浓度或活性时，受另一非分析物影响而导致测定结果时，受另一非分析物影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。增高（正干扰）或降低（负干扰）。v干扰物质可分为内源性（标本中存在的）干扰物质可分为内源性（标本中存在的）和外源性（外界和外源性（外界(wiji)(wiji)污染的）两类。污染的）两类。第三十八页，共87页。2022/12/538齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室干扰的机理，可有物理作用、化学作用干扰的机理，可有物理作用、化学作用以及非特异反应等。以及非特异反应等。干

33、扰可能是造成误差的一个重要原因，干扰可能是造成误差的一个重要原因，如果干扰物是恒定的将引起恒定误差，如果干扰物是恒定的将引起恒定误差，如干扰物随病理生理因素影响，将引起如干扰物随病理生理因素影响，将引起随机误差。随机误差。因此，实验室应了解各种因此，实验室应了解各种(zhn)测定测定方法的干扰情况方法的干扰情况 第三十九页，共87页。2022/12/539齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v2 2试验前准备试验前准备v 应做的主要干扰物为病人标本中常常出应做的主要干扰物为病人标本中常常出现的黄疸，脂血和溶血；某些药物如维生现的黄疸，脂血和溶血；某些药物如维生素素C C等；实验常用等；实验

34、常用(chn yn)(chn yn)的抗凝剂，的抗凝剂，防腐剂和稳定剂。防腐剂和稳定剂。v质量保证，不存在系统误差；批内精密质量保证，不存在系统误差；批内精密度在可接受范围内；应不存在前后结果的度在可接受范围内；应不存在前后结果的交叉污染；实验过程有质控监督。交叉污染；实验过程有质控监督。第四十页，共87页。2022/12/540齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室v3 3干扰试验方法干扰试验方法 (1)(1)配对差异配对差异(chy)(chy)试验试验:即将不同浓即将不同浓度的干扰物加入到实验标本中，然后分别度的干扰物加入到实验标本中，然后分别测定加与不加干扰物的标本，比较二者有测定加与

35、不加干扰物的标本，比较二者有无偏差，并了解干扰物浓度与偏差程度的无偏差，并了解干扰物浓度与偏差程度的关系。关系。(2)(2)用病人标本作偏差分析用病人标本作偏差分析:第四十一页，共87页。2022/12/541齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第三节第三节 方法学评价实验方法学评价实验(shyn)（举例）（举例）v一、批内重复性实验一、批内重复性实验v重复性试验依据重复性试验依据(yj)(yj)时间间隔可分为时间间隔可分为批内、天内、天间三种重复性试验。方法批内、天内、天间三种重复性试验。方法学评价重复性试验应由实验者作批内学评价重复性试验应由实验者作批内(或或天内天内)及天间重复性试验

36、。及天间重复性试验。第四十二页，共87页。2022/12/542齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【目的(md)与要求】v掌握方法学重复性实验的设计原理和基本(jbn)方法及统计分析；v熟悉重复性实验的注意事项和评价标准。客观评价GOD-POD法测血糖随机误差的大小。第四十三页，共87页。2022/12/543齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【原理(yunl)】v批内重复性试验是指在相同条件下对同批内重复性试验是指在相同条件下对同一标本在尽可能短的时间内进行一标本在尽可能短的时间内进行m m轮，每轮，每轮轮n n次重复测定，以获得批内精密度数据次重复测定，以获得批内精密度数据的试

37、验方法。其结果能反映各次测定结果的试验方法。其结果能反映各次测定结果相互接近的程度相互接近的程度(chngd)(chngd)，用于客观评，用于客观评价价GOD-PODGOD-POD法测血糖随机误差的大小。法测血糖随机误差的大小。【操作步骤】【操作步骤】将血清标本用将血清标本用GOD-PODGOD-POD法作法作5 5轮，每轮轮，每轮4 4次次血糖测定，即可获得血糖测定，即可获得2020个测定数据。个测定数据。第四十四页，共87页。2022/12/544齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【结果(ji gu)计算】v1 1检验检验2020次测定数据次测定数据(shj)(shj)中的离群值中的

38、离群值（用（用GrubbsGrubbs检验准则，检验离群值检验准则，检验离群值 ）v2 2按照批内精密度的计算公式计算按照批内精密度的计算公式计算5 5轮每轮轮每轮4 4次测定值的平均数次测定值的平均数()()、标准差、标准差(S)(S)和变和变异系数异系数(CV%)(CV%)。第四十五页，共87页。2022/12/545齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第四十六页，共87页。2022/12/546齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第四十七页，共87页。2022/12/547齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【评价(pngji)标准】v如试验求得的血清葡萄糖如试验求得的血清葡

39、萄糖GOD-PODGOD-POD测定测定法的法的CVCV值值WHOWHO对中等实验室提出的对中等实验室提出的OCV(3%)OCV(3%)标准，即表明实验条件的控制标准，即表明实验条件的控制达到最佳条件，试验结果可按达到最佳条件，试验结果可按OCV%OCV%报告。报告。作为方法作为方法(fngf)(fngf)探讨实验，其变异系探讨实验，其变异系数应该数应该OCVOCV标准。标准。第四十八页，共87页。2022/12/548齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【注意事项】v1.1.血糖的医学决定水平值为血糖的医学决定水平值为2.82.8、6.76.7、8.9mmol/L8.9mmol/L。分析

40、物浓度应选择医学决定水平值。分析物浓度应选择医学决定水平值才更具价值。才更具价值。2.2.为了缩小测定值的离散程度，操作中必须准为了缩小测定值的离散程度，操作中必须准确加入标准液及标本量，并严格控制反应时间，确加入标准液及标本量，并严格控制反应时间，准确读数。准确读数。3 3计算批内标准差计算批内标准差(Sw)(Sw)时不可误用时不可误用(w yn)(w yn)连续测定精密度的统计学公式。否则会使连续测定精密度的统计学公式。否则会使SwSw的的估计值明显偏低。估计值明显偏低。第四十九页，共87页。2022/12/549齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【思考题】v1.1.重复性试验依据时

41、间间隔可分为几种重复性试验依据时间间隔可分为几种？哪种最符合临床实际？哪种最符合临床实际？2.2.重复性试验结果反映了什么误差？重复性试验结果反映了什么误差？3.3.方法评价的批内重复性试验在标本浓方法评价的批内重复性试验在标本浓度、样本数、测试方法及统计度、样本数、测试方法及统计(tngj)(tngj)方方法方面有什么要求？法方面有什么要求？第五十页，共87页。2022/12/550齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室二、回收(hushu)试验v回收即分析方法正确测定加入常规分析回收即分析方法正确测定加入常规分析样品中的纯分析物的能力。用于测定实样品中的纯分析物的能力。用于测定实验方法的

42、比例系统误差。这种误差常随验方法的比例系统误差。这种误差常随分析物的浓度增加而增加，常因样品中分析物的浓度增加而增加，常因样品中其它物质与分析物竞争分析试剂并与之其它物质与分析物竞争分析试剂并与之发生反应发生反应(fnyng)而引起。而引起。第五十一页，共87页。2022/12/551齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【目的(md)与要求】v掌握方法学回收掌握方法学回收(hushu)(hushu)实验的设计原理实验的设计原理和基本方法及统计分析；和基本方法及统计分析；v熟悉回收熟悉回收(hushu)(hushu)实验的注意事项和评价实验的注意事项和评价标准。客观评价标准。客观评价GOD-

43、PODGOD-POD法测血糖比例系统法测血糖比例系统误差的大小。误差的大小。第五十二页，共87页。2022/12/552齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【原理(yunl)】v回收试验是发现分析方法比例系统误差回收试验是发现分析方法比例系统误差的有效的有效(yuxio)(yuxio)评价方法。通过测定评价方法。通过测定GOD-PODGOD-POD法测血糖的回收率，能较确切地法测血糖的回收率，能较确切地判断该分析方法比例系统误差的有无或大判断该分析方法比例系统误差的有无或大小，可以对方法的准确性作出可靠评价。小，可以对方法的准确性作出可靠评价。第五十三页，共87页。2022/12/553齐

44、齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【操作步骤】v1 1样品制备样品制备基础样品：血清基础样品：血清0.9ml+0.1ml0.9ml+0.1ml生理盐水。生理盐水。回收样品回收样品：血清：血清0.9ml0.9ml0.01ml 80mmol/L0.01ml 80mmol/L葡葡萄糖标准液萄糖标准液 0.09ml 0.09ml生理盐水。生理盐水。回收样品回收样品：血清：血清0.9ml0.9ml0.06ml 80mmol/L0.06ml 80mmol/L葡葡萄糖标准液萄糖标准液 0.04ml 0.04ml生理盐水。生理盐水。回收样品回收样品：血清：血清0.9ml0.9ml0.09ml 80mmol

45、/L0.09ml 80mmol/L葡葡萄糖标准液萄糖标准液 0.01 0.01生理盐水。生理盐水。2 2血糖浓度血糖浓度(nngd)(nngd)测定测定 按按GOD-PODGOD-POD法测定法测定各制备样品的血糖浓度各制备样品的血糖浓度(nngd)(nngd)，每份样品作，每份样品作双份检测，结果取平均值。双份检测，结果取平均值。第五十四页，共87页。2022/12/554齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【结果(ji gu)计算】第五十五页，共87页。2022/12/555齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室第五十六页，共87页。2022/12/556齐齐哈尔医学院生化(shn

46、hu)教研室【注意事项】v1 1分析物浓度应选择医学分析物浓度应选择医学(yxu)(yxu)决定水平，决定水平，血糖测定的医学血糖测定的医学(yxu)(yxu)决定水为平决定水为平2.82.8、6.76.7、8.9mmol/L8.9mmol/L。2 2纯标准品溶液的加入体积不得超过血清纯标准品溶液的加入体积不得超过血清样品的样品的10%10%，避免将血清稀释过度，引起误，避免将血清稀释过度，引起误差的改变或消失。差的改变或消失。3 3准确加量是最主要的技术关键。准确加量是最主要的技术关键。第五十七页，共87页。2022/12/557齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【结果(ji gu)判

47、断】v一般检验方法要求回收率在一般检验方法要求回收率在95%-105%95%-105%之之间，最为理想的回收率应是间，最为理想的回收率应是100%100%。【思考题】【思考题】1.1.什么叫回收试验？在回收试验的样品什么叫回收试验？在回收试验的样品制备中应注意制备中应注意(zh y)(zh y)哪些事项？哪些事项？2.2.回收试验反映的是方法的哪种误差？回收试验反映的是方法的哪种误差？3.3.回收率怎样计算？回收率怎样计算？第五十八页，共87页。2022/12/558齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室三、干扰(gnro)试验v干扰试验用于测定某物质加到样品中产干扰试验用于测定某物质加到样

48、品中产生生(chnshng)的系统误差，干扰物浓度的系统误差，干扰物浓度一定时，产生一定时，产生(chnshng)的误差是恒定的误差是恒定系统误差，误差的实际大小随干扰物的系统误差，误差的实际大小随干扰物的浓度而异。干扰试验既用于检测某方法浓度而异。干扰试验既用于检测某方法的特异性，也用于检测干扰物质对方法的特异性，也用于检测干扰物质对方法的干扰作用，以评价分析方法的准确性。的干扰作用，以评价分析方法的准确性。第五十九页，共87页。2022/12/559齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【目的(md)与要求】v掌握方法学干扰实验的设计原理和基本方掌握方法学干扰实验的设计原理和基本方法及统

49、计分析；法及统计分析；v熟悉干扰实验的注意事项和评价标准。客熟悉干扰实验的注意事项和评价标准。客观评价观评价GOD-PODGOD-POD法测血糖法测血糖(xutng)(xutng)恒定系恒定系统误差的大小。统误差的大小。第六十页，共87页。2022/12/560齐齐哈尔医学院生化(shn hu)教研室【原理(yunl)】v干扰试验是测定特异性和干扰二者引起的误差。干扰试验是测定特异性和干扰二者引起的误差。在具体方法学评价实验中，首先要确定被试可疑在具体方法学评价实验中，首先要确定被试可疑物质是否引起误差；若能引起误差，再进一步探物质是否引起误差；若能引起误差，再进一步探讨其误差的来源是因方法特

50、异性差还是干扰，若讨其误差的来源是因方法特异性差还是干扰，若加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，这加入的物质本身和分析试剂反应并产生读数，这是特异性差，若加入物质并不与分析试剂反应，是特异性差，若加入物质并不与分析试剂反应，但它改变了分析物和分析试剂间的反应，这是干但它改变了分析物和分析试剂间的反应，这是干扰。本实验选用尿酸做扰。本实验选用尿酸做GOD-PODGOD-POD法测血糖的干扰法测血糖的干扰试验，尿酸可以和试验，尿酸可以和GODGOD反应生成反应生成(shn chn)(shn chn)的的H2O2H2O2发生反应，使部分发生反应，使部分H2O2H2O2不能参与第二步不能参与第二步