高效液相色谱法测定甲硝唑的含量优秀PPT.ppt

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1、高效液相色谱法测定甲硝唑的含量第一页，本课件共有26页实验项目实验项目一一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二二 氨茶碱加样回收率实验氨茶碱加样回收率实验 三三 氨茶碱溶液稳定性实验氨茶碱溶液稳定性实验 四四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五五 氨茶碱原料药稳定性实验氨茶碱原料药稳定性实验 六六 五味子散剂的制备五味子散剂的制备 七七 SODSOD的含量测定的含量测定 八八 芦丁的提取和鉴别芦丁的提取和鉴别 第二页，本课件共有26页实验要求实验要求1 1课前认真预习课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方法及步，明确本次实验

2、的目的、要求、内容、方法及步骤骤2 2提前提前5-10min5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，做好做好实验准备工作实验准备工作。3 3实验时严肃认真实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观察和，根据实验指导要求进行操作，仔细观察和记录，并进行独立思考，记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报告。按时完成实验内容和实验报告。4 4保持实验室安静保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严禁，实验时不得随意走动和谈笑。室内严禁吸烟、不允许在实验室内接听手机吸烟、不允许在实验室内接听手机.第三页，本课件共有26页5 5保持实验

3、室清洁整齐保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置，不能，书包、衣帽等应放在指定位置，不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回原处。置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回原处。6 6爱护爱护实验室一切仪器设备，实验室一切仪器设备，珍惜珍惜药品及一切消耗用品药品及一切消耗用品(如纱如纱布、拭镜纸、载玻片等布、拭镜纸、载玻片等)，节约节约水、电。按操作规程使用显水、电。按操作规程使用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，如微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，如发现损坏或故障应及时报告指导教师。发现损坏或故障应及时报告指导教师。7 7实验完毕后，实验完

4、毕后，值日生值日值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、电、。值日工作范围包括：关闭水、电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实验台，桌椅，门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上登记值日情况，再地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上登记值日情况，再交交于老师签字后方可离开。于老师签字后方可离开。第四页，本课件共有26页考核考核办法法Y实验习惯实验习惯1010：迟到迟到1 1次扣次扣1 1分，旷课一次扣分，旷课一次扣3 3分，值日生必须最后走，早走者扣分，值日生必须最后走，早走者扣1 1分。分。Y预习报告预习报告10%10%：不能

5、简单抄书，要学会总结归纳。不能简单抄书，要学会总结归纳。Y实验报告实验报告2020：当堂绘图，当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。当堂交报告，迟交报告者要扣分。Y实验操作实验操作30%30%：要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分Y实验考试成绩实验考试成绩3030：操作操作10%10%，笔试，笔试20%20%Y迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实验的不迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实验的不能得良好，缺该课程能得良好，缺该课程1/31/3以上者或不

6、参加实验考试者，均没有实验成绩。以上者或不参加实验考试者，均没有实验成绩。第五页，本课件共有26页实验报告的书写格式：实验报告的书写格式：（1 1）实验名称名称（2 2）实验目的目的（3 3）实验内容及步内容及步骤（4 4）实验结果果第六页，本课件共有26页 实验一实验一 高效液相色谱法测定高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量甲硝唑的含量第七页，本课件共有26页高效液相色谱仪的主要结构及功能简介高效液相色谱仪的主要结构及功能简介1.1.高压输液泵高压输液泵2.2.进样器进样器3.3.高效分离柱高效分离柱4.4.液相色谱检测器液相色谱检测器5.5.记录仪记录仪第八页，本课件共有26页(1)高压输液泵

7、高压输液泵主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035010350105 5 Pa Pa。注意排气泡：注意排气泡：purgepurge流速设置流速设置第九页，本课件共有26页（2 2）进样器）进样器n样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速度样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平持稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平持进样针（液体吸取数量进样针（液体吸取数量可多余可多余2020L L），注），注入进样器。入进样器。n进样器存在的两个位置：进样器存在的两个位置：loadload（右上）（右上）和和injectinject。第十页，本课件共有26页(2)(2

8、)高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，柱体为直型不锈钢管，C18C18柱柱标准内径及柱长为标准内径及柱长为4.6*150mm4.6*150mm或或4.6*250mm4.6*250mm，填料填料颗粒粒度颗粒粒度5m5m。色谱柱色谱柱pHpH值范围不同：值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。酸性柱、碱性柱、中性柱。安装方向安装方向 柱温箱：保持温度稳定。柱温箱：保持温度稳定。第十一页，本课件共有26页(3)(3)液相色谱检测器液相色谱检测器a.a.紫外检测器紫外检测器 b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器c.c.示差折光检测器示差折光检测器d.d.荧光检测器荧光检测器e.e.电导检

9、测器电导检测器第十二页，本课件共有26页 紫外检测器紫外检测器 紫紫外外检检测测器器对对占占物物质质总总数数约约80%80%的的物物质质（有有机机和和部部分分无无机机物物质质）均均可可检检测测，既既可可测测190-350 190-350 nmnm范范围围的的光光吸吸收收变变化化，也也可向可见光范围可向可见光范围350-700 nm 350-700 nm 延伸。延伸。优优点点：应应用用最最广广，灵灵敏敏度度高高，线线性性范范围围宽宽。是是高高效效液液相相色色谱谱仪仪的的标标准准配配置置。它它的的最最重重要要特特征征是是对对流流动动相相的的流流速速（脉冲）和温度变化不敏感，可用于（脉冲）和温度变化

10、不敏感，可用于梯度洗脱梯度洗脱。缺缺点点：对对无无紫紫外外吸吸收收的的组组分分不不响响应应，而而对对紫紫外外吸吸收收较较大的溶剂如大的溶剂如苯苯不能作流动相使用。不能作流动相使用。第十三页，本课件共有26页高效液相色高效液相色谱的主要分离方法的主要分离方法 液相色谱根据液相色谱根据固定相性质固定相性质可分为以下几种：可分为以下几种：吸附色谱吸附色谱 (Adsorption Chromatography)(Adsorption Chromatography)键合相色谱键合相色谱（Bonded phase chromatographyBonded phase chromatography）离子交换

11、色谱（离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.Ion Exchanger Chromatogr.）空间排阻色谱（空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.Size Exclusion Chromatogr.）亲合色谱（亲合色谱（Affinity ChromatographyAffinity Chromatography）第十四页，本课件共有26页 在以上五种分离方式中，在以上五种分离方式中，反相键合相色谱反相键合相色谱应用应用最广，因为它采用最广，因为它采用醇醇水水或或腈腈水水体系作流动相。体系作流动相。纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添

12、加各种纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是物质可改变流动相选择性。使用最广的反相键合相是十八烷基键合相十八烷基键合相，即让十八烷基（，即让十八烷基（C18H37C18H37）键合）键合到硅胶表面。这种键合相又称到硅胶表面。这种键合相又称ODSODS（OctadecylsilylOctadecylsilyl）键合相，如国外的）键合相，如国外的partisil5-partisil5-ODSODS、Zorbax-ODSZorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODSShim-pack CLC-ODS，国产的，国产的YWG-YWG-C1

13、8C18等。等。第十五页，本课件共有26页实验目的实验目的 熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；了解反相色了解反相色谱法的原理、法的原理、优点和点和应用。用。了解流动相的选择依据及配制方法；了解流动相的选择依据及配制方法；掌握高效液相色掌握高效液相色谱法法进行定性和定量分析的基行定性和定量分析的基 本方法。本方法。第十六页，本课件共有26页实验原理实验原理 高效液相色谱法是采用高效液相色谱法是采用高压输液泵高压输液泵将规定的流动相泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由

14、流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以实验以甲硝唑为测定对象，以反相反相HPLCHPLC来分离来分离检测未知检测未知样中甲硝唑的含量样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积。以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。线性方程计算其浓度。第十七页，本课件共有26页实验器材与材料器材与材料实验器材：器材：高效液

15、相色高效液相色谱仪、精密天平、精密天平、50ml烧杯、玻璃棒、称量杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、容量瓶、50ml容量瓶、注射器、洗瓶、容量瓶、注射器、洗瓶、EP管、管、滤膜。膜。实验材料：材料：甲硝甲硝唑原料、蒸原料、蒸馏水、水、HCl、乙、乙腈、三氟乙酸、超三氟乙酸、超纯水。水。0.1M HCl溶液配制：溶液配制：准确量取准确量取HCl溶液溶液 8.3ml,用蒸用蒸馏水定容至水定容至1000ml，即得。，即得。第十八页，本课件共有26页实验步骤实验步骤 色谱操作条件色谱操作条件;标准溶液配制；标准溶液配制；标准曲线的建立；标准曲线的建立；样品溶液的配制；样品溶液的配制；甲硝唑样品含量测

16、定。甲硝唑样品含量测定。第十九页，本课件共有26页 色谱柱：色谱柱：C18C18柱（柱（1504.6mm,1504.6mm,5m5m）；）；流动相：乙腈：流动相：乙腈：0.02%0.02%三氟乙酸水溶液（三氟乙酸水溶液（2020：8080）流速：流速：1mL/min1mL/min 检测波长：检测波长：277nm277nm 柱温：柱温：3535 进样量：进样量：2020L L1.1.色谱操作条件：色谱操作条件：第二十页，本课件共有26页2.2.标准溶液配制标准溶液配制 精密称取在精密称取在105105条件下干燥至恒重的条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品甲硝唑对照品10mg10mg，置于，置于50mL

17、50mL容量瓶中，用容量瓶中，用0.1M HCl0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为为0.2mg/mL0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。的甲硝唑标准储备液，备用。第二十一页，本课件共有26页3 3、标准曲线的建立、标准曲线的建立 精密量取甲硝唑标准储备液分别为精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml0.3ml、0.5ml0.5ml、0.7ml0.7ml、0.9ml0.9ml、1.1ml1.1ml置于置于10ml10ml的容量的容量瓶中，然后用瓶中，然后用0.1M HCl0.1M HCl溶液定容至刻度，得到溶液定容至刻度，得到浓度梯度为浓度梯度为

18、6g/mL6g/mL、10g/mL10g/mL、14g/mL14g/mL、18g/mL18g/mL和和22g/mL22g/mL的标准溶液，的标准溶液，分别过分别过0.220.22m m的微孔滤膜过滤，滤液置于的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml1.5ml的的EPEP管中并标号，管中并标号，各进样各进样20L20L检测，以浓度为横检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归。第二十二页，本课件共有26页线性要求：性要求：色色谱峰峰分离度大于分离度大于1.5，浓度点度点n n5 5。用。用浓度度c c对峰面峰面积A A作作线性回性回归处理，得一直理，得一直线方程

19、，方程，r r应应大于大于0.999，方程的截距，方程的截距应近于零。近于零。第二十三页，本课件共有26页4.4.样品溶液的配制样品溶液的配制精密称取甲硝精密称取甲硝唑原料原料药10mg，置于，置于50ml容量瓶中，用容量瓶中，用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，溶液溶解并定容至刻度，摇匀，再从中取出匀，再从中取出0.7ml定容至定容至10ml，即得甲，即得甲硝硝唑样品溶液。品溶液。第二十四页，本课件共有26页5.5.甲硝唑样品含量测定甲硝唑样品含量测定 用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液适量，适量，过过0.220.22m m的微孔滤膜过滤，滤液置于的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml1.5ml的的EPEP管中并标号，管中并标号，再从中吸取再从中吸取20L20L注入注入液相色谱仪，采用高效液相色谱法在液相色谱仪，采用高效液相色谱法在277nm277nm波波长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准曲线计算样品中甲硝唑的含量。曲线计算样品中甲硝唑的含量。第二十五页，本课件共有26页实验结果果1.1.标准曲线方程及绘制标准曲线方程及绘制2.2.甲硝唑样品含量甲硝唑样品含量第二十六页，本课件共有26页