医学科研入门-科研项目的策划与实施.ppt
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1、医学科学研究入门医学科学研究入门李卓娅李卓娅(3)科研项目的策划与实施科研项目的策划与实施科研项目的策划与实施科研项目的策划与实施研究计划的安排研究计划的安排科研准备工作和实验室安全科研准备工作和实验室安全实验的实施实验的实施机遇机遇灵感灵感组织策划组织策划PI(principal Investigator)负责制负责制分成若干课题组分成若干课题组2-3个研究生完成个研究生完成1个项目个项目制定并遵守实验室规则制定并遵守实验室规则定期定期Lab Meeting:进展、开题报告、文献综述、:进展、开题报告、文献综述、学术讨论学术讨论 跟踪课题进展;及时解决问题;提高工作效率跟踪课题进展;及时解决
2、问题;提高工作效率 定期向导师汇报:进展、问题、下步计划定期向导师汇报:进展、问题、下步计划Journal Club积极参加学术交流积极参加学术交流午餐(茶)聚会午餐(茶)聚会学术讨论学术讨论 旁人可能提出有益的建议,即使并未直接指出摆脱困境的解决方法,但由于知识背景不同,可能从不同角度观察问题并提出新方法。(琼脂)一个新设想可能由两三个人集中各自的知识或设想而产生。讨论是披露谬误的宝贵方法。以错误知识或推理为基础的设想可以通过讨论得到及时的纠正。讨论和学术交流是开拓思路、了解进展和信息交流的极好机会。讨论有益于摆脱重复不利的思路。与不熟悉本研究领域的人进行讨论,可能对打破固定思路更有帮助。(
3、请教外行)个人科研计划安排个人科研计划安排开题报告:题目名称、背景、目的、研究内容、技术路线、实验方案、研究进度安排、预测结果、可行性分析研究时间(进度)计划安排:-总体时间安排:年度与学期安排 -详细时间安排:月、周计划(充分利用时间)注意:提前半年至一年撰写并发表SCI论文中期科研报告:主要结果、存在问题和后续工作计划至少预留1-2个月的时间撰写学位论文博士生个人计划学期安排博士生个人计划学期安排第一学期:上课;查阅课题相关文献;做课题相关综述;完成开题报告(科研设计和计划);具体的方法学、数据等书面准备工作。第二至四学期:试剂、器材准备工作;方法学的摸索;预试和正式实验、中期科研报告;第
4、五学期:继续实验;撰写并发表SCI文章第六学期:补充实验;撰写学位论文并答辩;第二至三学期、四至五学期各完成一篇论文。科研项目的策划与实施科研项目的策划与实施研究计划的安排研究计划的安排科研准备工作和实验室安全科研准备工作和实验室安全实验的实施实验的实施机遇机遇灵感灵感科研实施原则科研实施原则充分的准备工作,包括实验设计、实验材料、实验方法及观察指标等;制定操作规程,包括实验方案、操作程序、质量控制、仪器设备、标准化及标准操作规程等;规范原始记录,包括数据记录的准确性、完整性及更改数据的规范性,尤其是数据记录的原始性,牢记书面记录乃行为发生的凭证;审核监督,包括课题负责人对课题的监督管理、定期
5、检查和结果分析等。充分的准备充分的准备-书面准备工作书面准备工作 实验方案及技术路线的设计确定可靠稳定的实验操作方法:确定实验体系;设立实验对照;选择质量控制标准(如系统误差允许范围、随机误差降到最低等);选择实验器材;实验流程的可控性;判断标准的客观性实验材料的明细准备:书面汇集实验所需材料的名称、生产厂家、批号、规格及有效期等信息,同时查询各类试剂的配方、配制方法和保存条件等。上述信息有利于实验前准备,也有利于今后检索。实验分组的确定 充分的准备充分的准备-实验准备实验准备实验材料与器材的准备;基本操作的训练:试剂的配制和储存、试剂的标记和分类 样品的处理、标记、分装和储存 pH值的测定与
6、调节、蛋白定量、核酸定量 加样器的正确使用 实验室常规仪器的正确使用;基本方法学的训练:细胞培养(冻存和复苏)、分子生物学、Western blot、FACS、免疫荧光与组化、ELISA实验室的安全实验室的安全水电煤气的安全性水电煤气的安全性 用电设备的安全操作用电设备的安全操作 玻璃仪器的安全使用玻璃仪器的安全使用 氧气瓶的安全使用氧气瓶的安全使用 高压锅的安全使用高压锅的安全使用 高温烤箱的安全使用高温烤箱的安全使用 化学试剂的安全使用化学试剂的安全使用使用易燃易爆试剂(如乙醇、乙醚等)须远离明火。使用易燃易爆试剂(如乙醇、乙醚等)须远离明火。挥发性有毒试剂一般须在通风厨中操作,且操作者挥
7、发性有毒试剂一般须在通风厨中操作,且操作者须进行相应防护(如戴口罩)。须进行相应防护(如戴口罩)。接触性有毒试剂应戴手套操作,并避免用嘴吸或直接触性有毒试剂应戴手套操作,并避免用嘴吸或直接用手触摸。接用手触摸。各种化学试剂均远离食品饮料,以防误食引起中毒。各种化学试剂均远离食品饮料,以防误食引起中毒。强酸、强碱类试剂须规范使用,不可过分震摇,以强酸、强碱类试剂须规范使用,不可过分震摇,以防溅出腐蚀伤人。防溅出腐蚀伤人。放射性同位素的安全防护放射性同位素的安全防护 同位素的射线类型:X射线和射线可危害人体全身多个器官;射线因其穿透性小,仅危害皮肤浅表和眼晶体;射线一般不引起外照射危害 使用放射性
8、物质的注意事项:放射性同位素的实验操作须在同位素乙级实验室中进行;放射性物质的存放方式要符合射线类型特点;放射性物质的标记须清晰,包括名称、含量及时间;放射性废物须按规定进行存放和处理;放射性实验的操作须进行相应屏蔽防护并在专门实验室中进行;放射性核素使用过程中对周围环境造成的污染须及时被处理;同位素实验室应配置放射性核素监测仪。生物的安全防护生物的安全防护 P1:普通实验一般在I级实验室中操作;P2:枯草杆菌、大肠杆菌、腺病毒等须在P2级实验室操作,并有防蚊要求;P3:烈性传染病相关病原研究须在P3实验室中操作;P4:烈性传染病的大动物模型实验须在P4级实验室中操作。P3和P4级实验室均须经
9、国家级管理部门认证。科研项目的策划与实施科研项目的策划与实施研究计划的安排研究计划的安排科研准备工作和实验室安全科研准备工作和实验室安全实验的实施实验的实施机遇机遇灵感灵感实验的实施实验的实施预实验:预实验:方法的熟悉;实验条件的摸索方法的熟悉;实验条件的摸索正式试验:正式试验:实验条实验条件和操作标准化,设件和操作标准化,设计必要的对照,保证重复性,满足统计计必要的对照,保证重复性,满足统计学的样本数。学的样本数。实验记录实验记录的正确书写和实验数据记录的的正确书写和实验数据记录的保存保存实验结果的正确观察、分析和判断实验结果的正确观察、分析和判断。预实验的目的预实验的目的在正式实验前所进行
10、的小规模实验。在正式实验前所进行的小规模实验。检查各项准备工作是否完善;检查各项准备工作是否完善;确定实验操作方法是否正确可行确定实验操作方法是否正确可行 ;获得某些基础数据,确定合适的样本数和必获得某些基础数据,确定合适的样本数和必要的统计学数据,以确保后续正式实验的顺利要的统计学数据,以确保后续正式实验的顺利进行;进行;摸索最佳实验条件;摸索最佳实验条件;初步检验假说。初步检验假说。某课题在观察基因修饰的骨髓干细胞对Fischer 344大鼠骨髓重建影响的研究中,研究者仅参照文献报道中其他品系大鼠及小鼠骨髓抑制模型在建模时使用的钴60照射剂量,确定了照射方案,未经预实验而直接开始正式实验。
11、结果在随后“正式”实验中,因所选照射剂量不适合该品系鼠,多数模型鼠在极短时间内死亡,故无法观察处理因素产生的效应结果。预实验预实验实验方法的摸索:选择正确的实验技术(文献实验方法的摸索:选择正确的实验技术(文献或实验方法书)或实验方法书)详细阅读说明书详细阅读说明书参观他人参观他人做实验,并记下笔记做实验,并记下笔记自己写试验步骤自己写试验步骤配试配试剂和实验材料、器具的准备剂和实验材料、器具的准备做实验。做实验。摸索条件的试验:如药物剂量的摸索、作用时摸索条件的试验:如药物剂量的摸索、作用时间的摸索等。间的摸索等。导向性实验:小规模试验验证正式实验的意义。导向性实验:小规模试验验证正式实验的
12、意义。筛选性试验:如药物筛选,用以决定哪种药物筛选性试验:如药物筛选,用以决定哪种药物可进一步做实验。可进一步做实验。观测性实验:是为搜集正式实验所需数据(如观测性实验:是为搜集正式实验所需数据(如均数、标准差及变异系数等)而进行的小规模均数、标准差及变异系数等)而进行的小规模预试,目的是对主要实验的部署进行指导。预试,目的是对主要实验的部署进行指导。以传染或毒性因子为例,在观测实验中,采用稀释度间隔很大(如100倍),用于每一稀释度的动物很少(如两头)的策略。取得结果后,在可能有作用的滴定终点两侧再选择间隔小(如5倍)的稀释度,同时使用较大数量的动物(如5只)。通过此方法,可用最少量动物而获
13、得准确的结果。实验的实施实验的实施预实验:预实验:方法的熟悉;实验条件的摸索方法的熟悉;实验条件的摸索正式试验:正式试验:实验条实验条件和操作标准化,设件和操作标准化,设计必要的对照,保证重复性,满足统计计必要的对照,保证重复性,满足统计学的样本数。学的样本数。实验记录实验记录的正确书写和实验数据记录的的正确书写和实验数据记录的保存保存实验结果的正确观察、分析和判断实验结果的正确观察、分析和判断。正式实验正式实验决定性试验:判断假说的成立与否决定性试验:判断假说的成立与否根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过程严格控制试验条件,一般不能随便改变,已程严
14、格控制试验条件,一般不能随便改变,已避免试验结果的不可比。避免试验结果的不可比。实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀释等)释等)设计各种必要的对照设计各种必要的对照做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)必须满足统计学分析的足够样本数必须满足统计学分析的足够样本数Nat Immunol.2004 Nov;5(11):1124-33.正式实验正式实验决定性试验:判断假说的成立与否决定性试验:判断假说的成立与否根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过程严格控制试验条件,一般不能随
15、便改变,已程严格控制试验条件,一般不能随便改变,已避免试验结果的不可比。避免试验结果的不可比。实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀释、仪器型号和参数等)释、仪器型号和参数等)设计各种必要的对照设计各种必要的对照做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)必须满足统计学分析的足够样本数必须满足统计学分析的足够样本数实实 验验 误误 差差系统误差:指一系列测定结果与真值之间系统误差:指一系列测定结果与真值之间存在同一倾向的误差,有明显规律性,可存在同一倾向的误差,有明显规律性,可在一定条件下被重复,可通过质控预防和在一定条
16、件下被重复,可通过质控预防和校正。(千分卡尺测量肿瘤)校正。(千分卡尺测量肿瘤)随机误差:属一种偶然、无法预料的误差,随机误差:属一种偶然、无法预料的误差,难以校正。难以校正。过失误差:纯粹属人为的责任误差,一般过失误差:纯粹属人为的责任误差,一般通过实验室管理和技术培训可以避免。通过实验室管理和技术培训可以避免。控制实验方法质量的关键是规范意识控制实验方法质量的关键是规范意识 !实验操作规程的规范化实验操作规程的规范化 实验方法标准化的策略应首先明确实验方法标准化的策略应首先明确(尤其对某些新的观察尤其对某些新的观察指标指标)规定标准化方法的流程,然后制定标准实验操作规程,规定标准化方法的流
17、程,然后制定标准实验操作规程,对各个环节进行细化处理,保证实验人员可以不用询问即可对各个环节进行细化处理,保证实验人员可以不用询问即可遵照执行。遵照执行。实验名称,对于具体课题的实验操作,名称应是特异性和实验名称,对于具体课题的实验操作,名称应是特异性和具体的,勿仅标示通用性实验名称;具体的,勿仅标示通用性实验名称;实验目的;实验目的;实验方法;实验方法;实验流程,指在实验目的指导下的特定流程,每个具体步实验流程,指在实验目的指导下的特定流程,每个具体步骤均应详细注明实验中实际应用的试剂名称或剂量等,避免骤均应详细注明实验中实际应用的试剂名称或剂量等,避免通用性的实验流程;通用性的实验流程;实
18、验材料及仪器设备等。实验材料及仪器设备等。标准物的选择:为建立标准实验体系,选择标准品,并在预实验中利用标准品确定各种实验条件(包括最佳剂量、最佳时间和判断标准等)。然后,以此数据作为测试样品的标准定量或定性参数。(蛋白定量、信号分子磷酸化)操作程序的控制:建立标准操作流程,实验操作人员仅进行机械性操作,无需任何想象、设计和预测,故要求在操作之间制定严密的操作流程和设计方案。(随机性是造成实验误差的最常见原因,如电话及其它无关事情的干扰;协调标准化和灵活性)试剂仪器的选择:实验过程中应采用同一厂商相同批号或相同规格的试剂,以基本保证不同批次实验的差异并非由试剂所致。仪器规格、型号也可能影响实验
19、。实验操作规程的规范化实验操作规程的规范化正式实验正式实验决定性试验:判断假说的成立与否决定性试验:判断假说的成立与否根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过根据预试验结果,选定实验条件,整个实验过程严格控制试验条件,一般不能随便改变,已程严格控制试验条件,一般不能随便改变,已避免试验结果的不可比。避免试验结果的不可比。实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀实验方法的标准化(步骤、试剂配制、浓度稀释等)释等)设计各种必要的对照设计各种必要的对照做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)做好标签工作(老鼠、组织、切片、试管)必须满足统计学分析的足够样本数必须满足统计学分析的足够样本数实验的实施实验
20、的实施预实验:预实验:方法的熟悉;实验条件的摸索方法的熟悉;实验条件的摸索正式试验:正式试验:实验条实验条件和操作标准化,设件和操作标准化,设计必要的对照,保证重复性,满足统计计必要的对照,保证重复性,满足统计学的样本数。学的样本数。实验记录实验记录的正确书写和实验数据记录的的正确书写和实验数据记录的保存保存实验结果的正确观察、分析和判断实验结果的正确观察、分析和判断。实验记录的意义利于总结工作并寻找实验中的差错。实验记录均须归档保存。利于总结工作并寻找实验中的差错。实验记录均须归档保存。若一旦出现问题需要审核,完整的实验记录将会提供最可靠若一旦出现问题需要审核,完整的实验记录将会提供最可靠的
21、资料。的资料。完全依靠个人记忆绝非明智之举。将结果立即记录于实验记完全依靠个人记忆绝非明智之举。将结果立即记录于实验记录本,而非日后耗费时间再重新回忆记录,以免遗忘某些重录本,而非日后耗费时间再重新回忆记录,以免遗忘某些重要的细节。要的细节。了解早期所开展而当时并未受到重视的实验,可从以前的实了解早期所开展而当时并未受到重视的实验,可从以前的实验记录中获取信息和经验。验记录中获取信息和经验。实验记录是成功操作实验的关键。它应该是所做实验的完整实验记录是成功操作实验的关键。它应该是所做实验的完整记录。一本好的实验记录使人在很久以后还能重构当初实验记录。一本好的实验记录使人在很久以后还能重构当初实
22、验的内容、过程、结果和教训。的内容、过程、结果和教训。应养成详细进行实验记录的习惯。实验记录务求详尽、忠实,应养成详细进行实验记录的习惯。实验记录务求详尽、忠实,不仅本人一目了然,同行也能看得懂。不仅本人一目了然,同行也能看得懂。实验记录的用途为:便于本人探究实验成败原因;供他人查实验记录的用途为:便于本人探究实验成败原因;供他人查找相关实验的重要信息;为撰写论文提供原始实验数据。找相关实验的重要信息;为撰写论文提供原始实验数据。实验记录的内容实验记录的内容日期:包括年、月、日和时间,环境条件(如温度、湿度等);日期:包括年、月、日和时间,环境条件(如温度、湿度等);实验名称实验名称实验目的实
23、验目的实验材料:实验材料:试剂(名称、批号、厂家、浓度、溶剂、保存条件);试剂(名称、批号、厂家、浓度、溶剂、保存条件);仪器(名称、型号、供货厂商);仪器(名称、型号、供货厂商);细胞细菌(名称、复苏、冻存、保存处);细胞细菌(名称、复苏、冻存、保存处);动物(品系、来源、年龄、性别、数量);动物(品系、来源、年龄、性别、数量);临床标本(姓名、性别、年龄、诊断及其他临床资料);临床标本(姓名、性别、年龄、诊断及其他临床资料);试剂的配制试剂的配制实验方法:详细描述实验步骤实验方法:详细描述实验步骤 实验结果:包括所收集的原始数据、可视图及实验结果的整理。实验结果:包括所收集的原始数据、可视
24、图及实验结果的整理。出现的问题:应分析其可能的原因及解决方法,并详细记录于实验出现的问题:应分析其可能的原因及解决方法,并详细记录于实验记录本上。记录本上。实验小结:简短的实验结果总结和解释,将有助于指导后续的研究。实验小结:简短的实验结果总结和解释,将有助于指导后续的研究。其内容包括主要结论、存在问题、改进方法和实验体会等其内容包括主要结论、存在问题、改进方法和实验体会等 实验记录的书写要求实验记录的书写要求-基本要求基本要求 实验原始记录须记载于正式实验记录本上,实验记录本应按页码装订;须有连续页码编号,不得缺页或挖补。实验记录本首页一般作为目录页,可在实验开始后陆续填写,或在实验结束时统
25、一填写。每次实验须按年、月、日顺序在实验记录本相关页码右上角或左上角记录实验日期和时间,也可记录实验条件如天气、温度、湿度等。字迹工整,采用规范的专业术语、计量单位及外文符号,英文缩写第一次出现时须注明全称及中文释名。使用蓝色或黑色钢笔、碳素笔记录,不得使用铅笔或易褪色的笔(如油笔等)记录。实验记录需修改时,采用划线方式去掉原书写内容,但须保证仍可辨认,然后在修改处签字,避免随意涂抹或完全涂黑。空白处可标记“废”字或打叉。实验记录中应如实记录实际所作的实验;实验结果、表格、图表和照片均应直接记录或订在实验记录本中,成为永久记录。实验记录本应作为发表论文和实验室科技档案管理的必备文件。研究生毕业
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