中药制剂的含量测定精选课件.ppt

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1、关于中药制剂的含量测定第一页，本课件共有111页2第一节第一节 含量测定的目的与意义含量测定的目的与意义 中药制剂质量优劣的标准中药制剂质量优劣的标准鉴别鉴别检查检查含量测定含量测定中药制剂的中药制剂的鉴别鉴别是研究某种是研究某种原料药或成分的存在与否，原料药或成分的存在与否，从而判定药物的从而判定药物的真伪真伪中药制剂中药制剂含量测定含量测定是研究某种是研究某种成分的含量高低是否符合规定成分的含量高低是否符合规定来判定药物的来判定药物的优劣优劣，是质量控，是质量控制中的一项重要指标。制中的一项重要指标。第二页，本课件共有111页3 通过测定制剂中有效成分、毒性通过测定制剂中有效成分、毒性成分

2、或某些指标性成分的含量来衡成分或某些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量优劣，以保证中药制剂的质量，质量优劣，以保证中药制剂的质量，达到临床用药安全、有效和中药制达到临床用药安全、有效和中药制剂进入国际市场的需要。剂进入国际市场的需要。中药制剂含量测定的意义中药制剂含量测定的意义第三页，本课件共有111页4中药制剂含量测定的特点中药制剂含量测定的特点含量测定内容含量测定内容中药制剂中药制剂化学药品化学药品对象不同对象不同组成及成分复杂组成及成分复杂成分单一成分单一供试品溶液制备供试品溶液制备方法繁琐，大多需方法繁琐，大多需要净化分离要净化分离方法

3、简单方法简单成分明确成分明确待测成分确定待测成分确定先根据中医药理论先根据中医药理论选择药味，再综合选择药味，再综合选择待测成分选择待测成分一般选择主一般选择主要成分要成分中药制剂与化学药品含量测定区别中药制剂与化学药品含量测定区别第四页，本课件共有111页51 样品的处理样品处理的主要作用样品处理的主要作用释放被测组分，制成稳定试样释放被测组分，制成稳定试样除去杂质，纯化除去杂质，纯化浓缩浓缩试样形式符合测定的要求试样形式符合测定的要求样品处理的主要步骤样品处理的主要步骤1.样品的粉碎样品的粉碎2.样品的提取样品的提取3.样品的分离纯化样品的分离纯化第五页，本课件共有111页61 样品的处理

4、样品的粉碎样品的粉碎目的目的1.取样均匀取样均匀 2.提取完全提取完全粉碎设备粉碎设备粉碎机、研钵、匀浆机粉碎机、研钵、匀浆机 粒度大小合适粒度大小合适 样品粉末的分级（过筛）样品粉末的分级（过筛）防止污染或损失防止污染或损失 仪器设备洁净仪器设备洁净 粉尘和较大颗粒的损失。粉尘和较大颗粒的损失。第六页，本课件共有111页71 样品的处理样品的提取样品的提取 关键关键提取完全提取完全溶剂的选择溶剂的选择水、酸水、碱水水、酸水、碱水亲水性的有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮亲水性的有机溶剂：乙醇、甲醇、丙酮亲脂性的有机溶剂：石油醚、苯、氯仿、亲脂性的有机溶剂：石油醚、苯、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、二氯乙烷乙

5、醚、乙酸乙酯、二氯乙烷 第七页，本课件共有111页8常见的提取方法：常见的提取方法：萃取法萃取法 浸浸渍法渍法 回流提取法回流提取法 连续回流连续回流提取法提取法 超声提取法超声提取法 水蒸气蒸馏法水蒸气蒸馏法 超临界流体提取法超临界流体提取法 微波辅助萃取法微波辅助萃取法1 样品的处理样品的提取样品的提取 第八页，本课件共有111页9优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提优点：操作简单，适于热不稳定的样品，且提取杂质少取杂质少缺点：费时（缺点：费时（12-24 h12-24 h）费溶剂（）费溶剂（10-5010-50倍）倍）1 样品的处理样品的提取样品的

6、提取 （一）冷浸法（一）冷浸法操作：操作：样品样品精密称定精密称定置容器内置容器内精密加入溶剂精密加入溶剂称定重量称定重量浸泡（浸泡（1224h）称重称重补足重量补足重量测定测定测定方法：测定方法：全部测定法：全部测定法：过滤过滤滤液滤液蒸干蒸干定容定容测定测定（残渣残渣需洗涤完全需洗涤完全）部分测定法部分测定法：过滤：过滤滤液滤液取若干体积测定取若干体积测定（不适宜（不适宜挥发性较大的溶剂）挥发性较大的溶剂）第九页，本课件共有111页10 采用回流装置，用单一溶采用回流装置，用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热剂或混合溶剂于水浴上加热提取提取优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：提提取取效效率率高

7、高，提提取取时时间间短短，为为0.52小小时时；提提取取杂杂质质较较多多，不不适适用用于于热热不不稳稳定定或或具有挥发性的成分具有挥发性的成分1 样品的处理样品的提取样品的提取 （二）回流提取法（二）回流提取法（三）连续回流提取法（三）连续回流提取法万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定万应胶囊（黄连等）中盐酸小檗碱测定+HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定保和丸（陈皮等）中橙皮甙测定+甲醇，加热回流至提取液无色为止 用用索索氏氏提提取取装装置置，利利用用遇遇热热易易挥挥发发溶溶剂剂反反复复提取提取优缺点及适用范围：优缺点及适用范围：提提取取效效率率高高，所所需需溶溶剂

8、剂少少，提提取取杂杂质质较较少少，操操作作简简便便；受受热热易易分分解解的的成分不宜使用成分不宜使用。第十页，本课件共有111页111 样品的处理样品的提取样品的提取 （四）超声提取法（四）超声提取法原理：超声波的助溶作用原理：超声波的助溶作用优点：操作简便，提取速度快优点：操作简便，提取速度快 超声波可能引起供试品化学成分的改变超声波可能引起供试品化学成分的改变 需对超声频率、提取时间、提取溶媒等需对超声频率、提取时间、提取溶媒等进行考察进行考察第十一页，本课件共有111页121 样品的处理样品的提取样品的提取 （五）超临界流体提取法（五）超临界流体提取法（Supercritical-flu

9、id extractionSupercritical-fluid extraction，SFESFE）超临界流体超临界流体特殊的物质状态特殊的物质状态密度密度-d-d液体液体 溶解能力强溶解能力强粘度粘度-气体气体 传质快，有利于待测组分传质快，有利于待测组分的扩散的扩散表面张力几乎为表面张力几乎为 0 0 浸润性能好浸润性能好第十二页，本课件共有111页131 样品的处理样品的提取样品的提取 超临界流体提取法超临界流体提取法密度受压力、温度的影响大密度受压力、温度的影响大 改变对溶质的溶解能改变对溶质的溶解能力力加入甲醇、氯仿、苯等改变极性加入甲醇、氯仿、苯等改变极性 提取不同极性的提取不同

10、极性的成分成分优点：优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使用性较高、节省溶剂、易于自动化，而且可避免使用易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和光谱等分析仪易燃，有毒的有机溶剂，能与色谱和光谱等分析仪器直接联用器直接联用。第十三页，本课件共有111页141 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （一）沉淀法（一）沉淀法样品样品+沉淀剂沉淀剂 杂质杂质沉淀沉淀过滤过滤取滤液测定取滤液测定 待测组分待测组分沉淀沉淀重量法或溶解后测定重量法或溶解后测定蛇胆糖浆口服液蛇胆糖浆口服液含有大量糖，可用无水乙醇回流样品，含有大量

11、糖，可用无水乙醇回流样品，冷后过滤，除糖以消除其干扰。冷后过滤，除糖以消除其干扰。复方益母草口服液中水苏碱的含量测定复方益母草口服液中水苏碱的含量测定利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与利用雷氏盐（硫氰酸铬铵）作沉淀剂，在酸性介质中可与大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。大部分有机碱生成难溶于水的配合物与其它杂质分离。第十四页，本课件共有111页151 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （二）蒸馏法（二）蒸馏法适用于具适用于具挥发性挥发性的待测组分，如挥发油、的待测组分，如挥发油、小分子的生物碱、丹皮酚等小分子的生物碱、丹皮酚等最常用水蒸气蒸馏法最常用水蒸气蒸馏

12、法共水蒸馏法共水蒸馏法通水蒸气蒸馏法通水蒸气蒸馏法水上蒸馏法水上蒸馏法利用盐析作用，提高蒸馏效果利用盐析作用，提高蒸馏效果第十五页，本课件共有111页161 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （三）液（三）液-液萃取法液萃取法直接萃取法直接萃取法萃取剂的选择萃取剂的选择 亲脂性有机溶剂：如苯、氯仿或乙醚亲脂性有机溶剂：如苯、氯仿或乙醚弱亲脂性的溶剂：如乙酸乙酯、正丁醇等弱亲脂性的溶剂：如乙酸乙酯、正丁醇等多次萃取（多次萃取（3-43-4次）次）调整水相酸度，提取有机酸、有机碱调整水相酸度，提取有机酸、有机碱利用盐析作用，提高提取率利用盐析作用，提高提取率原理：原理：利用试样中被测成分与利

13、用试样中被测成分与干扰成分在有机溶剂（萃取剂）干扰成分在有机溶剂（萃取剂）中的中的溶解度溶解度不同，通过多不同，通过多次萃取达到分离净化的目次萃取达到分离净化的目的。的。第十六页，本课件共有111页171 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （三）（三）液液-液萃取法液萃取法离子对萃取法离子对萃取法 水相酸度的控制水相酸度的控制 离子对试剂的选择离子对试剂的选择BH+（水相）（水相）+In-(水相水相)BH+In-（水相）（水相）BH+In-（有机相）（有机相）生物碱生物碱离子对试剂：酸性染料，如离子对试剂：酸性染料，如BTB,BCG适合于高度电离的有机酸、适合于高度电离的有机酸、碱化合物

14、的萃取碱化合物的萃取弱极性离子对弱极性离子对第十七页，本课件共有111页181 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （四）色谱法（层析法）（四）色谱法（层析法）分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换分离原理：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱色谱、凝胶色谱按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱按操作方式：柱色谱、薄层色谱、纸色谱装柱方法：湿法装柱、干法装柱装柱方法：湿法装柱、干法装柱微柱色谱（固相萃取微柱色谱（固相萃取LSE）第十八页，本课件共有111页191 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 LSE常用净化剂（填料）常用净化剂（填料）硅胶硅胶：酸性吸附剂酸性吸附剂，适用于中性

15、或酸性成分的层析，适用于中性或酸性成分的层析，强烈保留碱性化合物。强烈保留碱性化合物。洗脱顺序：极性小洗脱顺序：极性小大大氧化铝氧化铝：带有碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜：带有碱性，分离一些碱性中草药成分，不宜用于醛、酮、内酯等类型的化合物分离用于醛、酮、内酯等类型的化合物分离 中性、酸性氧化铝：适用于酸性成分的分离中性、酸性氧化铝：适用于酸性成分的分离第十九页，本课件共有111页201 样品的处理键合相硅胶键合相硅胶（C C1818或或ODSODS）:分开脂溶性和水溶性成分分开脂溶性和水溶性成分操作程序：操作程序：柱的活化；柱的活化；上样；上样；清洗；清洗；洗脱洗脱洗脱顺序：极性大洗脱顺

16、序：极性大小小大孔树脂大孔树脂分为极性（丙烯酰胺聚合物分为极性（丙烯酰胺聚合物 ）和非极性（苯乙）和非极性（苯乙烯和二乙烯苯的共聚物）型烯和二乙烯苯的共聚物）型 使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、使用前需要用有机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗碱清洗 第二十页，本课件共有111页211 样品的处理聚酰胺聚酰胺：与溶质形成：与溶质形成氢键氢键而产生吸附作用，常用含酚、而产生吸附作用，常用含酚、酸、醌类药物样品液的净化分离。酸、醌类药物样品液的净化分离。硅藻土、纤维素硅藻土、纤维素：亲水型填料亲水型填料，以水基质液作为固定，以水基质液作为固定相，与水不混溶的有机溶剂为流动相的相，与水不

17、混溶的有机溶剂为流动相的分配色谱分配色谱离子交换树脂离子交换树脂：用于除去样品中的：用于除去样品中的离子离子及萃取及萃取可离解化可离解化合物合物(弱酸、弱碱药物弱酸、弱碱药物)活性炭活性炭：非极性吸附剂非极性吸附剂使用前需先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于使用前需先用稀盐酸洗涤，其次用乙醇洗，再以水洗净，于8080干燥干燥分开水溶性芳香族物质与脂肪族物质，单糖与多糖，氨基分开水溶性芳香族物质与脂肪族物质，单糖与多糖，氨基酸与多肽酸与多肽第二十一页，本课件共有111页221 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （五）固相微萃取（五）固相微萃取 （SPME）集萃取、浓缩、进样于一体的

18、样品前处理新方法集萃取、浓缩、进样于一体的样品前处理新方法第二十二页，本课件共有111页231 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 （六）消化法（六）消化法测定中药制剂中的无机元素测定中药制剂中的无机元素湿法消化湿法消化硝酸高氯酸法：适用于血，尿、组织等生物样适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂的破坏品和含动植物药制剂的破坏 对含氮杂环类有机物破坏不够完全对含氮杂环类有机物破坏不够完全 硝酸硫酸法：与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属离子的测定，不宜采有此法。子的测定，不宜采有此法。硫酸硫酸盐法：常用于：常用于含砷或锑含砷或锑的有机样品的破的有机样品的破坏，破

19、坏后得到三价砷或锑。坏，破坏后得到三价砷或锑。第二十三页，本课件共有111页241 样品的处理样品的分离纯化样品的分离纯化 控制温度在控制温度在420420以下以下灰化完全，切勿弃去不易溶灰分灰化完全，切勿弃去不易溶灰分不适用于含易挥发性金属不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等，）（如汞、砷等，）有机样品的破坏。有机样品的破坏。灼烧灰化(+Na2CO3/MgO)供试品供试品 灰分灰分干法消化干法消化第二十四页，本课件共有111页252 2 常用定量分析方法常用定量分析方法 重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法重量分析法：挥发法、萃取法和沉淀法 一、化学分析法一、化学分析法适用于适用于含量较高含量较

20、高的成分及的成分及无机成分无机成分的测定的测定滴定分析法滴定分析法 酸碱滴定法酸碱滴定法 沉淀滴定法沉淀滴定法配位滴定法配位滴定法氧化还原滴定法氧化还原滴定法 第二十五页，本课件共有111页262 2 常用定量分析方法常用定量分析方法重量分析重量分析挥发法：挥发法：又叫汽化或干燥法又叫汽化或干燥法如水分测定及干燥失重测定如水分测定及干燥失重测定萃取法：萃取法：又称为提取法或抽取法又称为提取法或抽取法如冰片散中冰片的含量测定如冰片散中冰片的含量测定沉淀法沉淀法：如苦参片中苦参总碱的含量测定：如苦参片中苦参总碱的含量测定第二十六页，本课件共有111页272 2 常用定量分析方法常用定量分析方法滴定

21、分析滴定分析酸碱滴定法：酸碱滴定法：测定生物碱、有机酸、内酯类测定生物碱、有机酸、内酯类 沉淀滴定法沉淀滴定法银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物银量法：生物碱的氢卤酸盐及有机卤化物四苯硼钠法：四苯硼钠法：+生物碱生物碱白色沉淀白色沉淀亚铁氰化钾法亚铁氰化钾法配位滴定法配位滴定法（EDTA法和硫氰酸铵法）：测定鞣法和硫氰酸铵法）：测定鞣质、生物碱及含质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、Hg2+等等矿物矿物类制剂类制剂的含量的含量氧化还原滴定法：氧化还原滴定法：酚类、糖类及矿物药中酚类、糖类及矿物药中Fe、As等成分的中药制剂；分为碘量法、高锰酸钾法和等成分的中药制剂；分为碘量法、高锰酸

22、钾法和亚硝酸钠法等亚硝酸钠法等第二十七页，本课件共有111页282 2 常用定量分析方法常用定量分析方法二、紫外可见分光光度法二、紫外可见分光光度法第二十八页，本课件共有111页290.575光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器信号处理及显示信号处理及显示2 2 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法紫外分光光度计基本构造紫外分光光度计基本构造第二十九页，本课件共有111页302 2 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法（一）单波长分光光度法（一）单波长分光光度法吸收系数法（CHP最为常用）最为常用）A=ECLA=ECL（朗

23、伯朗伯-比尔定律：比尔定律：物质对物质对单色光单色光吸收特性吸收特性与与浓度、液层厚度浓度、液层厚度关系定律关系定律）对照品比较法对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（对照品溶液浓度应与供试品浓度接近（1001010010）标准曲线法要求：要求：选择被测成分的选择被测成分的 max为测定波长为测定波长，而共存组分在，而共存组分在此波长处基本无吸收，并控制供试液的此波长处基本无吸收，并控制供试液的吸收度读吸收度读数在数在0.3-0.7之间之间第三十页，本课件共有111页312 2 常用定量分析方法常用定量分析方法吸收系数法吸收系数法 测定供试品溶液在规定波长处的吸收度测定供试品溶液在规定波长处的吸收

24、度A A，根据，根据A=clA=cl，若，若l l和吸光系数和吸光系数或或 已知，即可求已知，即可求出被测物的浓度。出被测物的浓度。例例:小檗碱溶液在小檗碱溶液在345nm345nm处的处的 为为728728，现测的某，现测的某小檗碱溶液在小檗碱溶液在345nm345nm出的吸收度为出的吸收度为0.58240.5824，计，计算该小檗碱溶液的浓度。算该小檗碱溶液的浓度。第三十一页，本课件共有111页322 2 常用定量分析方法常用定量分析方法标准曲线法标准曲线法 从标准品吸光度从标准品吸光度-浓度曲线求得样品溶液的浓度浓度曲线求得样品溶液的浓度 对照品对照法对照品对照法在一定线性范围内根据在一

25、定线性范围内根据Lambert-Beer Lambert-Beer 定律溶液的浓定律溶液的浓度和吸光度存在以下关系度和吸光度存在以下关系第三十二页，本课件共有111页332 2 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法（二）计算分光光度法（二）计算分光光度法双波长分光光度法双波长分光光度法（等吸收点法、系数倍率法）（等吸收点法、系数倍率法）三波长法三波长法导数光谱法导数光谱法 一般应用于供试品溶液中含有一般应用于供试品溶液中含有2 2中或中或2 2种以上的组种以上的组分的含量测定。分的含量测定。差示光谱法差示光谱法 利用比样品浓度稍低的标准品作为空白利用比样品浓度稍

26、低的标准品作为空白,进行测定及计算的方法进行测定及计算的方法.第三十三页，本课件共有111页34为干扰组分的吸收光谱为待测组分的吸收光谱为混合组分的吸收光谱关键步骤：选择1和2的基本条件干扰组分在1 1和2 2处应具有相同的吸收度待测组分在这两个波长处的吸收光度差值应足够大波长波长(1、2)双波长法等吸收点法双波长法等吸收点法a bc计算分光光度法第三十四页，本课件共有111页35分析步骤 选择双波长（1、2）绘制标准曲线 对浓度作图（回归）样品测定 1、2，分别测定1及2 应用条件：吸收曲线有峰和谷双波长法等吸收点法双波长法等吸收点法a bc计算分光光度法第三十五页，本课件共有111页362

27、 2 常用定量分析方法常用定量分析方法紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法紫外光谱法中对仪器和试剂的要求紫外光谱法中对仪器和试剂的要求（1 1）仪器的校正和检定：包括波长精度、吸收度的）仪器的校正和检定：包括波长精度、吸收度的准确性、杂散光等。准确性、杂散光等。（2 2）对溶剂的要求：）对溶剂的要求：用用1cm1cm石英池盛装溶剂，以空气为空白，石英池盛装溶剂，以空气为空白，测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度在测定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度在220nm240nm220nm240nm范范围内不得超过围内不得超过0.400.40；在；在241nm250nm241nm250nm范围内不得超过范围

28、内不得超过0.200.20；在；在251nm300nm251nm300nm的范围内不得超过的范围内不得超过0.100.10；300nm300nm以上不得超以上不得超过过0.050.05。第三十六页，本课件共有111页372 2 常用定量分析方法常用定量分析方法三、薄层扫描法（三、薄层扫描法（TLCSTLCS）薄层扫描法是指薄层色谱斑点的色谱扫描，薄层色谱薄层扫描法是指薄层色谱斑点的色谱扫描，薄层色谱扫描是指固定波长，斑点移动，测定扫描是指固定波长，斑点移动，测定A-tA-t或或F-lF-l曲线。根曲线。根据薄层扫描的测定方式分为据薄层扫描的测定方式分为薄层吸收扫描法薄层吸收扫描法和和薄层荧光薄

29、层荧光扫描法扫描法二种方法。二种方法。第三十七页，本课件共有111页382 2 常用定量分析方法常用定量分析方法薄层扫描法（薄层扫描法（TLCSTLCS）1.1.薄层吸收扫描法薄层吸收扫描法 光源：光源：钨灯和氘灯；钨灯和氘灯；灵敏度：灵敏度：在在200-800nm200-800nm波长范围内选择合适波长进波长范围内选择合适波长进行测定，其灵敏度可达行测定，其灵敏度可达ngng级；级；适用范围：适用范围：适用于在可见、紫外区有吸收的物质，适用于在可见、紫外区有吸收的物质，及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组及通过色谱前或色谱后衍生成上述化合物的样品组分。分。第三十八页，本课件共有111

30、页392 2 常用定量分析方法常用定量分析方法薄层扫描法（薄层扫描法（TLCSTLCS）2.2.薄层荧光扫描法薄层荧光扫描法 光源：光源：氖灯或汞灯氖灯或汞灯;灵敏度：灵敏度：最低可测到最低可测到10-50pg;10-50pg;适用范围：适用范围：适合于本身具有荧光或经过适当处适合于本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的物质的测定。理后可产生荧光的物质的测定。第三十九页，本课件共有111页402 2 常用定量分析方法常用定量分析方法四、气相色谱法（四、气相色谱法（GCGC）基本原理基本原理 气相色谱法（气相色谱法（GCGC）是将气化后的试样由）是将气化后的试样由载气载气（流动相）带入色谱柱，

31、根据各组分在流动相和（流动相）带入色谱柱，根据各组分在流动相和固定相间作用的不同而分离，并随载气依次流出固定相间作用的不同而分离，并随载气依次流出色谱柱，经检测器检测，利用色谱柱，经检测器检测，利用保留值保留值进行定性，进行定性，色色谱峰面积或峰高谱峰面积或峰高进行定量的分析方法。进行定量的分析方法。第四十页，本课件共有111页412 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）基本原理基本原理 气气气气-固色谱固色谱固色谱固色谱气气气气-液色谱液色谱液色谱液色谱吸附色谱吸附色谱吸附色谱吸附色谱分配色谱分配色谱分配色谱分配色谱填充柱色谱填充柱色谱填充柱色谱填充柱色谱

32、毛细管柱色谱毛细管柱色谱毛细管柱色谱毛细管柱色谱1.1.1.1.按固定相分按固定相分 3.3.3.3.按柱子粗细分按柱子粗细分按柱子粗细分按柱子粗细分 GCGC分类分类 2.2.2.2.按分离原理分按分离原理分按分离原理分按分离原理分 第四十一页，本课件共有111页422 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）基本概念基本概念 色谱峰：由电信号强度对时间作图所色谱峰：由电信号强度对时间作图所绘制的曲线。（正态分布曲线）绘制的曲线。（正态分布曲线）不正常的色谱峰：前延峰、拖尾峰不正常的色谱峰：前延峰、拖尾峰 常用定量参数：峰高、峰面积常用定量参数：峰高、峰面积 常

33、用定性参数：峰位常用定性参数：峰位 用于衡量柱效：峰宽用于衡量柱效：峰宽 第四十二页，本课件共有111页432 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）基本概念基本概念 基线：在操作条件下，没有组分流出时基线：在操作条件下，没有组分流出时的流出曲线，横轴直线。的流出曲线，横轴直线。保留值保留值 保留时间保留时间t tR R 保留体积保留体积V VR R 死时间死时间t t0 0 死体积死体积V V0 0 调整保留时间调整保留时间ttR R 调整调整保留体积保留体积VVR R 第四十三页，本课件共有111页442 2 常用定量分析方法常用定量分析方法第四十四页，本课

34、件共有111页452 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）塔板理论塔板理论 塔板理论将色谱柱看作一个分馏塔板理论将色谱柱看作一个分馏塔，待分离组分在分馏塔的塔板间塔，待分离组分在分馏塔的塔板间移动，在每一个塔板内组分分子在移动，在每一个塔板内组分分子在固定相和流动相之间形成平衡，随固定相和流动相之间形成平衡，随着流动相的流动，组分分子不断从着流动相的流动，组分分子不断从一个塔板移动到下一个塔板，并不一个塔板移动到下一个塔板，并不断形成新的平衡。一个色谱柱的塔断形成新的平衡。一个色谱柱的塔板数越多，则其分离效果就越好板数越多，则其分离效果就越好 第四十五页，本课

35、件共有111页462 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）柱效指标柱效指标理论塔板数理论塔板数n n及理论塔板高度及理论塔板高度H H 衡量色谱柱分离效果的参数：理衡量色谱柱分离效果的参数：理论塔板数论塔板数n n。10105 5-10-106 6 在一定高度内，组分可以在两项在一定高度内，组分可以在两项中达到分配平衡，次高度为理论塔板中达到分配平衡，次高度为理论塔板高度。高度。第四十六页，本课件共有111页472 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）柱效指标柱效指标理论塔板数理论塔板数n n及理论塔板高度及理论塔板高度H H

36、 第四十七页，本课件共有111页482 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）柱效指标柱效指标 指待测峰与其他峰、内标峰或特定的指待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间的分离情况。杂质对照峰之间的分离情况。分离度的计算分离度的计算衡量色谱分离条件优劣的参数衡量色谱分离条件优劣的参数第四十八页，本课件共有111页492 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）适用范围适用范围 挥发油及其它挥发性组分挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等。脑、丁香酚、龙脑等。中药制剂含水量、含醇量中药制剂含水

37、量、含醇量系统适用性试验系统适用性试验1.1.理论塔板数理论塔板数 n5.54(tR/W1/2)2 不得低于最小理论塔板数；柱长，柱填充、载不得低于最小理论塔板数；柱长，柱填充、载体性能等有影响。体性能等有影响。第四十九页，本课件共有111页502 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）系统适用性试验系统适用性试验2.2.分离度分离度 R=2(tR1-tR2)/(W1+W2)R1.5 R1.5（两峰完全分离）（两峰完全分离）3.3.重复性重复性 RSD2.0 RSD2.0 (n=5)(n=5)4.4.拖尾因子拖尾因子 T=W0.05h/2d1(d(d1 1峰极大

38、至峰前沿之间的距离峰极大至峰前沿之间的距离)峰高法定量时峰高法定量时 1.05T0.95 1.05T0.95 第五十页，本课件共有111页512 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择一、固定相的选择一、固定相的选择1.气气-液分配色谱柱液分配色谱柱固定液的选择固定液的选择按相似相溶原则选择按相似相溶原则选择按组分性质的主要差别选择按组分性质的主要差别选择 第五十一页，本课件共有111页522 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）按相似相溶原则选择按相似相溶原则选择 固定液与被测组分极性固定液与被测组

39、分极性“相似相溶相似相溶”非极性组分非极性组分选非极性固定液，选非极性固定液，按沸点顺序出柱，低沸点的先出柱按沸点顺序出柱，低沸点的先出柱 中等极性组分中等极性组分选中等极性固定液，选中等极性固定液，基本按沸点顺序出柱基本按沸点顺序出柱 强极性组分强极性组分选极性固定液选极性固定液 按极性顺序出柱，极性强的后出柱按极性顺序出柱，极性强的后出柱第五十二页，本课件共有111页532 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）按组分性质的主要差别选择按组分性质的主要差别选择 组分以沸点差别为主组分以沸点差别为主 选非极性固定液选非极性固定液 按沸点顺序出柱、沸点低的先出柱

40、按沸点顺序出柱、沸点低的先出柱 组分的极性差别为主组分的极性差别为主 选极性固定液选极性固定液 按极性强弱出柱、极性弱的先出柱按极性强弱出柱、极性弱的先出柱例：苯（例：苯（80.10C），环己烷（），环己烷（80.70C）选非极性柱选非极性柱 分不开；分不开；选中强极性柱选中强极性柱 较好分离，环己烷先出柱较好分离，环己烷先出柱第五十三页，本课件共有111页542 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择一、固定相的选择一、固定相的选择2.气气-固分配色谱柱固分配色谱柱固定相的选择固定相的选择吸附剂：活性炭（非极性）吸附剂：活性炭（非极

41、性）硅胶，硅胶，AlAl2 2O O3 3（极性，吸附力强）（极性，吸附力强）分子筛：吸附分子筛：吸附+分子筛分子筛高高分分子子多多孔孔微微球球：GDXGDX有有机机合合成成高高分分子子聚聚合合物物、吸附吸附+分配机制分配机制 第五十四页，本课件共有111页552 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择二、柱温的选择二、柱温的选择 沸点 固定液配比%柱温高（300-400）低 1-5200-250200-3005-10150-180100-20010-15平均 2/3低高 15-2550以下根据样品的沸点选择第五十五页，本课件共有11

42、1页562 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择三、载气的选择三、载气的选择柱效、柱压、灵敏度柱效、柱压、灵敏度 流速流速20-80mL/min20-80mL/min低流速低流速 氮气氮气*高流速高流速 氢气氢气 氦气氦气热导检测器热导检测器 氢气氢气 氦气氦气氢焰检测器、电子捕获检测器氢焰检测器、电子捕获检测器 氮气氮气 第五十六页，本课件共有111页572 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择 四、其他条件四、其他条件气化室（进样口）温度：气化室（进样口）温度：不超过

43、沸点不超过沸点50 50 高于柱温高于柱温30-50 30-50 检测室温度：检测室温度：高于柱温高于柱温3030左右左右进样量：进样量：气体气体0.1-1mL 0.1-1mL 液体液体 0.2-1L0.2-1L 第五十七页，本课件共有111页582 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）实验条件的选择实验条件的选择 五、检测器五、检测器热导检测器（热导检测器（TCDTCD）氢焰离子化检测器（氢焰离子化检测器（FIDFID）氮磷检测器（氮磷检测器（NPDNPD）电子捕获检测器（电子捕获检测器（ECDECD）第五十八页，本课件共有111页592 2 常用定量分析方

44、法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法峰面积的测量峰面积的测量1.1.正常峰正常峰2.2.不对称峰不对称峰3.3.自自动动求求和和（自自动动积积分分仪仪或或色色谱谱工工作作站站）：直直接接给给出出A A，h h，W W1/21/2 第五十九页，本课件共有111页602 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法 归一化法归一化法外标法外标法 校正因子内标法校正因子内标法 标准溶液加入法标准溶液加入法常用的定量分析方法常用的定量分析方法第六十页，本课件共有111页612 2 常用定量分析方法常用定量分析方法

45、气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法定量校正因子定量校正因子 第六十一页，本课件共有111页622 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法绝对校正因子绝对校正因子 第六十二页，本课件共有111页632 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法相对校正因子相对校正因子 第六十三页，本课件共有111页642 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法校正因子内标法校正因子内标法校正因子的计算校正因子的计算取内标物和待

46、测组分的对照液进样测定取内标物和待测组分的对照液进样测定A A取含有内标物的供试品溶液进样测定取含有内标物的供试品溶液进样测定A A 第六十四页，本课件共有111页652 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法 对内标物的基本要求1.1.内标物是原样品中不含有的组分内标物是原样品中不含有的组分2.2.内标物的保留时间应与待测组分相近，但彼此能内标物的保留时间应与待测组分相近，但彼此能完全分离完全分离(R1.5)(R1.5)3.3.内标物必须是纯度合乎要求的纯物质内标物必须是纯度合乎要求的纯物质第六十五页，本课件共有111页662 2 常用

47、定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法 内标法的优缺点优点优点定量结果与进样量的重复性无关定量结果与进样量的重复性无关与其他组分是否出峰无关与其他组分是否出峰无关用于测定药物中微量有效成分或杂质的含量用于测定药物中微量有效成分或杂质的含量测定的结果较为准确测定的结果较为准确缺点缺点 操作程序较为麻烦操作程序较为麻烦 寻找合适的内标物有困难寻找合适的内标物有困难第六十六页，本课件共有111页672 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法归一化法归一化法前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱

48、峰前提：试样中所有组分都产生信号并能检出色谱峰依据：组分含量与峰面积成正比依据：组分含量与峰面积成正比 第六十七页，本课件共有111页682 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法外标法外标法 以以待待测测组组分分纯纯品品为为对对照照物物，与与试试样样中中待待测测组分的响应信号相比较进行定量的方法组分的响应信号相比较进行定量的方法a a 工作曲线法工作曲线法b b 外标一点法外标一点法c c 外标两点法外标两点法 第六十八页，本课件共有111页692 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分

49、析方法外标法外标法 b b 外标一点法外标一点法 一种浓度对照物对比样品中待测组分含量前提：截距为0，对照品浓度与待测组分浓度接近 第六十九页，本课件共有111页702 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GC）定量分析方法定量分析方法外标法外标法 c c 外标两点法外标两点法 前前提提：选选取取两两点点对对照照品品的的浓浓度度，需需涵涵盖盖待待测测浓度浓度 外标法特点：外标法特点：外标法特点：外标法特点：1 1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰）不需要校正因子，不需要所有组分出峰）不需要校正因子，不需要所有组分出峰）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2 2）结结结

50、结果果果果受受受受进进进进样样样样量量量量、进进进进样样样样重重重重复复复复性性性性和和和和操操操操作作作作条条条条件件件件影影影影响响响响大大大大每次进样量应一致，否则产生误差每次进样量应一致，否则产生误差每次进样量应一致，否则产生误差每次进样量应一致，否则产生误差第七十页，本课件共有111页712 2 常用定量分析方法常用定量分析方法气相色谱法（气相色谱法（GCGC）定量分析方法定量分析方法标准溶液加入法标准溶液加入法精精密密称称量量被被测测组组分分的的对对照照品品，配配置置成成适适当当浓浓度度的的对对照照品品溶溶液液，取取一一定定量量，精精密密加加入入到到供供试试品品溶溶液液中中，依依据