仪器分析高效液相色谱法精选课件.ppt

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1、关于仪器分析高效液相色谱法第一页，本课件共有42页2022/12/8第二页，本课件共有42页2022/12/8凝胶柱上加上中药提取物第三页，本课件共有42页2022/12/8洗洗脱脱的的效效果果第四页，本课件共有42页2022/12/8HPLC基本组成示意图HPLC主要由主要由主要由主要由色谱柱色谱柱、加压泵加压泵和和和和检测器检测器组组成成第五页，本课件共有42页2022/12/8色谱柱色谱柱是液相分离的核心部件第六页，本课件共有42页2022/12/8输液泵输液泵分单元等度泵和多元梯度泵输液泵分单元等度泵和多元梯度泵第七页，本课件共有42页2022/12/8检测器对没有紫外吸收的物对没有紫

2、外吸收的物质的检测，以蒸发光质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多散射检测器用得较多检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器检测器第八页，本课件共有42页2022/12/8进样器 手动进样器手动进样器Rheodyne 7725i几乎成了所有液几乎成了所有液相色谱仪的进样相色谱仪的进样器器第九页，本课件共有42页2022/12/8进样器 手动进样器手动进样器六通阀六通阀第十页，本课件共有42页2022/12/8进样器自动进样器可由软自动进样器可由软件完全控制件完全控制Waters 717 Waters 717 Agilent Agilent 第十一页，本课件共有4

3、2页2022/12/8色谱工作站色谱工作站色谱工作站就是就是HPLC的控制系统的控制系统外企的在数万外企的在数万外企的在数万外企的在数万元左右，国产元左右，国产元左右，国产元左右，国产的几千元。的几千元。的几千元。的几千元。第十二页，本课件共有42页2022/12/8色谱工作站工作站的两工作站的两大功能大功能1.控制仪器控制仪器2.处理数据处理数据第十三页，本课件共有42页2022/12/8液相色谱仪器常见种类液相色谱仪器常见种类 high performance liquid chromatograph第十四页，本课件共有42页2022/12/8液相色谱仪（液相色谱仪（2）第十五页，本课件共

4、有42页2022/12/8液相色谱仪（液相色谱仪（3）安捷伦安捷伦安捷伦安捷伦Agilent Agilent 1100 1100 第十六页，本课件共有42页2022/12/8液相色谱仪（液相色谱仪（4）第十七页，本课件共有42页2022/12/8液相色谱仪（液相色谱仪（5）上海伍丰科学仪上海伍丰科学仪器有限公司器有限公司第十八页，本课件共有42页2022/12/8液相色谱仪（液相色谱仪（6）戴安公司戴安公司戴安公司戴安公司Ultimate Ultimate 30003000第十九页，本课件共有42页2022/12/8高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速特点：高压、高

5、效、高速 现代药物分析最有用的工具和方法现代药物分析最有用的工具和方法第二十页，本课件共有42页2022/12/8高效液相色谱法在药典中的使用19851985年年版版19901990年年版版19951995年年版版20002000年年版版20052005年年版版数量数量8 8565612112127927913271327比例比例%0.50.53.23.25.15.110.410.441.341.3第二十一页，本课件共有42页2022/12/8高效液相图谱各成分依各成分依次流出色次流出色谱柱，从谱柱，从进样到出进样到出峰的时间峰的时间称为保留称为保留时间时间第二十二页，本课件共有42页2022

6、/12/8定性方法定性定性:确定确定成分归属，成分归属，依据与对照依据与对照品相比较时，品相比较时，相同的保留相同的保留时间时间第二十三页，本课件共有42页2022/12/8定量方法外标法内标法归一法第二十四页，本课件共有42页2022/12/8定量方法外标法第二十五页，本课件共有42页内标法对照溶液：对照溶液：精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。供试品溶液：供试品溶液：再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图。第二十六页，本课件共有42页2022/12/8定量方法定量方法内标法内标法对照品对照品供试品供试品内标物内标

7、物内标物内标物第二十七页，本课件共有42页2022/12/8定量方法归一法第二十八页，本课件共有42页29（1）吸附色谱法（2）正相色谱法（3）反相色谱法 一般反相色谱法 反相离子对色谱 反相离子抑制色谱主要分离方法第二十九页，本课件共有42页流动相的选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。常常用溶剂的极性顺序用溶剂的极性顺序：水(最大)甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)第三十页，本课件共有42页31流动相的制备供试品和对照品溶液配制（各两份）系统适用性试验操作前的准

8、备第三十一页，本课件共有42页32理论塔板数（理论塔板数（n n）：分离度（分离度（R R）：）：系统适用性实验：重复性重复性 对照溶液连续进样5次 相对标准偏差应不大于2.0%第三十二页，本课件共有42页33拖尾因子（拖尾因子（T T）：）：w0.05h为0.05峰高处的峰宽；为峰极大至峰前沿之间的距离。除另有规定外，T应在0.951.05之间第三十三页，本课件共有42页实例：高效液相色谱外标法测定头孢拉定含量 取含头孢拉定为94.1%和头孢氨苄为2.3%的对照品35.35mg溶解定容为50ml，取10l注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为13842558，头孢氨苄峰面积为354934；

9、另称取头孢拉定供试品35.88mg，溶解定容为50ml，取10l注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积为14158286，头孢氨苄峰面积为472368；按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量。第三十四页，本课件共有42页第三十五页，本课件共有42页第三十六页，本课件共有42页内标液内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液溶液对照液对照液 精密称取精密称取VitE对照品对照品0.2011g置棕色具塞锥置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，密塞，振摇使溶解，取取 13ul注入注入GC仪，测

10、定，计算仪，测定，计算供试液供试液 精密称取供试品精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，密塞，振摇使溶解，取取13ul 注入注入GC仪，测定，计算仪，测定，计算维生素维生素E含量测定含量测定对照液对照液供试液供试液第三十七页，本课件共有42页第三十八页，本课件共有42页按按中国药典中国药典20152015版（二部）的规定测定维生素版（二部）的规定测定维生素E E，做系，做系统适用性实验时的数据如上表。统适用性实验时的数据如上表。取维生素取维生素E E对照品对照品20.80mg(98.0%)20.80mg(98

11、.0%)，精密加入浓度为，精密加入浓度为1.044mg/ml1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml10.00ml溶解，取溶解，取1l 1l 注入气相色谱仪，对照品峰面积为注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736481736，内标物峰面积为，内标物峰面积为238787238787，求维生素，求维生素E E的理论塔板数、维生素的理论塔板数、维生素E E与内标物的分离与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E E供试品供试品22.68mg22.68mg，内标物内标物28.00mg28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887529887，内标物峰面积为，内标物峰面积为644911644911，计算供试品中维生素，计算供试品中维生素E E的含量。的含量。物质Rt/minW(1/2h)/minW/min对照品8.880.250.6内标物5.740.61.2实例 第三十九页，本课件共有42页2022/12/8第四十页，本课件共有42页第四十一页，本课件共有42页2022/12/8感谢大家观看第四十二页，本课件共有42页