真菌的检验教学文案.ppt
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1、真菌的检验图片霉菌的菌落l由于霉菌的菌丝较粗而长,因而霉菌的菌落较大,有的霉菌的菌丝蔓延,没有局限性,其菌落可扩展到整个培养皿,有的种则有一定的局限性,直径12厘米或更小。l菌落质地一般比放线菌疏松,外观干燥,不透明,呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状;l菌落与培养基的连接紧密,不易挑取;l菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。Photo of mould conoly真菌与食品腐败l由于它们生长缓慢和竞争能力不强,故常常在不适于细菌生长的食品中出现,这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品,含有抗菌素的食品等。l 由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻,以及抗菌素和辐照等贮
2、藏及保藏技术,它们能转换某些不利于细菌的物质,而促进致病细菌的生长。l有些霉菌能够合成有毒代谢产物霉菌毒素。l霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。酵母的生物学特征l酵母菌是单细胞真核微生物。l酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。l酵母菌无鞭毛,不能游动。l大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似,但比细菌菌落大而厚,菌落表面光滑、湿润、粘稠,容易挑起,菌落质地均匀,正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一,菌落多为乳白色,少数为红色,个别为黑色。l霉菌和酵母可以作为评价食品卫生质量的指示菌,并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。霉菌和酵母计数GB 4789.15-
3、2010l本标准规定了食品中霉菌和酵母(moulds and yeasts)计数的检验方法。l本标准适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数。霉菌和酵母的计数l定义:霉菌和酵母菌数的测定是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后,所得1克(毫升)检样中所含的霉菌和酵母菌落总数。(粮食样品是指1克粮食表面的霉菌总数。)l检测方法:平板倾注混合法。真菌检测与细菌检测l培培养养基基:细细菌菌是是计计数数平平板板;真真菌菌是是PDA(加抗菌素)、孟加拉红培养基。(加抗菌素)、孟加拉红培养基。l温度:细菌温度:细菌3737,真菌,真菌25252828l培养时间:细菌培养时间:细菌2 2天,霉菌天,霉菌3-53-
4、5天天l计计算算方方法法:细细菌菌3030300300个个/皿皿;霉霉菌菌1010150150个个/皿皿l稀稀释释度度的的选选择择与与报报告告方方式式:一一个个稀稀释释度度使使用用两两个个平平板板,取取两两个个平平板板菌菌落落数数的的平平均均值值,乘乘以以稀稀释释倍倍数数报报告告之之。菌菌落落蔓蔓延延,报报告告为为多多不可计(细菌总数,则直接报告菌落蔓延)。不可计(细菌总数,则直接报告菌落蔓延)。霉菌直接镜检计数法l本方法适用于各种加工的水果和蔬菜制本方法适用于各种加工的水果和蔬菜制品,如番茄酱、果酱和果汁等。品,如番茄酱、果酱和果汁等。l霉菌可以作为一种指示菌,表明加工制霉菌可以作为一种指示
5、菌,表明加工制品的原料有霉菌所致的腐烂存在。品的原料有霉菌所致的腐烂存在。l此法系在一个标准计数玻片上计数含有此法系在一个标准计数玻片上计数含有霉菌菌丝的显微镜视野。霉菌菌丝的显微镜视野。玻片l郝氏计测玻片郝氏计测玻片或称霍华德(或称霍华德(Howard)霉菌计数器。)霉菌计数器。l是一特制的、具有标准计测室的玻片。是一特制的、具有标准计测室的玻片。系特制的系特制的玻璃载片,带有一个玻璃载片,带有一个20mm15mm的长方形平面,的长方形平面,即计测室,其周围有沟,两侧各有一条高出长方即计测室,其周围有沟,两侧各有一条高出长方形平面形平面0.1mm的肩堤,盖片放在肩堤上面,盖片的肩堤,盖片放在
6、肩堤上面,盖片和长方形平面之间相距和长方形平面之间相距0.1mm。中央长方形平面,。中央长方形平面,肩堤和盖片共同形成一个光学工作面。为了便于肩堤和盖片共同形成一个光学工作面。为了便于校正显微镜,计测玻片上刻有两条相距校正显微镜,计测玻片上刻有两条相距1.382mm的平行线,作为校正显微镜视野的标准线的平行线,作为校正显微镜视野的标准线 。显微镜l霉菌直接计数用的双筒显微镜霉菌直接计数用的双筒显微镜一定要有标准化视野,在一定要有标准化视野,在90125倍时视野直径为倍时视野直径为1.382mm。l同时在一个目镜中装配有一个同时在一个目镜中装配有一个特制的测微玻璃圆盘,其上刻特制的测微玻璃圆盘,
7、其上刻有每边长度相当于视野直径有每边长度相当于视野直径1/6的的36个小方格个小方格。霉菌直接镜检计数法l检样的制备:取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为1.34471.3460(即浓度为7.9%8.8%),备用。l显微镜标准视野的校正:将显微镜按放大率90125倍调节标准视野,使其直径为1.382mm。l涂片:洗净郝氏计测玻片,将制好的标准液,用玻璃棒均匀的摊布于计测室,以备观察。l观测:将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测,一般每一检样应观察50个视野,最好同一检样两人进行观察。霉菌菌丝的特征 l(1)平行壁:霉菌菌丝呈管状,多数情况下,整个)平行壁:霉菌菌丝呈管状,多数情况下,
8、整个菌丝体的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起菌丝体的直径是一致的。因此在显微镜下菌丝壁看起来像两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时来像两条平行的线。这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一。最有用的特征之一。l(2)横隔:许多霉菌的菌丝具有横隔,毛霉、根霉)横隔:许多霉菌的菌丝具有横隔,毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔。等少数霉菌的菌丝没有横隔。l(3)菌丝内呈粒状:薄壁、呈管状的菌丝含有原生)菌丝内呈粒状:薄壁、呈管状的菌丝含有原生质,在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。质,在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。l(4)分枝:如菌丝不太短,则多数呈分枝状,分枝
9、)分枝:如菌丝不太短,则多数呈分枝状,分枝与主干的直径几乎相同,有分枝是鉴定霉菌最可靠的与主干的直径几乎相同,有分枝是鉴定霉菌最可靠的特征之一。特征之一。l(5)菌丝的顶端:常呈钝圆形。)菌丝的顶端:常呈钝圆形。l(6)无折射现象。)无折射现象。l凡有以上特征之一的丝状体均可判定为霉菌菌丝。凡有以上特征之一的丝状体均可判定为霉菌菌丝。霉菌直接镜检计数法之计算l观察视野中有无菌丝,凡符合下列情况之一者为观察视野中有无菌丝,凡符合下列情况之一者为阳性视野阳性视野:l(1)一根菌丝长度超过视野直径)一根菌丝长度超过视野直径1/6;(2)一根菌丝长度加上分枝的长度超过视野直径)一根菌丝长度加上分枝的长
10、度超过视野直径1/6;(3)两根菌丝总长度超过视野直径)两根菌丝总长度超过视野直径1/6;(4)三根菌丝总长度超过视野直径)三根菌丝总长度超过视野直径1/6;(5)一丛菌丝可视为一个菌丝,所有菌丝(包括)一丛菌丝可视为一个菌丝,所有菌丝(包括分枝)总长度超过视野直径分枝)总长度超过视野直径1/6;l根据对所有视野的观察结果,计算阳性视野所占根据对所有视野的观察结果,计算阳性视野所占比例,并以阳性视野百分数(比例,并以阳性视野百分数(%)报告结果。)报告结果。检查视野数的确定l对一般样品,每个涂片均检查对一般样品,每个涂片均检查50个视野(每一个个视野(每一个样品至少应测样品至少应测25个视野,
11、才能代表样品的各个部个视野,才能代表样品的各个部分。分。l如果检查结果阳性视野低于如果检查结果阳性视野低于30,则检查,则检查25个视个视野即可;如果在野即可;如果在3040之间,须检查之间,须检查50个视野;个视野;如果在如果在4050之间,须检查之间,须检查100个视野;如果个视野;如果在在50以上或超过更多,则要继续检查,直至检以上或超过更多,则要继续检查,直至检查查25个视野的结果与一系列计算结果无差异为止)个视野的结果与一系列计算结果无差异为止)。l所检查的所检查的50个视野要均匀地分布在计测室上,可个视野要均匀地分布在计测室上,可用显微镜载物台上带有标尺的推进器来控制,从用显微镜载
12、物台上带有标尺的推进器来控制,从上到下,或从左到右一行行有规律地进行观察。上到下,或从左到右一行行有规律地进行观察。l无法判断视野中丝状物是否菌丝,可以放大观察无法判断视野中丝状物是否菌丝,可以放大观察倍数。倍数。各国番茄酱罐头霉菌直接镜检计数标准各国番茄酱罐头霉菌直接镜检计数标准 国别阳性视野%美国40加拿大50澳大利亚50法国标准级60,特级50 意大利标准级65,特级50英国50中国50常见产毒霉菌的鉴定l【GB 4789.162003】l本标准规定了食品中常见的产毒霉菌的鉴定方法。l本标准适用于曲霉属、青霉属、镰刀菌属及其他菌属的产毒菌种的鉴定。l鉴定步骤:菌落观察斜面观察制片镜检报告
13、 真菌的毒素(霉菌)l分类(按作用的组织):肝毒素、肾毒素、神经毒素、心脏毒素、造血器官毒素等。不同的菌有不同的毒素,同一种菌会产不同的毒素。l危害 急性中毒:一次吃大量毒素引起。发生于人较少,动物较多。慢性中毒:长期、少量摄入引起,类似维生素缺乏症,一般疗效差。l易被污染的食品:巴氏消毒的食品、粮食、调味品、发酵食品。霉菌毒素的作用l减少细胞分裂l抑制蛋白质合成和DNA复制l抑制DNA和组蛋白形成复合物l影响核酸合成l降低免疫应答霉菌产毒特点l霉菌产毒仅限于少数的产毒霉菌,而且产毒菌种中也是一部分菌株产毒;l产毒菌株的产毒能力表现出可变性和易变性;l一种菌株或菌种可以产生几种不同毒素,多种霉
14、菌可能产生同一毒素;l产毒菌株产毒需要一定条件。菌落的观察l为了培养完整的巨大菌落以供观察记录,可将纯培养物点植于平板上。l方法是:将平板倒转,向上接种一点或三点,每菌接种两个平板,倒置于2528温箱中进行培养。l当刚长出小菌落时,取出一个平皿,以无菌操作,用小刀将菌落连同培养基切下1cm2cm的小块,置菌落一侧,继续培养,于514d进行观察。此法代替小培养法,可直接观察子实体着生状态。斜面观察l将霉菌纯培养物划线接种(曲霉、青霉)或点种(链刀菌或其他菌)于斜面,培养514d;l观察菌落形态,同时还可以将菌种管置显微镜下用低倍镜直接观察孢子的形态和排列。制片l取载玻片加乳酸苯酚液一滴,用接种针
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