2023年【hplc是检测什么的】HPLC测定覆盆子中金丝桃苷的含量.docx

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1、2023年【hplc是检测什么的】HPLC测定覆盆子中金丝桃苷的含量【摘要】 目的 建立覆盆子中金丝桃苷的含量测定方法。方法 采用HPLC法。SinoChrom ODS BP色谱柱（5µm，4.6×250mm），流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85），检测波长：360nm。结果 金丝桃苷浓度线性范围0.005060.1012mg/ mL，r =0.99994；样品平均回收率为98.77%，RSD=1.57%（n=6）。结论 该方法简便、准确、重现性好，可用于该中药的含量测定。【关键词】覆盆子 金丝桃苷 HPLC 药学【Abstract】 Objective To

2、establish a method to determine Hyperin in Rubi Fructus.Methods A HPLC method was used. Chromatographic assay was performed on a SinoChrom ODS BP(5µm，4.6×250mm）column.The mobile phrase consisted of acetonitile-0.1% phosphoric（15:85）,the detection wavelength was set at 360nm.Results The l

3、inear range of Hyperin was from 0.00506 to 0.1012mg/ mL and correlation coefficient was 0.99994.The average recovery of Hyperin was 98.77% and RSD was 1.57 %（n=6）.Conclusion The method is simple ,accurate and reproducible for the determination of Hyperin in Rubi Fructus.【Key words】 Rubi Fructus Hype

4、rin HPLC覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实，有益肾固精缩尿、养肝明目的功效，用于治疗遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花。覆盆子果实中含有三萜类成分，覆盆子酸，鞣花酸，椴树苷，胡萝卜苷1，另有文献报道，尚含黄酮化合物2,3。由于覆盆子基础研究薄弱，2023年版中国药典（一部）中仅有性状鉴别和显微鉴别4。目前已有椴树苷的HPLC含测方法报道5，但尚无覆盆子中的金丝桃苷定量测定的文献。本实验采用HPLC法对其进行了含量测定，结果表明，该方法快速简捷、重现性好，取得了满意的结果。1 实验部分1.1 仪器与试药HP-Agilent1100型高效液相色谱仪，

5、包括G1322A真空脱气机，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1365A多波长检测器，LGC-1025M柱温箱，HP Rev.A.07.01色谱工作站；BP211D型1/10万电子分析天平（德国Sartorius公司）；250超声波清洗器（上海）。金丝桃苷对照品（供含测用，中国药品生物制品检定所提供，批号：111521-202303）。乙腈（色谱纯，美国Tedia公司），水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。覆盆子Rubi Fructus，经鉴定为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实。1.2 方法与结果1.2.1 色谱条件与系统适用性考察6色谱柱：SinoChr

6、om ODS BP（5µm，4.6×250mm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15:85）；流速：1mL/min；检测波长：360nm；柱温：30；进样量：10µL；理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000。1-金丝桃苷 1-Hyperin图1 对照品（A）和样品（B）的色谱图Fig.1 Chromatograms of reference substance（A）and sample（B）1.2.2 对照品溶液的制备精密称取金丝桃苷对照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取2mL，置10m

7、L量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。1.2.3 供试品溶液的制备6取本品粉末（过四号筛）1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250w，频率40kHz）1小时，放冷，再称定重量，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.2.4 线性关系考察精密吸取1.2.2 项制备的对照品贮备液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液10µL，按1.2.1项色谱条件测定，以进样浓度为横坐标（X：mg/mL），峰面积积分值为纵坐标（Y ：mAU*s），进行线性回归

8、，得回归方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。结果表明，金丝桃苷在0.005060.1012mg/mL的范围内呈良好线性关系。1.2.5 精密度试验精密吸取1.2.2项下制备的对照品溶液10µL，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。1.2.6 稳定性试验取供试品溶液于制备后0、2、4、6、8、10h进样，金丝桃苷峰面积的RSD=0.59%，表明供试品溶液在10h内稳定。1.2.7 重复性试验称取同一批样品6份，按1.2.3项下方法处理并测定含量，结果金丝桃苷RSD=1.17%，表明此方法重复性较好。1.2.8

9、回收率试验称取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的对照品，按1.2.3项下方法处理并测定含量，分别计算样品加样回收率（结果见表1），平均回收率为98.77%，RSD=1.57%。表1 金丝桃苷回收率试验结果2 讨论与总结2.1 流动相的选择本实验通过对乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多种不同比例的流动相进行比较试验，结果乙腈-0.1%磷酸溶液比例为15:85的系统分离效果较好，且峰形较好，故选择本系统为流动相。2.2 含量测定的讨论本实验中1.2.9样品的含量测定中第二批的含量和其它两批含量差异较显著，分析原因可能与覆盆子来源不同有关系，因此，仍需做大量实验来验证。2.3 含量与功效的关系本实验确定了覆盆子中的黄酮类化合物为金丝桃苷，但是金丝桃苷含量的高低与覆盆子的功效之间的联系仍不明确，还有待进一步研究。参考文献1 常新全，丁丽霞中药活性成分分析手册M北京：学苑出版社，2023,18772 苗菊茹，谢一辉，刘红宁覆盆子的研究进展J江西中医药，2023,1,13 刘劲松，王刚，王国凯覆盆子化学成分研究J中国中医药科技，2023,5, 15( 3): 197-1994 中国药典S一部，2023,3595 虞金宝，吕武清，彭宏俊等覆盆子中椴树苷的含量测定研究J药物研究，2023,17(23):8-9