抗菌药物敏感试验下精选课件.ppt

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1、关于抗菌药物敏感试验下第一页，本课件共有51页单药纸片搭桥法单药纸片搭桥法第二页，本课件共有51页2.棋盘稀释法棋盘稀释法定量试验定量试验（1）原理）原理 将甲乙两药的各种稀释度加以将甲乙两药的各种稀释度加以组合，组成联合药敏管。同时两种药物每组合，组成联合药敏管。同时两种药物每一稀释度都有一只加单一药物的单独药敏一稀释度都有一只加单一药物的单独药敏管。根据单一药物对被检菌的管。根据单一药物对被检菌的MIC和联和联合药敏管中的抑菌情况，可精确测定两药合药敏管中的抑菌情况，可精确测定两药在适当浓度比例下所产生的相互作用。在适当浓度比例下所产生的相互作用。第三页，本课件共有51页（2）试验步骤）试

2、验步骤1）确定单药的）确定单药的MIC2）确定联合药敏的药物稀释度）确定联合药敏的药物稀释度n每一稀释度浓度为联合药敏管内所需单药终浓度每一稀释度浓度为联合药敏管内所需单药终浓度的的2倍倍n用用MH液体培养基将甲乙两药稀释液体培养基将甲乙两药稀释68个稀释度个稀释度第四页，本课件共有51页3）棋盘状排列无菌试管）棋盘状排列无菌试管n排列排列6排无菌试管，每排排无菌试管，每排6支支4）加甲、乙两药（分别从横、竖排加入）加甲、乙两药（分别从横、竖排加入）n每管各每管各1ml，横排和纵排的第一管为无药，横排和纵排的第一管为无药对照，第一排为单药对照管对照，第一排为单药对照管5）加待测菌液）加待测菌液

3、 n各管加入被检菌液各管加入被检菌液0.01mln菌液终浓度：菌液终浓度：105CFU/ml第五页，本课件共有51页32/032/0.5 32/132/232/432/816/016/0.5 16/116/216/416/88/08/0.58/18/28/48/84/04/0.54/14/24/44/82/02/0.52/12/22/42/80/00/0.50/10/20/40/8甲甲药药稀稀释释乙药稀释乙药稀释例：甲药例：甲药MIC单独单独16 mg/L 乙药乙药MIC单独单独4mg/L第六页，本课件共有51页n结果判读结果判读 FIC：部分抑菌浓度指数：部分抑菌浓度指数 甲药联合时甲药联合

4、时MIC 乙药联合时乙药联合时MICFIC=+甲药单独时甲药单独时MIC 乙药单独时乙药单独时MICFIC 2 拮抗作用拮抗作用 第七页，本课件共有51页-+-+-+-+-32 16 8 4 2 0甲甲药药浓浓度度 0 0.5 1 2 4 8 乙药乙药FIC=8/16+4/4=1.5第八页，本课件共有51页-+-+-+-+-+-FIC=4/32+2/8=0.375FIC=8/32+1/8=0.37532168420甲药甲药 0 0.5 1 2 4 8 乙药乙药第九页，本课件共有51页第五章第五章 细菌的分类与命名细菌的分类与命名第一节第一节 概述概述一、基本概念一、基本概念1.分类分类（1）人

5、为分类法：以形态、生理生化特征为依据）人为分类法：以形态、生理生化特征为依据（2）系统分类法：以细菌大分子物质结构的同源）系统分类法：以细菌大分子物质结构的同源程度分类程度分类2.命名命名3.鉴定鉴定第十页，本课件共有51页二、分类等级二、分类等级细菌的分类层次细菌的分类层次 界、门、纲、目、科、属、种界、门、纲、目、科、属、种 1.种种(species)是细菌分类的基本单位。是细菌分类的基本单位。生物学性状基本相同的细菌群体构成一生物学性状基本相同的细菌群体构成一个菌种；个菌种；2.菌属菌属：性状相近关系密切的若干菌种组：性状相近关系密切的若干菌种组成一个菌属（成一个菌属（genus）第十一

6、页，本课件共有51页3.亚种和型：亚种和型：同一菌种的各个细菌，虽性同一菌种的各个细菌，虽性状基本相同，但在某些方面仍有一定差状基本相同，但在某些方面仍有一定差异，差异较明显的称异，差异较明显的称亚种亚种(subspecies,subsp.)，差异小的则为，差异小的则为型型(type)。n血清型：依据抗原结构的差异血清型：依据抗原结构的差异 n噬菌体型：噬菌体的敏感性噬菌体型：噬菌体的敏感性n生物型：生化反应和生物学性状生物型：生化反应和生物学性状第十二页，本课件共有51页4.菌株菌株：对不同来源的同一菌种的细菌：对不同来源的同一菌种的细菌称为该菌的不同菌株称为该菌的不同菌株(strain)。

7、n标准菌株标准菌株(standard strain)或或模式菌株模式菌株(type strain）：具有某种细菌典型特征的）：具有某种细菌典型特征的菌株。菌株。第十三页，本课件共有51页三、三、细菌的命名法细菌的命名法拉丁双名法拉丁双名法 Escherichia coli （E.coli）属名属名 种名种名中文：中文：大肠埃希菌大肠埃希菌 种名种名 属名属名 第十四页，本课件共有51页第二节第二节 细菌的分类方法细菌的分类方法一、生物学特性分类法一、生物学特性分类法传统分类法、数值分类法传统分类法、数值分类法二、遗传学分类法二、遗传学分类法-系统分类法系统分类法nDNA 碱基比例的测定碱基比例

8、的测定nDNA 碱基比例指碱基比例指DNA分子中分子中G、C所占的摩所占的摩尔百分比值，反映细菌间尔百分比值，反映细菌间DNA分子同源程度分子同源程度n核酸分子杂交法核酸分子杂交法nrRNA寡核苷酸分析寡核苷酸分析第十五页，本课件共有51页第三十五章第三十五章细菌耐药性检测细菌耐药性检测第十六页，本课件共有51页第一节第一节 抗菌药物种类及作用机制抗菌药物种类及作用机制1.1.抗菌药物（抗菌药物（antibacterial agentsantibacterial agents）指指对对病病原原菌菌具具有有抑抑制制或或杀杀灭灭作作用用、用用于于预预防防和和治治疗疗细细菌菌性性感感染的药物，包括抗

9、生素（染的药物，包括抗生素（antibioticsantibiotics）和化学合成的药物。）和化学合成的药物。2.2.抗生素抗生素（antibiotic agentsantibiotic agents）：）：微微生生物物在在其其代代谢谢过过程程中中产产生生的的能能杀杀灭灭或或抑抑制制其其它它特特异异病病原原微微生生物物的的产产物物。抗抗生生素素分分子子量量小小，低低浓浓度度就就能能发发挥其生物活性，有天然和人工半合成两类挥其生物活性，有天然和人工半合成两类。第十七页，本课件共有51页 抗菌药物的种类抗菌药物的种类分类分类代表药物代表药物-内酰胺类内酰胺类大环内酯类大环内酯类氨基糖苷类氨基糖苷

10、类四环素类四环素类氯霉素类氯霉素类化学合成药物化学合成药物抗结核药物抗结核药物多肽类抗生素多肽类抗生素青霉素类、头孢霉素类等青霉素类、头孢霉素类等红霉素、螺旋霉素等红霉素、螺旋霉素等链霉素、庆大霉素等链霉素、庆大霉素等四环素、多西环素等四环素、多西环素等氯霉素、甲砜霉素等氯霉素、甲砜霉素等喹诺酮类（氟哌酸、环丙沙星）喹诺酮类（氟哌酸、环丙沙星）利福平、异烟肼利福平、异烟肼多粘菌素类、万古霉素多粘菌素类、万古霉素按化学结构和性质按化学结构和性质第十八页，本课件共有51页一、一、-内酰胺类内酰胺类（-lactam-lactam）化化学学结结构构中中含含有有-内内酰酰胺胺环环的的抗抗生生素素。-内内

11、酰酰胺胺抗抗生生素素分分子子侧侧链链的的组组成成形形式式多多样样，形形成成了了抗抗菌菌谱谱不不同同、临临床床药药理理学学特特性性各各异异的的多种不同多种不同-内酰胺抗生素。内酰胺抗生素。第十九页，本课件共有51页青霉素的母核青霉素的母核第二十页，本课件共有51页 青青霉霉素素（penicillinpenicillin）类类：青青霉霉素素G G、甲甲氧氧西西林林、阿阿莫西林、莫西林、替卡西林、派拉西林替卡西林、派拉西林等等 头孢菌素（头孢菌素（cephalosporincephalosporin）类：一、二、三、四代）类：一、二、三、四代 头霉西类头霉西类：如头孢西丁。：如头孢西丁。单环类：如氨

12、曲南。单环类：如氨曲南。碳青霉素烯类：亚胺培南、美罗培南碳青霉素烯类：亚胺培南、美罗培南 -内酰胺酶抑制剂：内酰胺酶抑制剂：如舒巴坦、克拉维酸如舒巴坦、克拉维酸-内酰胺类药物内酰胺类药物种类种类 第二十一页，本课件共有51页 作用机制作用机制与青霉素结合蛋白（与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制肽聚糖）结合，抑制肽聚糖合成中所需的转肽酶，阻止肽聚糖链的交叉连合成中所需的转肽酶，阻止肽聚糖链的交叉连接，干扰细胞壁合成。接，干扰细胞壁合成。n繁殖期杀菌药繁殖期杀菌药第二十二页，本课件共有51页肽聚糖合成过程中的关键步骤肽聚糖合成过程中的关键步骤n细胞浆内：合成细胞浆内：合成N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸

13、-五肽五肽n细胞膜上：合成细胞膜上：合成N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺-N-乙酰乙酰胞壁酸胞壁酸-五肽五肽-磷脂磷脂n细胞膜外：完成肽聚糖的交叉连接细胞膜外：完成肽聚糖的交叉连接第二十三页，本课件共有51页肽聚糖合成过程中需要的酶（肽聚糖合成过程中需要的酶（PBP）n转糖基酶转糖基酶：催化：催化-1，4糖苷糖苷键键形成形成n转肽酶：使：使N-乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸-五肽脱去末端的五肽脱去末端的D-丙氨酸，丙氨酸，与另一条肽链的肽桥（五肽交联桥）交联，形成三维与另一条肽链的肽桥（五肽交联桥）交联，形成三维网状结构网状结构n羧肽酶：催化五肽末端羧肽酶：催化五肽末端D-丙氨酸水解丙氨酸水解n内肽酶：催化

14、水解已合成肽聚糖上的肽键内肽酶：催化水解已合成肽聚糖上的肽键n细菌生存必需的是转肽酶和转糖基酶细菌生存必需的是转肽酶和转糖基酶第二十四页，本课件共有51页第二十五页，本课件共有51页二、氨基糖苷类二、氨基糖苷类1.种类种类n链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星、丁胺卡那霉素等阿米卡星、丁胺卡那霉素等2.作用机制作用机制n选择性地与核糖体选择性地与核糖体30S小亚基结合，影响蛋小亚基结合，影响蛋白质合成的全过程。白质合成的全过程。n静止期杀菌药静止期杀菌药第二十六页，本课件共有51页三、喹诺酮类三、喹诺酮类1.种类种类n吡哌酸、氟哌酸、环丙沙星、氧

15、氟沙星、左吡哌酸、氟哌酸、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、罗美沙星、诺氟沙星等氧氟沙星、罗美沙星、诺氟沙星等2.作用机制作用机制n作用于细菌的作用于细菌的DNA旋转酶，干扰旋转酶，干扰DNA合成合成第二十七页，本课件共有51页四、大环内酯类四、大环内酯类1.种类种类n红霉素、罗红霉素、螺旋霉素、吉他霉素、红霉素、罗红霉素、螺旋霉素、吉他霉素、麦迪霉素、阿齐霉素等麦迪霉素、阿齐霉素等2.作用机制作用机制n与细菌核糖体与细菌核糖体50S亚基结合，抑制转肽作用，亚基结合，抑制转肽作用，影响核蛋白位移，从而抑制蛋白质合成。影响核蛋白位移，从而抑制蛋白质合成。第二十八页，本课件共有51页五、磺胺类五、磺

16、胺类1.种类种类n磺胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶、复方新诺明等磺胺嘧啶、甲氧苄胺嘧啶、复方新诺明等2.作用机制作用机制n影响核酸合成，抑制细菌生长繁殖影响核酸合成，抑制细菌生长繁殖第二十九页，本课件共有51页六、其他抗生素六、其他抗生素1.四环素类四环素类n种类：四环素、土霉素、多西环素（强力）种类：四环素、土霉素、多西环素（强力）n作用机制：与细菌作用机制：与细菌30S亚基结合，抑制蛋亚基结合，抑制蛋 白质合成白质合成2.氯霉素类氯霉素类n种类：氯霉素、甲砜霉素种类：氯霉素、甲砜霉素n作用机制：与细菌作用机制：与细菌50S亚基结合，抑制蛋白亚基结合，抑制蛋白质合成质合成第三十页，本课件共有51页3.

17、硝基呋喃类硝基呋喃类n种类：呋喃妥因、呋喃唑酮（痢特灵）种类：呋喃妥因、呋喃唑酮（痢特灵）n作用机制：干扰细菌体内氧化还原酶系统作用机制：干扰细菌体内氧化还原酶系统4.硝基咪唑类硝基咪唑类n种类：甲硝唑、替硝唑种类：甲硝唑、替硝唑n作用机制：阻断细菌作用机制：阻断细菌DNA合成合成第三十一页，本课件共有51页抗菌药物的作用机制抗菌药物的作用机制第三十二页，本课件共有51页抗菌药物的主要作用部位抗菌药物的主要作用部位喹诺酮类喹诺酮类林可霉素类林可霉素类氨基糖苷类氨基糖苷类酮康唑酮康唑环丝氨酸环丝氨酸利福平利福平红霉素红霉素制霉菌素制霉菌素杆菌肽杆菌肽甲氧苄胺嘧啶甲氧苄胺嘧啶四环素类四环素类两性霉

18、素两性霉素B万古霉素万古霉素磺胺药磺胺药氯霉素氯霉素多粘菌素类多粘菌素类-内酰胺类内酰胺类抑制核酸合成抑制核酸合成核糖体核糖体细胞膜细胞膜细胞壁细胞壁第三十三页，本课件共有51页第二节第二节 细菌的耐药性和产生机制细菌的耐药性和产生机制n细菌的耐药性细菌的耐药性：对某种药物敏感细菌变成：对某种药物敏感细菌变成对该药物耐受对该药物耐受n机制机制n产生耐药酶：水解酶、钝化酶等产生耐药酶：水解酶、钝化酶等n药物作用的靶位点改变药物作用的靶位点改变n细胞膜的通透性改变细胞膜的通透性改变n细菌主动外排细菌主动外排 第三十四页，本课件共有51页一、产生药物灭活酶一、产生药物灭活酶（一）（一）水解酶水解酶-

19、内酰胺酶内酰胺酶n是以是以-内酰胺类抗菌药物为水解底物的多种同内酰胺类抗菌药物为水解底物的多种同类型的降解酶。包括广谱内酰胺酶、类型的降解酶。包括广谱内酰胺酶、超广谱酶超广谱酶-内酰胺（内酰胺（ESBLs）、金属酶、金属酶、AmpC酶等酶等n细菌产生的细菌产生的-内酰胺酶可特异性打开内酰胺酶可特异性打开-内酰内酰胺环，使其完全失去抗菌活性。胺环，使其完全失去抗菌活性。nESBLs阳性菌：对所有阳性菌：对所有-内酰胺类药物耐药内酰胺类药物耐药第三十五页，本课件共有51页（二）钝化酶产生（二）钝化酶产生1.氨基糖苷类钝化酶氨基糖苷类钝化酶2.氯霉素乙酰转移酶氯霉素乙酰转移酶3.红霉素和其他灭活酶红

20、霉素和其他灭活酶（三）修饰酶（三）修饰酶1.乙酰转移酶乙酰转移酶AAC2.核苷转移酶核苷转移酶ANT3.磷酸转移酶磷酸转移酶APH第三十六页，本课件共有51页第三十七页，本课件共有51页第三十八页，本课件共有51页1.青霉素结合蛋白改变青霉素结合蛋白改变2.DNA解旋酶改变解旋酶改变三、抗菌药物渗透障碍三、抗菌药物渗透障碍外膜蛋白减少外膜蛋白减少四、药物的主动转运系统四、药物的主动转运系统外排作用外排作用二、药物作用靶位的改变二、药物作用靶位的改变第三十九页，本课件共有51页第三节第三节 细菌耐药性检查方法细菌耐药性检查方法常用方法常用方法n耐甲氧西林葡萄球菌检测耐甲氧西林葡萄球菌检测n克林霉

21、素诱导耐药试验克林霉素诱导耐药试验 n肠球菌高水平氨基糖苷类耐药肠球菌高水平氨基糖苷类耐药 n内酰胺酶检测内酰胺酶检测n超广谱超广谱内酰胺酶纸片法检测内酰胺酶纸片法检测 第四十页，本课件共有51页一、一、-内酰胺酶检测内酰胺酶检测n原理：原理：-内酰胺酶是一类水解青霉素、内酰胺酶是一类水解青霉素、头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于头孢菌素类抗生素的灭活酶；该酶位于G+球菌菌体外，球菌菌体外，G-杆菌周浆间隙。杆菌周浆间隙。n检测方法：常用头孢硝噻吩纸片法检测方法：常用头孢硝噻吩纸片法第四十一页，本课件共有51页头孢硝塞吩纸片法（头孢硝塞吩纸片法（nitrocefin test）头孢硝塞吩的内酰

22、胺环被头孢硝塞吩的内酰胺环被-内酰胺酶打开，内酰胺酶打开，基质由黄色变为红色。基质由黄色变为红色。nG+菌直接取培养物菌直接取培养物nG-菌取细菌裂解液菌取细菌裂解液第四十二页，本课件共有51页二、二、ESBLs检测检测ESBLs：扩大了原来的底物谱，可以水解青：扩大了原来的底物谱，可以水解青霉素和一、二、三代头孢菌素以及单环类抗霉素和一、二、三代头孢菌素以及单环类抗生素。生素。1.纸片法检测纸片法检测 双相纸片试验双相纸片试验2.液体稀释法检测液体稀释法检测第四十三页，本课件共有51页筛选试验筛选试验：头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、：头孢泊肟、头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟头孢噻肟确证试验确证试验

23、：头孢他啶、头孢他啶：头孢他啶、头孢他啶/克拉维酸克拉维酸 头孢噻肟头孢噻肟 头孢噻肟头孢噻肟/克拉维酸克拉维酸第四十四页，本课件共有51页n双纸片协同法（初筛试验）双纸片协同法（初筛试验）n中央是酶抑制剂（克拉维酸）中央是酶抑制剂（克拉维酸）n周围分别是头孢他啶、周围分别是头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、头孢泊肟纸片氨曲南、头孢泊肟纸片第四十五页，本课件共有51页E-test法：n稀释法判断标准：加克拉维酸稀释法判断标准：加克拉维酸MIC值较未加克值较未加克拉维酸拉维酸MIC值小值小8倍以上（即倍以上（即3个稀释度），即个稀释度），即为为ESBLs阳性。阳性。第四十

24、六页，本课件共有51页三、耐甲氧西林葡萄球菌（三、耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）检测）检测n定义定义：对：对1/mlml苯唑西林纸片的抑菌圈苯唑西林纸片的抑菌圈直径直径10mm10mm，或其，或其MIC4 MIC4/mlml的金黄色的金黄色葡萄球菌；葡萄球菌；对对1/mlml苯唑西林纸片的抑苯唑西林纸片的抑菌圈直径菌圈直径17mm17mm，或其，或其MIC0.5MIC0.5/mlml的的凝固酶阴性葡萄球菌凝固酶阴性葡萄球菌n常用方法常用方法：头孢西丁纸片扩散法：头孢西丁纸片扩散法 苯唑西林苯唑西林琼脂稀释法琼脂稀释法 第四十七页，本课件共有51页头孢西丁纸片法头孢西丁纸片法第四十八页，本课件共有51页苯唑西林琼脂稀释法苯唑西林琼脂稀释法第四十九页，本课件共有51页四、克林霉素诱导耐药试验四、克林霉素诱导耐药试验 纸片相邻试验纸片相邻试验D-抑菌环抑菌环第五十页，本课件共有51页感感谢谢大大家家观观看看第五十一页，本课件共有51页