指导学生研究性学习课题研究的实例.ppt
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1、指导学生研究性学习课题研究的实例指导学生研究性学习课题研究的实例实例一实例一实验法为主的课题研究实验法为主的课题研究小鼠疼痛感觉的日节律小鼠疼痛感觉的日节律波动规律及其影响因素波动规律及其影响因素课题研究过程框架图学生感兴趣的问题学生感兴趣的问题疼痛的日节律疼痛的日节律转变转变 (选题论证报告选题论证报告)有研究价值的课题有研究价值的课题小鼠疼痛感觉的日节律波动规律及其小鼠疼痛感觉的日节律波动规律及其影响因素影响因素制定制定研究方案研究方案 实施并补充实施并补充研究方案研究方案分析分析数据、数据、得出得出结论、结论、写成写成论文论文课题小结课题小结 (一)、选题说明:(一)、选题说明:小鼠疼痛
2、感觉的日节律波动规律及小鼠疼痛感觉的日节律波动规律及其影响因素其影响因素课题的生成过程:课题的生成过程:1.学学生生康康博博别别扭扭的的书书写写方方式式引引起起我我对对他他手手腕腕的的关关注注,他他告告诉诉我我他他小小时时候候曾曾经经遭遭受受到到严严重重的的意意外外伤伤害害的的经经历历,过过去去惨惨烈烈的的疼疼痛痛感感觉觉多多年年以以后后他他仍仍记忆犹新。记忆犹新。2.在在师师生生对对话话中中他他意意识识到到一一天天中中疼疼痛痛感觉的强度似乎有规律。感觉的强度似乎有规律。v兴趣所致,他查阅了一些文献资料,了解到兴趣所致,他查阅了一些文献资料,了解到疼痛的确与日节律有关。疼痛的确与日节律有关。疼
3、痛是一种机制非常复杂的神经活动,也是疼痛是一种机制非常复杂的神经活动,也是一组复杂的生理、病理和心理改变的临床表现一组复杂的生理、病理和心理改变的临床表现在中国,每年因疼痛就诊的病人占到门诊就在中国,每年因疼痛就诊的病人占到门诊就诊总量的诊总量的20%-45%(2005)v充分利用中关村地区的社会资源,经多方联充分利用中关村地区的社会资源,经多方联系、预约后,与康博一起请教了国内在节律系、预约后,与康博一起请教了国内在节律研究领域的专家,解决了实验材料和用具等研究领域的专家,解决了实验材料和用具等问题。问题。v指导康博用指导康博用“滚雪球法滚雪球法”查文献,写出查文献,写出“选选题论证报告题论
4、证报告”,确定了此研究课题。,确定了此研究课题。“选题论证报告选题论证报告”格式格式v姓名姓名v课题名称:课题名称:v研究目的:研究目的:v研究意义:研究意义:v研究的主要内容:研究的主要内容:v他人研究的现状:他人研究的现状:v预期成果:预期成果:v完成课题的条件及分析:完成课题的条件及分析:选题论证报告选题论证报告1、课题名称、课题名称:小鼠疼痛感觉的日节:小鼠疼痛感觉的日节律波动规律及其影响因素律波动规律及其影响因素2、研究目的、研究目的:通过:通过机械痛阈机械痛阈与与热痛热痛阈阈的测量,了解小鼠疼痛感觉随昼的测量,了解小鼠疼痛感觉随昼夜时间波动的规律及其影响因素。夜时间波动的规律及其影
5、响因素。3、研究意义:、研究意义:了解动物感觉活动的一般规律以及疼痛了解动物感觉活动的一般规律以及疼痛现象的一般生理特征。现象的一般生理特征。根据疼痛感觉的日变化节律和影响因素根据疼痛感觉的日变化节律和影响因素,提出救治提出救治“痛症痛症”的科学依据。的科学依据。亲身参与科研实践,体验动物实验的乐亲身参与科研实践,体验动物实验的乐趣;在实践过程中学会科学研究的基本方法,趣;在实践过程中学会科学研究的基本方法,提高科学素养。提高科学素养。4、研究的主要内容:、研究的主要内容:(1).测定日夜节律变化条件下小鼠的热刺激和机械刺激痛阈值。(2).测定全黑暗条件下小鼠的热刺激和机械刺激痛阈值。在最初设
6、计研究内容时,学生仅仅考虑疼痛和光在最初设计研究内容时,学生仅仅考虑疼痛和光照条件之间的关系,所以实验照条件之间的关系,所以实验只设计了在日夜节只设计了在日夜节律变化条件(律变化条件(12小时光照小时光照/12小时黑暗)下进行小时黑暗)下进行机械痛阈值和热痛阈值的测定。机械痛阈值和热痛阈值的测定。老师马上让他大老师马上让他大量阅读有关生物节律方面的文献资料,使他知道量阅读有关生物节律方面的文献资料,使他知道生物都有生物都有内在的内在的节律调控因子以及节律调控因子以及外源性外源性的矫正的矫正因子(如光照)之分,所以,在疼痛的节律研究因子(如光照)之分,所以,在疼痛的节律研究上必须考虑到疼痛接受的
7、究竟是诸如光照条件等上必须考虑到疼痛接受的究竟是诸如光照条件等外源因子的影响,还是接受内源性节律调控因子外源因子的影响,还是接受内源性节律调控因子的调控。最后,他的调控。最后,他增加设计了全黑暗实验条件下增加设计了全黑暗实验条件下机械痛阈值和热痛阈值的测定。这样的机械痛阈值和热痛阈值的测定。这样的对比实验对比实验就可以充分反映出在小鼠的疼痛行为上,外源因就可以充分反映出在小鼠的疼痛行为上,外源因子光照条件和内源性节律调控因子所起到的子光照条件和内源性节律调控因子所起到的不同不同作用。作用。5、他人研究的现状:、他人研究的现状:关于人类不同疾病疼痛发作的关于人类不同疾病疼痛发作的24小时节小时节
8、律波动等已有研究资料。由于患者是唯一能律波动等已有研究资料。由于患者是唯一能描述疼痛程度的人,在临床上又没有可以测描述疼痛程度的人,在临床上又没有可以测度的指标。因此,找到一个理想的研究模型度的指标。因此,找到一个理想的研究模型是非常困难的。小鼠模型可以为我们提供研是非常困难的。小鼠模型可以为我们提供研究的方便,它们对疼痛的感觉可以从行为上究的方便,它们对疼痛的感觉可以从行为上反映出来。但是,反映出来。但是,基于小鼠疼痛行为的日节基于小鼠疼痛行为的日节律变化和影响因素,未见报道律变化和影响因素,未见报道。6、预期成果、预期成果:不同疼痛类型在24小时的波动变化;通过实验数据分析,得出不同类型疼
9、痛在24小时昼夜节律中的最大波动范围,为药物镇痛治疗和临床护理提供试验依据。7、完成课题的条件及分析:、完成课题的条件及分析:根据掌握的资料,在黑暗情况下测定小鼠痛阈值需要夜视仪夜视仪,因购买费用昂贵,所以由校方与行为遗传学中心协商,学生可以借用。实验流程如下:实验流程如下:(1)、机械痛阈值的测定:固定小鼠给予刺激开始记录出现甩尾动作时,取消刺激本笔记录阈值(产生痛反应所需的时间)(2)、热痛阈值的测定:提起小鼠放进热板仪踩下踏板,开始记录出现舔后足动作时,再次踩下踏板,并且取消刺激本笔记录阈值(产生痛反应所需的时间)(二)、制定研究方案(二)、制定研究方案开题之前还要查阅文献,写开题之前还
10、要查阅文献,写出出“研究方案研究方案”,以保证研究过,以保证研究过程能有条不紊地进行下去。程能有条不紊地进行下去。(开题报告就是(开题报告就是“选题论证报选题论证报告告”+“研究方案研究方案”)研研 究究 方方 案案姓名姓名课题名称课题名称:问题的提出和设想问题的提出和设想:研究对象的说明研究对象的说明:研究的具体方法研究的具体方法:研究的过程研究的过程(步骤和时间安排步骤和时间安排):研究条件的准备研究条件的准备:人员分工(集体项目)人员分工(集体项目):必要的制度(集体项目)必要的制度(集体项目):制定研究方案过程中教师的指导制定研究方案过程中教师的指导v文献的使用文献的使用版权意识的培养
11、版权意识的培养在每篇阅读过的文献后面注明可参考其在每篇阅读过的文献后面注明可参考其中哪方面的内容(研究方法、研究成果、相中哪方面的内容(研究方法、研究成果、相关知识、研究思路等)用于自己的研究,如关知识、研究思路等)用于自己的研究,如参考热痛的测定方法、参考疼痛日节律以及参考热痛的测定方法、参考疼痛日节律以及药物止痛综述、参考光周期的设定方法、参药物止痛综述、参考光周期的设定方法、参考疼痛的研究进展等等。考疼痛的研究进展等等。用了哪篇文献中的内容,在论文最后的用了哪篇文献中的内容,在论文最后的“参考文献参考文献”中须列出来。中须列出来。(三)实施研究方案(三)实施研究方案1、调节调节“小鼠人工
12、作息小鼠人工作息时间时间”小鼠节律行为模型建立小鼠节律行为模型建立v通过小时光照与小时黑暗的通过小时光照与小时黑暗的调节,使所有实验小鼠的作息时间完调节,使所有实验小鼠的作息时间完全一致。全一致。v小鼠作息规律的监测采用转轮箱进行小鼠作息规律的监测采用转轮箱进行记录。特别是小鼠的活动性可用小鼠记录。特别是小鼠的活动性可用小鼠一定时间内在转轮上转动转轮的次数一定时间内在转轮上转动转轮的次数加以记录。加以记录。小鼠转轮实验装置图v通过人工光线诱导小鼠产通过人工光线诱导小鼠产生整齐的活动生整齐的活动-睡眠日节睡眠日节律。律。v小鼠经人工光照和黑暗诱小鼠经人工光照和黑暗诱导后,活动期时间为导后,活动期
13、时间为ZT12ZT12(1818:0000)至)至ZT0ZT0(6 6:00)00),睡眠静息期时间,睡眠静息期时间为为ZT0ZT0(6 6:0000)至)至ZT12ZT12(1818:0000)。小鼠日节律表现小鼠日节律表现正常光照周期条件下小鼠的日节律表现正常光照周期条件下小鼠的日节律表现研究结果研究结果v转轮实验结果显示,小鼠的活动特点是在转轮实验结果显示,小鼠的活动特点是在黑暗条件下,活动性加强,表现为转笼次黑暗条件下,活动性加强,表现为转笼次数增加。光照条件下,活动性减弱,转笼数增加。光照条件下,活动性减弱,转笼次数明显减少。次数明显减少。这与小鼠这一类夜行这与小鼠这一类夜行性动物的
14、昼夜活动规律性动物的昼夜活动规律完全相符。完全相符。全黑暗条件下小鼠的日节律表现全黑暗条件下小鼠的日节律表现v采用持续全黑环境驯养小采用持续全黑环境驯养小鼠鼠9 9天,根据转轮实验数天,根据转轮实验数据(如图所示)得到小鼠据(如图所示)得到小鼠光照剥夺条件下活动光照剥夺条件下活动-睡睡眠节律图。眠节律图。v小鼠每日活动起始时间出小鼠每日活动起始时间出现稳定漂移。现稳定漂移。v经本次实验处理的大多数经本次实验处理的大多数小鼠的昼夜节律集中在小鼠的昼夜节律集中在2323小时小时4040分钟左右。分钟左右。研究结果研究结果v2、测定机械痛阈值、测定机械痛阈值和热痛阈值和热痛阈值热板实验热板实验-热刺
15、激热刺激vYLSYLS6B6B智能热板仪智能热板仪v温度设定:温度设定:552552v采样时间点采样时间点 v热痛阈的指标的设定热痛阈的指标的设定热热板板实实验验夹尾实验夹尾实验-机械刺激机械刺激v采用采用HaffnerHaffners s夹夹尾实验尾实验v尾夹咬合力为尾夹咬合力为400g 400g v机械痛阈的指标的机械痛阈的指标的设定设定v调节好调节好“小鼠人工作息时间小鼠人工作息时间”后,连续两天,每天按六个后,连续两天,每天按六个时间点做机械痛阈值和热痛阈时间点做机械痛阈值和热痛阈值的测定。为保证时间点的准值的测定。为保证时间点的准确性,老师陪同学生熬了确性,老师陪同学生熬了48小小时
16、(开始他是兴奋得睡不着,时(开始他是兴奋得睡不着,后来是叫不醒)。后来是叫不醒)。v最初实验的失败最初实验的失败:小鼠是一种十分敏感的小型哺乳动物,小鼠是一种十分敏感的小型哺乳动物,它们很容易受到周围环境的干扰,并且在处它们很容易受到周围环境的干扰,并且在处于新环境的条件下,总会有一段时间处于活于新环境的条件下,总会有一段时间处于活跃状态。经过一段时间的适应后,小鼠才会跃状态。经过一段时间的适应后,小鼠才会平静下来,此时进行实验得到的数据才是稳平静下来,此时进行实验得到的数据才是稳定可靠的。定可靠的。由于开始实验的时候,师生没有严格控由于开始实验的时候,师生没有严格控制小鼠的实验前适应,所以取
17、得的数据很不制小鼠的实验前适应,所以取得的数据很不稳定。直到分析数据时,我们才认识到这一稳定。直到分析数据时,我们才认识到这一点。点。后来,又用了二个月时间重新补做了所有后来,又用了二个月时间重新补做了所有的实验!的实验!前面两种疼痛刺激均可认为是前面两种疼痛刺激均可认为是瞬时瞬时疼痛疼痛刺激刺激在实施原研究方案期间,又发现在实施原研究方案期间,又发现了一篇文献上介绍的了一篇文献上介绍的“小鼠隐神经小鼠隐神经慢性压迫手术模型慢性压迫手术模型”,可以用在本,可以用在本研究中观察研究中观察慢性疼痛慢性疼痛对小鼠正常节对小鼠正常节律的影响。律的影响。科学研究是无止境的!科学研究是无止境的!3、隐神经
18、慢性压迫手术模型、隐神经慢性压迫手术模型 目的:探目的:探索慢性疼索慢性疼痛对动物痛对动物节律行为节律行为干扰的规干扰的规律律手术结扎部位寻找隐神经结扎隐神经设计实验时,学生只将小鼠分为手术组设计实验时,学生只将小鼠分为手术组和正常组,老师提示他还应该加一组假手术和正常组,老师提示他还应该加一组假手术组(切开皮肤后,不结扎隐神经,直接缝合组(切开皮肤后,不结扎隐神经,直接缝合好),以好),以排除手术对实验结果的干扰排除手术对实验结果的干扰。原本我们加入该实验内容是希望获得更原本我们加入该实验内容是希望获得更“多种疼痛有日节律的实证多种疼痛有日节律的实证”,事实上这个,事实上这个研究内容获得的结
19、论,后经中科院文献情报研究内容获得的结论,后经中科院文献情报中心查新,是中心查新,是创新结论创新结论未见报道未见报道!在隐神经结扎手术的操作在隐神经结扎手术的操作过程中,由于过程中,由于学生从没有做过动物解剖实验,开始一直学生从没有做过动物解剖实验,开始一直不不能很好地剥离隐神经和周围的血管能很好地剥离隐神经和周围的血管,使得手,使得手术失败,实验几乎停滞不前。术失败,实验几乎停滞不前。老师给他讲解大量的神经解剖学知识,老师给他讲解大量的神经解剖学知识,以及文献中提到的隐神经的知识;让他反复以及文献中提到的隐神经的知识;让他反复看小鼠解剖图谱看小鼠解剖图谱,学习神经的定位和走行以,学习神经的定
20、位和走行以及与其它神经之间的关系方面的及与其它神经之间的关系方面的知识知识。让他让他继续解剖继续解剖了一些小鼠,充分暴露隐了一些小鼠,充分暴露隐神经以及左右侧腰丛神经进行观察,取得了神经以及左右侧腰丛神经进行观察,取得了一手的认识。经过一手的认识。经过不断练习不断练习,终于很好地,终于很好地解解决了手术操作的问题决了手术操作的问题。4、吗啡镇痛作用测定、吗啡镇痛作用测定-镇痛条件下的日节律规律镇痛条件下的日节律规律v按照时间点对小鼠分组,每组个体数量按照时间点对小鼠分组,每组个体数量5-9只。采只。采用热板实验进行。温度设定:用热板实验进行。温度设定:552。v按照采样时间点,每组小鼠腹腔给药
21、(吗啡使用按照采样时间点,每组小鼠腹腔给药(吗啡使用剂量:剂量:10mg/kg体重),给药后体重),给药后15、30、60分分钟分别测定小鼠钟分别测定小鼠24小时内,小时内,12小时光照和全黑暗小时光照和全黑暗条件下的疼痛阈值。条件下的疼痛阈值。5、分析数据、得出结论、分析数据、得出结论v指导学生把实验获得的指导学生把实验获得的数据数据描点作图描点作图、分析结、分析结果,讨论后,得出结论。果,讨论后,得出结论。全黑暗条件:全黑暗条件:峰值时间点为Ct4与Ct20 正常光照周期:正常光照周期:峰值时间点为Zt0与Zt12热痛阈节律热痛阈节律图3:正常光照周期与全黑暗条件下小鼠热痛阈的节律变化比较
22、。A 为全黑暗条件下热痛阈日节律表现;B 为12小时光照/12小时黑暗条件下热痛阈日节律表现热痛阈(秒)T0T4T8T12T16T20T24正常光照周期与全黑暗条件下正常光照周期与全黑暗条件下小鼠热痛阈的节律变化出现了小鼠热痛阈的节律变化出现了比较明显的差异。比较明显的差异。全黑暗条件下小鼠在各个时间全黑暗条件下小鼠在各个时间点上的热痛阈都明显高于正常点上的热痛阈都明显高于正常光照周期条件下小鼠热痛阈光照周期条件下小鼠热痛阈 。全黑暗条件下热痛阈节律周期全黑暗条件下热痛阈节律周期的波动相位比起正常光照周期的波动相位比起正常光照周期条件下的相位整体后移。条件下的相位整体后移。2424小时采样点小
23、时采样点研究结果研究结果非活动期活动期AB正常光照周期下:正常光照周期下:峰值时间点为Zt4与Zt8全黑暗条件下:全黑暗条件下:峰值时间点为Ct0与Ct4机械痛阈节律机械痛阈节律机械痛阈(秒)24小时采样点abT0T4T8T12T16T20T24图4:正常光照周期与全黑暗条件下小鼠机械痛阈的节律变化比较。b为12小时光照/12小时黑暗条件下机械痛阈日节律表现;a为光照剥夺条件下机械痛阈日节律表现。正常光照周期与全黑暗条正常光照周期与全黑暗条件下小鼠机械痛阈的节律件下小鼠机械痛阈的节律变化出现了比较明显的差变化出现了比较明显的差异。异。在全黑暗条件下,小鼠机在全黑暗条件下,小鼠机械痛阈的节律变化
24、相位与械痛阈的节律变化相位与正常光照周期正好相反。正常光照周期正好相反。研究结果研究结果非活动期活动期组别组别手术组手术组假手术组假手术组正常组正常组平均值4.44.49.29.210.510.5标准差6.19.79.7 手术组、假手术组和正常组小鼠日活动量比较手术组、假手术组和正常组小鼠日活动量比较 从表中可以看出,手术组的活动从表中可以看出,手术组的活动量仅仅是假手术组和正常组的一量仅仅是假手术组和正常组的一半,说明慢性痛可以明显影响小半,说明慢性痛可以明显影响小鼠的正常活动。鼠的正常活动。研究结果研究结果慢性周围神经性疼痛模型慢性周围神经性疼痛模型正常光照条件下吗啡镇痛效果日节律波动特点
25、正常光照条件下吗啡镇痛效果日节律波动特点图7:12小时光照/12小时黑暗条件下吗啡镇痛效果的日节律变化与基础热痛阈的比较。A为基础热痛阈日节律表现;B为吗啡镇痛日节律表现。在正常光照条件在正常光照条件下,不论是活动下,不论是活动期还是在非活动期还是在非活动期吗啡的镇痛效期吗啡的镇痛效果均明显,特别果均明显,特别是在非活动期,是在非活动期,效果更为明显,效果更为明显,但日节律变化仍但日节律变化仍然存在。然存在。非活动期活动期研究结果研究结果全黑暗条件下吗啡镇痛效果的日节律波动特点全黑暗条件下吗啡镇痛效果的日节律波动特点图8:全黑暗条件下吗啡镇痛效果的日节律变化与基础热痛阈比较。A为基础热痛阈日节
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