分子病理学技术讲稿精选课件.ppt

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1、关于分子病理学技术关于分子病理学技术讲稿讲稿第一页，本课件共有69页第二页，本课件共有69页第三页，本课件共有69页 器官病理学器官病理学器官病理学器官病理学 细胞病理学细胞病理学细胞病理学细胞病理学 超微病理学超微病理学超微病理学超微病理学 免疫病理学免疫病理学免疫病理学免疫病理学 分子病理学分子病理学分子病理学分子病理学 远程病理学远程病理学远程病理学远程病理学大大大大 体体体体细细细细 胞胞胞胞超微结构超微结构超微结构超微结构分子基因分子基因分子基因分子基因病理学的进步是病理技术的进步病理学的进步是病理技术的进步第四页，本课件共有69页n n病理学技术包括：病理学技术包括：病理学技术包括

2、：病理学技术包括：传统病理学技术传统病理学技术传统病理学技术传统病理学技术 和和和和 现代新技术现代新技术现代新技术现代新技术 人体病理学技术人体病理学技术人体病理学技术人体病理学技术 和和和和 实验病理学技术实验病理学技术实验病理学技术实验病理学技术 第五页，本课件共有69页一一 免疫组织化学与免疫细胞化学免疫组织化学与免疫细胞化学第六页，本课件共有69页原理与方法 免免免免 疫疫疫疫 组组组组 织织织织 与与与与 细细细细 胞胞胞胞 化化化化 学学学学（Immunohistochemistry Immunohistochemistry and and immunocytochemistry

3、immunocytochemistry）：）：）：）：是是是是在在在在单单单单克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体技技技技术术术术产产产产生生生生后后后后，利利利利用用用用免免免免疫疫疫疫学学学学原原原原理理理理，将将将将抗抗抗抗原原原原抗抗抗抗体体体体反反反反应应应应应应应应用用用用与与与与组组组组织织织织细细细细胞胞胞胞化化化化学学学学而而而而进进进进一一一一步步步步通通通通过过过过级级级级连连连连放放放放大大大大，增增增增加加加加敏敏敏敏感感感感性性性性。最最最最后后后后用用用用辣辣辣辣根根根根过过过过氧氧氧氧化化化化物物物物酶酶酶酶显显显显色色色色。从从从从而而而而定定定定位位位位组组组组

4、织织织织细细细细胞胞胞胞中中中中抗抗抗抗原原原原（蛋蛋蛋蛋白白白白 多多多多肽肽肽肽、酶酶酶酶）等等等等多多多多种种种种基基基基因因因因产物的特异方法。产物的特异方法。产物的特异方法。产物的特异方法。在在在在病病病病理理理理学学学学外外外外检检检检工工工工作作作作中中中中可可可可用用用用于于于于对对对对不不不不同同同同来来来来源源源源，HEHE难难难难以以以以诊诊诊诊断断断断的的的的的的的的肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤进进进进行行行行确诊和鉴别诊断。确诊和鉴别诊断。确诊和鉴别诊断。确诊和鉴别诊断。基本原理：基本原理：基本原理：基本原理：形成形成形成形成“抗原抗体复合物抗原抗体复合物抗原抗体复合物抗原抗体复

5、合物”。第七页，本课件共有69页图1：CK19阳性的BEL-7402细胞 图2：OV-6阳性的HepG2细胞第八页，本课件共有69页肌动蛋白肌动蛋白第九页，本课件共有69页雄激素受体雄激素受体第十页，本课件共有69页CD3-T细胞细胞第十一页，本课件共有69页雌激素受体（雌激素受体（ER）第十二页，本课件共有69页免疫组织化学技术的主要步骤：1提取抗原提取抗原(免疫原免疫原Immunogen);2 2用用用用免免免免疫疫疫疫原原原原免免免免疫疫疫疫动动动动物物物物(兔兔兔兔)制制制制备备备备抗抗抗抗血血血血清清清清(多多多多克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体)或或或或免免免免疫动物疫动物疫动物疫

6、动物(鼠鼠鼠鼠)后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；后，用杂交瘤技术制备单克隆抗体；3纯化抗体；纯化抗体；4 4抗体标记组织切片；抗体标记组织切片；抗体标记组织切片；抗体标记组织切片；5 5染色反应；染色反应；染色反应；染色反应；6 6观察结果。观察结果。观察结果。观察结果。第十三页，本课件共有69页 常用的抗体标记物常用的抗体标记物常用的抗体标记物常用的抗体标记物 ：1 1酶酶酶酶 为为为为最最最最常常常常用用用用的的的的标标标标记记记记物物物物。作作作作为为为为标标标标记记记记的的的的酶酶酶酶应应应应具具具具有有有有以以以以下下下

7、下条条条条件件件件：底底底底物物物物是是是是特特特特异异异异性性性性的的的的，且且且且易易易易于于于于显显显显示示示示；酶酶酶酶反反反反应应应应产产产产物物物物稳稳稳稳定定定定，不不不不易易易易扩扩扩扩散散散散；容容容容易易易易获获获获得得得得纯纯纯纯酶酶酶酶分分分分子子子子且且且且较较较较稳稳稳稳定定定定；酶酶酶酶标标标标记记记记抗抗抗抗体体体体后后后后，不不不不影影影影响响响响两两两两者者者者的的的的活活活活性性性性；被被被被检检检检组组组组织织织织中中中中不不不不应应应应存存存存在在在在内内内内源源源源性性性性相相相相同同同同的的的的酶酶酶酶或或或或其其其其底底底底物物物物。常常常常用用

8、用用的的的的标标标标记记记记酶酶酶酶有有有有辣辣辣辣根根根根过过过过氧氧氧氧化化化化物物物物酶酶酶酶（HRPHRP）、硷硷硷硷性性性性磷磷磷磷酸酸酸酸酶酶酶酶（AKPAKP）、葡葡葡葡萄萄萄萄糖糖糖糖氧氧氧氧化化化化酶酶酶酶（GODGOD）等。等。等。等。2 2荧荧荧荧光光光光素素素素 指指指指在在在在高高高高能能能能量量量量光光光光波波波波的的的的激激激激发发发发下下下下能能能能产产产产生生生生荧荧荧荧光光光光的的的的物物物物质质质质。常常常常用用用用的的的的有有有有 异异异异 硫硫硫硫 氰氰氰氰 酸酸酸酸 荧荧荧荧 光光光光 素素素素（FITCFITC）、四四四四 甲甲甲甲 基基基基 异异

9、异异 硫硫硫硫 氰氰氰氰 酸酸酸酸 罗罗罗罗 达达达达 明明明明（TRITCTRITC）。）。）。）。3 3生物素生物素生物素生物素 其与其与其与其与卵白素卵白素卵白素卵白素的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。的亲和力明显高于抗原抗体的结合力。4 4金属标记物金属标记物金属标记物金属标记物 如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。如铁蛋白和胶体金。多用于免疫电镜。第十四页，本课件共有69页三常用免疫组织化学染色方法（一）直接法（一）直接法n n将将荧光素荧光素(免疫荧

10、光法免疫荧光法)或或酶酶直接标记在直接标记在第一第一抗体抗体上，以检查相应的抗原。直接法具有特上，以检查相应的抗原。直接法具有特异性强的优点，但敏感性差，耗费抗体多。异性强的优点，但敏感性差，耗费抗体多。第十五页，本课件共有69页（二）间接法（二）间接法 先先用用荧荧光光素素或或酶酶标标记记第第二二抗抗体体，一一抗抗为为特特异异性抗体，性抗体，二抗仅有种族特异性。二抗仅有种族特异性。特点特点:预先标好二抗，较方便；预先标好二抗，较方便；比直接法敏感，但仍差。比直接法敏感，但仍差。第十六页，本课件共有69页（三）（三）PAP法与双法与双PAP法：法：既既既既 过过过过 氧氧氧氧 化化化化 物物物

11、物 酶酶酶酶 抗抗抗抗 过过过过 氧氧氧氧 化化化化 物物物物 酶酶酶酶 复复复复 合合合合 物物物物 法法法法(Perixidase(Perixidase Antiperoxidase Complex Method,PAP)Antiperoxidase Complex Method,PAP)先先先先将将将将过过过过氧氧氧氧化化化化物物物物酶酶酶酶（HRPHRP）免免免免疫疫疫疫兔兔兔兔/羊羊羊羊/鼠鼠鼠鼠，制制制制成成成成兔兔兔兔/羊羊羊羊/鼠鼠鼠鼠抗抗抗抗；然后再与结合，形成一个稳定的多角形结构（然后再与结合，形成一个稳定的多角形结构（然后再与结合，形成一个稳定的多角形结构（然后再与结合，

12、形成一个稳定的多角形结构（PAPPAP）。）。）。）。特点：特点：特点：特点：敏感性较高；敏感性较高；敏感性较高；敏感性较高；背景染色低（相对）；背景染色低（相对）；背景染色低（相对）；背景染色低（相对）；双双双双PAPPAP敏感性更高，但背景相对较重。敏感性更高，但背景相对较重。敏感性更高，但背景相对较重。敏感性更高，但背景相对较重。第十七页，本课件共有69页（四）（四）ABC法：法：既卵白素生物素过氧化物酶复合物法既卵白素生物素过氧化物酶复合物法既卵白素生物素过氧化物酶复合物法既卵白素生物素过氧化物酶复合物法(Avidin Biotin-peroxidase Complex,ABC)(Av

13、idin Biotin-peroxidase Complex,ABC)利利利利用用用用卵卵卵卵白白白白素素素素与与与与生生生生物物物物素素素素特特特特有有有有的的的的高高高高度度度度亲亲亲亲和和和和力力力力，先先先先将将将将生生生生物物物物素素素素与与与与酶酶酶酶结结结结合合合合形形形形成成成成生生生生物物物物素素素素化化化化HRPHRP，再再再再以以以以生生生生物物物物素素素素化化化化HRPHRP与与与与卵卵卵卵白白白白素素素素按按按按一一一一定定定定比比比比例例例例混混混混合合合合，形形形形成成成成一一一一个个个个复复复复合合合合物物物物；同同同同时时时时先将二抗生物素化。先将二抗生物素化

14、。先将二抗生物素化。先将二抗生物素化。如将卵白素换成链霉亲和素，则为：如将卵白素换成链霉亲和素，则为：如将卵白素换成链霉亲和素，则为：如将卵白素换成链霉亲和素，则为：法：法：法：法：(StreptAvidin Biotin-peroxidase Complex)(StreptAvidin Biotin-peroxidase Complex)将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：将链霉亲和素和生物素先连结起来，则称：法：法：法：法：labelled StreptAvidin-Biotinlabelled StreptAv

15、idin-Biotin用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：用链霉素抗生物素蛋白连结辣根过氧化物酶，则为：法：法：法：法：(StreptAvidin Peroxidase conjugataed method)(StreptAvidin Peroxidase conjugataed method)若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若用碱性磷酸酶标记链霉卵白素则称法。若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法若

16、分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法若分别用碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，则称法特点特点特点特点:敏感性高，（比高倍）；敏感性高，（比高倍）；敏感性高，（比高倍）；敏感性高，（比高倍）；背景淡，链霉亲和素更好；背景淡，链霉亲和素更好；背景淡，链霉亲和素更好；背景淡，链霉亲和素更好；方法较简便，时间较短；方法较简便，时间较短；方法较简便，时间较短；方法较简便，时间较短；应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。应用范围广，也可用于原位杂交和免疫电镜。应用范围广，也可用于原位

17、杂交和免疫电镜。第十八页，本课件共有69页四免疫组织化学染色过程中需注意的有关事项 正确设置免疫组织化学的对照正确设置免疫组织化学的对照正确设置免疫组织化学的对照正确设置免疫组织化学的对照 对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；对照原则：首先对照第一抗体；替代对照要注意相同的原则；阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，定位准确。阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，定位准确。阳性结果阴性对照，阴性结果阳性对照；染色清晰，定位准确。阳性结果阴性对照，阴性结果

18、阳性对照；染色清晰，定位准确。阴性对照：阴性对照：阴性对照：阴性对照：（）空白对照：用置换第一抗体；（）空白对照：用置换第一抗体；（）空白对照：用置换第一抗体；（）空白对照：用置换第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；（）血清替代对照：用同种动物的正常血清代替第一抗体；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；阳性对照：用已知或已被实验证明为阳性的组织；自身对照：利用组织切片内的

19、各种不同的组织成分作对照。自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。自身对照：利用组织切片内的各种不同的组织成分作对照。第十九页，本课件共有69页2假阳性反应：假阳性反应：非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；非特异性反应：边缘现象、皱折和刀痕、出血和坏死等；内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某内源性过氧化物酶：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某内源性过氧化物酶

20、：红细胞、炎细胞、退变坏死细胞和某些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、些腺上皮分泌物，以及某些富含过氧化物酶的组织，如脑、肝等；肝等；肝等；肝等；抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成抗体的交叉反应：抗体本身含有与人体组织发生交叉反应的成分；分；分；分；试剂浓度过高或失效。试剂浓度过高或失效。试剂浓度过高或失效。试剂浓度过高或失效。第二十页，本课件共有6

21、9页3假阴性反应：假阴性反应：组织固定不当或固定时间过长；组织固定不当或固定时间过长；抗体效价过低或久置失效；抗体效价过低或久置失效；组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔；组织中抗原被粘稠基质或分泌物阻隔；DAB或或H2O2的浓度不当。的浓度不当。第二十一页，本课件共有69页五、免疫组织化学在肿瘤诊断和鉴别诊断中的应用五、免疫组织化学在肿瘤诊断和鉴别诊断中的应用（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因：（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因：（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因：（一）在肿瘤诊断中应用免疫组织化学染色的原因：在常规病理活检中在常规病理活检中在常规病理活检中在常规病

22、理活检中,通常有的疑难病例不能明通常有的疑难病例不能明通常有的疑难病例不能明通常有的疑难病例不能明确诊断。确诊断。确诊断。确诊断。形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性形态结构相似的肿瘤可为不同的组织来源（如未分化癌和恶性淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。淋巴瘤）因而难于识别，给治疗带来困难。一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确定一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确

23、定一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确定一些转移性肿瘤常常缺乏特有的组织学特征，因而无法确定其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。其原发病灶（如甲状腺癌和前列腺癌）。通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协助识通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协助识通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协助识通过一些反映细胞增殖和与肿瘤恶性程度有关的标记物协助识别肿瘤的良恶性。别肿瘤的良恶性。别肿瘤的良恶性。别肿瘤的良恶性。第二十二页，本课件共有69页（二）各种不同组织及其肿瘤常见的标记物：（

24、二）各种不同组织及其肿瘤常见的标记物：1 1上皮组织及其肿瘤标记物：上皮组织及其肿瘤标记物：上皮组织及其肿瘤标记物：上皮组织及其肿瘤标记物：（）存在于所有上皮细胞内的标记物：（）存在于所有上皮细胞内的标记物：（）存在于所有上皮细胞内的标记物：（）存在于所有上皮细胞内的标记物：细胞角蛋白（细胞角蛋白（细胞角蛋白（细胞角蛋白（Cytokeratin,Cytokeratin,）：一种中间丝蛋白）：一种中间丝蛋白）：一种中间丝蛋白）：一种中间丝蛋白 （）存在于大部分上皮细胞内的标记物：（）存在于大部分上皮细胞内的标记物：（）存在于大部分上皮细胞内的标记物：（）存在于大部分上皮细胞内的标记物：角蛋白多肽

25、（如）；角蛋白多肽（如）；角蛋白多肽（如）；角蛋白多肽（如）；上皮细胞膜抗原（上皮细胞膜抗原（上皮细胞膜抗原（上皮细胞膜抗原（epithelial membrane antigen,epithelial membrane antigen,）。）。）。）。（）选择性存在于某些上皮细胞内的标记物：（）选择性存在于某些上皮细胞内的标记物：（）选择性存在于某些上皮细胞内的标记物：（）选择性存在于某些上皮细胞内的标记物：癌胚抗原（）；癌胚抗原（）；癌胚抗原（）；癌胚抗原（）；甲胎蛋白（）；甲胎蛋白（）；甲胎蛋白（）；甲胎蛋白（）；前列腺特异性抗原（）及激素类等。前列腺特异性抗原（）及激素类等。前列腺特异

26、性抗原（）及激素类等。前列腺特异性抗原（）及激素类等。第二十三页，本课件共有69页2间叶组织（软组织）及其肿瘤标记物：间叶组织（软组织）及其肿瘤标记物：（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（）间叶源性肿瘤：波形蛋白（VimentinVimentin）；）；）；）；（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。（）纤维组织源性肿瘤：纤维瘤、肉瘤，恶纤组。抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（1，）；，）；抗胰糜蛋白酶（抗胰糜蛋白酶（抗胰糜蛋白酶（抗胰糜蛋白酶（，）；，）；，）；，）；

27、溶菌酶（溶菌酶（Lysozyme）。）。第二十四页，本课件共有69页3 3肌细胞及肌上皮肿瘤及其标记物：肌细胞及肌上皮肿瘤及其标记物：肌细胞及肌上皮肿瘤及其标记物：肌细胞及肌上皮肿瘤及其标记物：肌瘤、肌肉瘤、肌上皮肌瘤、肌肉瘤、肌上皮肌瘤、肌肉瘤、肌上皮肌瘤、肌肉瘤、肌上皮瘤。瘤。瘤。瘤。结蛋白（结蛋白（结蛋白（结蛋白（DesminDesmin），最常用，肌细胞，最常用，肌细胞，最常用，肌细胞，最常用，肌细胞分化最早分化最早分化最早分化最早的标记；的标记；的标记；的标记；肌动蛋白（肌动蛋白（肌动蛋白（肌动蛋白（ActinActin），属肌丝蛋白，种亚型分别存在于不同的，属肌丝蛋白，种亚型分别存

28、在于不同的，属肌丝蛋白，种亚型分别存在于不同的，属肌丝蛋白，种亚型分别存在于不同的肌细胞、肌上皮细胞肌细胞、肌上皮细胞肌细胞、肌上皮细胞肌细胞、肌上皮细胞 肌球蛋白（肌球蛋白（肌球蛋白（肌球蛋白（MyosinMyosin），属肌丝蛋白，分，属肌丝蛋白，分，属肌丝蛋白，分，属肌丝蛋白，分型（慢）和型（慢）和型（慢）和型（慢）和型（快）收型（快）收型（快）收型（快）收缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球蛋白缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球蛋白缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球蛋白缩纤维，存在于心肌、横纹肌及平滑肌中，肌动蛋白和肌球蛋白均出现在肌

29、细胞发育分化中期。均出现在肌细胞发育分化中期。均出现在肌细胞发育分化中期。均出现在肌细胞发育分化中期。肌红蛋白（肌红蛋白（肌红蛋白（肌红蛋白（MyoglobinMyoglobin），是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，存在于，是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，存在于，是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，存在于，是心肌和横纹肌结合氧的肌红蛋白，存在于分分分分化成熟的横纹肌化成熟的横纹肌化成熟的横纹肌化成熟的横纹肌中。中。中。中。第二十五页，本课件共有69页内皮细胞肿瘤及其标记物：内皮细胞肿瘤及其标记物：血管内皮肉瘤血管内皮肉瘤 第第第第因子相关抗原（因子相关抗原（因子相关抗原（因子相关抗原（Factor

30、Factor-related Antigen,-related Antigen,）荆豆凝集素（荆豆凝集素（荆豆凝集素（荆豆凝集素（Ulex EuropaeusUlex Europaeus1 Lectin,1 Lectin,）；）；）；）；、等。等。等。等。第二十六页，本课件共有69页骨、软骨和脂肪组织肿瘤及其标记物：骨、软骨和脂肪组织肿瘤及其标记物：，Vimentin阳性；阳性；Lysozyme少数阳性。少数阳性。第二十七页，本课件共有69页滑膜及间皮肿瘤滑膜及间皮肿瘤及其标记物及其标记物：双向分化，无特异性标记物。Keratin,EMA;Vimentin,FN,AAT,ACT,Lysozym

31、e等均有可能阳性。第二十八页，本课件共有69页周围神经肿瘤及其标记物：周围神经肿瘤及其标记物：S-100：神经纤维肿瘤，神经鞘肿瘤神经纤维肿瘤，神经鞘肿瘤。髓性碱性蛋白（髓性碱性蛋白（Myelin basic protein,MBA）；）；髓鞘相关蛋白（髓鞘相关蛋白（MAG）；）；层粘连蛋白（层粘连蛋白（Laminin）。）。第二十九页，本课件共有69页8淋巴造血组织肿瘤及其标记物：淋巴造血组织肿瘤及其标记物：()LCA)LCA（Leucocyte Common AntigenLeucocyte Common Antigen，白细胞共同抗原）；，白细胞共同抗原）；，白细胞共同抗原）；，白细胞共

32、同抗原）；()CD19)CD19，CD25CD25，CD20CD20标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；()CD4)CD4，CD8CD8，CD3CD3标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；标记淋巴细胞；()、标记组织细胞；、标记组织细胞；、标记组织细胞；、标记组织细胞；()、（、（、（、（Ki-antigenKi-antigen）标记细胞；）标记细胞；）标记细胞；）标记细胞；()CD11)CD11，CD14CD14标记单核细胞、粒细胞。标记单核细胞、粒细胞。标记单核细胞、粒细胞。标记单核细胞、粒细胞。第三十页，本课件共有69页9 9神经及神经内分泌肿瘤及其标记物：神经及

33、神经内分泌肿瘤及其标记物：神经及神经内分泌肿瘤及其标记物：神经及神经内分泌肿瘤及其标记物：（）胶质纤维酸性蛋白（）胶质纤维酸性蛋白（）胶质纤维酸性蛋白（）胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,Glial fibrillary acidic protein,）：）：）：）：胶质细胞、室管膜细胞胶质细胞、室管膜细胞胶质细胞、室管膜细胞胶质细胞、室管膜细胞；（）髓鞘碱性蛋白（）髓鞘碱性蛋白（）髓鞘碱性蛋白（）髓鞘碱性蛋白（）：）：）：）：少突胶质细胞少突胶质细胞少突胶质细胞少突胶质细胞；（）神经细胞烯醇化酶（）神经细胞烯醇化酶（）神经细胞烯醇化酶（）神经细

34、胞烯醇化酶（Neurun specific enolosa,Neurun specific enolosa,）：）：）：）：神经神经神经神经细胞细胞细胞细胞；（）神经微丝（）神经微丝（）神经微丝（）神经微丝（Neurofilaments,Neurofilaments,）神经细胞、嗜铬细胞、神经细胞、嗜铬细胞、神经细胞、嗜铬细胞、神经细胞、嗜铬细胞、副节细胞、瘤；副节细胞、瘤；副节细胞、瘤；副节细胞、瘤；（）嗜铬素（）嗜铬素（）嗜铬素（）嗜铬素（Chromogranin Chromogranin）：）：）：）：神经内分泌肿瘤神经内分泌肿瘤神经内分泌肿瘤神经内分泌肿瘤。（）其它：、（）其它：、（）

35、其它：、（）其它：、CalcitotinCalcitotin、GastrinGastrin、GlucagonGlucagon、hGHhGH、Insulin Insulin、SerotoninSerotonin等。等。等。等。第三十一页，本课件共有69页n n免疫组织化学最突出的优点：免疫组织化学最突出的优点：能在能在原位原位确定确定组织及细胞结构的化学成组织及细胞结构的化学成分分。深入深入-原位分子杂交和免疫电镜。原位分子杂交和免疫电镜。第三十二页，本课件共有69页 电子显微镜技术n n电子显微镜（电子显微镜（electron microsocope）简称电镜，）简称电镜，是以电子束为照明源，

36、通过电子流对生物样品的是以电子束为照明源，通过电子流对生物样品的透射以及电磁透镜的多级放大后的荧光屏上成像透射以及电磁透镜的多级放大后的荧光屏上成像的大型精密仪器。按工作原理和用途的不同可分的大型精密仪器。按工作原理和用途的不同可分为透射式电镜（为透射式电镜（transmission electron microscope,TEM）和扫描式电镜（）和扫描式电镜（scanning electron microscope,SEM）二种基本类型。）二种基本类型。第三十三页，本课件共有69页图 白藜芦醇处理Jurkat细胞超微结构 第三十四页，本课件共有69页一透射式电镜 n n主要用于观察细胞内部的

37、微细结构，由于电子的主要用于观察细胞内部的微细结构，由于电子的主要用于观察细胞内部的微细结构，由于电子的主要用于观察细胞内部的微细结构，由于电子的穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必须切穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必须切穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必须切穿透力较弱，故用于透射电镜观察的标本必须切成成成成50100nm50100nm的超薄切片。换句话说，一个细胞要的超薄切片。换句话说，一个细胞要的超薄切片。换句话说，一个细胞要的超薄切片。换句话说，一个细胞要被切成被切成被切成被切成100200100200个薄片才适于在透射电镜下观察。个薄片才适于在透射电镜下观察。个薄片才适于在

38、透射电镜下观察。个薄片才适于在透射电镜下观察。样品在被超薄切片之前，一般要经过固定、脱水样品在被超薄切片之前，一般要经过固定、脱水样品在被超薄切片之前，一般要经过固定、脱水样品在被超薄切片之前，一般要经过固定、脱水和包埋等处理，在切片之后还要经过染色等处理和包埋等处理，在切片之后还要经过染色等处理和包埋等处理，在切片之后还要经过染色等处理和包埋等处理，在切片之后还要经过染色等处理才能进行观察。才能进行观察。才能进行观察。才能进行观察。第三十五页，本课件共有69页n n超薄切片术（超薄切片术（techniques of ultrathin section）是）是最基本的电镜样品制备技术，其基本过

39、程同石蜡最基本的电镜样品制备技术，其基本过程同石蜡切片大体相似，包括取材、固定、漂洗、脱水、切片大体相似，包括取材、固定、漂洗、脱水、渗透与聚合、切片和染色等多个环节，但操作过渗透与聚合、切片和染色等多个环节，但操作过程比石蜡切片更为细致与复杂。为了获得理想的程比石蜡切片更为细致与复杂。为了获得理想的超薄切片，操作者必须认真对待每一步骤，任何超薄切片，操作者必须认真对待每一步骤，任何环节的疏忽都可能导致制样的失败。环节的疏忽都可能导致制样的失败。第三十六页，本课件共有69页n n合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求：合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求：合格的超薄切片样品应该达到以下基本要

40、求：合格的超薄切片样品应该达到以下基本要求：（1 1）切片的厚度应在）切片的厚度应在）切片的厚度应在）切片的厚度应在50nm50nm左右，不能超过左右，不能超过左右，不能超过左右，不能超过100nm100nm，以获得较高的分辨率和较高的反差；（，以获得较高的分辨率和较高的反差；（，以获得较高的分辨率和较高的反差；（，以获得较高的分辨率和较高的反差；（2 2）切片）切片）切片）切片应能耐受电子束的强烈照射而不发生破裂、变形；应能耐受电子束的强烈照射而不发生破裂、变形；应能耐受电子束的强烈照射而不发生破裂、变形；应能耐受电子束的强烈照射而不发生破裂、变形；（3 3）细胞超微结构保持良好，没有明显的

41、物质凝）细胞超微结构保持良好，没有明显的物质凝）细胞超微结构保持良好，没有明显的物质凝）细胞超微结构保持良好，没有明显的物质凝聚和丢失。聚和丢失。聚和丢失。聚和丢失。第三十七页，本课件共有69页n n电子显微镜技术：电子显微镜技术：电子显微镜技术：电子显微镜技术：细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化。细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化。细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化。细胞内的细胞器、细胞骨架或大分子水平的变化。细胞内的病毒颗粒等。细胞内的病毒颗粒等。细胞内的病毒颗粒等。细胞内的病毒颗粒等。肿瘤鉴别诊断肿瘤鉴别诊断肿瘤鉴别诊断肿瘤鉴别诊断 病毒包涵体病毒包涵体病毒包涵体

42、病毒包涵体 肾炎的分型肾炎的分型肾炎的分型肾炎的分型 第三十八页，本课件共有69页二扫描电镜 扫扫扫扫描描描描电电电电子子子子显显显显微微微微镜镜镜镜就就就就是是是是用用用用聚聚聚聚得得得得很很很很细细细细的的的的电电电电子子子子束束束束流流流流照照照照射射射射要要要要检检检检测测测测的的的的样样样样品品品品表表表表面面面面。由由由由于于于于电电电电子子子子束束束束与与与与样样样样品品品品的的的的相相相相互互互互作作作作用用用用产产产产生生生生各各各各种种种种信信信信息息息息然然然然后后后后通通通通过过过过不不不不同同同同的的的的检检检检测测测测器器器器接接接接收收收收相应的信息，经过处理后显

43、示出样品的各种特征。相应的信息，经过处理后显示出样品的各种特征。相应的信息，经过处理后显示出样品的各种特征。相应的信息，经过处理后显示出样品的各种特征。扫扫扫扫描描描描电电电电镜镜镜镜具具具具有有有有以以以以下下下下特特特特点点点点：能能能能够够够够直直直直接接接接观观观观察察察察样样样样品品品品的的的的表表表表面面面面的的的的结结结结构构构构；样样样样品品品品制制制制备备备备过过过过程程程程简简简简单单单单，不不不不用用用用切切切切成成成成超超超超薄薄薄薄切切切切片片片片；可可可可以以以以从从从从各各各各种种种种角角角角度度度度对对对对样样样样品品品品进进进进行行行行观观观观察察察察；景景景

44、景深深深深大大大大，图图图图像像像像富富富富有有有有立立立立体体体体感感感感；图图图图像像像像的的的的放放放放大大大大范范范范围围围围广广广广，分分分分辨辨辨辨率率率率也也也也比比比比较较较较高高高高；电电电电子子子子束束束束对对对对样样样样品品品品的的的的损损损损伤伤伤伤与与与与污污污污染染染染程程程程度度度度较较较较小小小小；在在在在观观观观察察察察形形形形貌貌貌貌的的的的同同同同时时时时，还还还还可可可可利利利利用用用用从从从从样样样样品品品品发发发发出出出出的的的的其其其其他他他他信信信信号作微区成分分析。号作微区成分分析。号作微区成分分析。号作微区成分分析。第三十九页，本课件共有69

45、页n n扫描电镜：血管破裂第四十页，本课件共有69页扫描电镜：小肠微绒毛扫描电镜：小肠微绒毛第四十一页，本课件共有69页第四十二页，本课件共有69页第五节 生物芯片技术 n n生物芯片技术（生物芯片技术（生物芯片技术（生物芯片技术（biochip technologybiochip technology）是将大量具有生物识）是将大量具有生物识）是将大量具有生物识）是将大量具有生物识别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与别功能的分子或生物样品有序地点阵排列在支持物上并与标记的检体分子同

46、时反应或杂交，通过放射自显影、荧光标记的检体分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光标记的检体分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光标记的检体分子同时反应或杂交，通过放射自显影、荧光扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的扫描、化学发光或酶标显示可获得大量有用的生物信息的新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞新技术。生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片、

47、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、组织芯片、以及元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。可对DNADNA、RNARNA、多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快捷的测试和分析。捷的测试和分析。捷的

48、测试和分析。捷的测试和分析。第四十三页，本课件共有69页一、基因芯片 基因芯片基因芯片基因芯片基因芯片(gene chip)(gene chip)是指采用原位合成或显微是指采用原位合成或显微打印方法，将大量打印方法，将大量DNA探针固化于支持物表面上，探针固化于支持物表面上，产生二维产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测。可自动、快速地检测出成千并行、高效地检测。可自动、快速地检测出成千上万个基因的表达情况，为基因诊断、药物筛选上万个基因的表达情况，为基因

49、诊断、药物筛选以及新基因发现提供了有力的手段。以及新基因发现提供了有力的手段。第四十四页，本课件共有69页图图 基因芯片基因芯片 第四十五页，本课件共有69页二、蛋白芯片 n n蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜蛋白芯片技术的基本原理是将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光和

50、载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后，用标记了特定荧光素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互素的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫可描技术，测补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫可描技术，测补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫可描技术，测补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫可描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相定