植物细胞工程基础实验技术.ppt

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1、总体要求 遵守遵守实验室实验室各种各种规则规则按要求使用对应的按要求使用对应的实验台实验台，不可随意调换，不可随意调换珍惜学习时间，认真完成珍惜学习时间，认真完成实验实验和和实验报告实验报告维护好实验室维护好实验室清洁清洁和和秩序秩序要求和注意事项要求和注意事项期终成绩平时考勤每次的实验成绩；期终成绩平时考勤每次的实验成绩；每次的实验成绩实验完成的实际情况实验报告。每次的实验成绩实验完成的实际情况实验报告。课程成绩课程成绩一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验材料和方法三、实验材料和方法四、实验结果四、实验结果五、讨论五、讨论实验报告格式实验报告格式1 1、不会写实验原理（乱

2、抄乱、不会写实验原理（乱抄乱写断章取义）。写断章取义）。2 2、实验现象、结果的叙述不、实验现象、结果的叙述不清楚、不准确。清楚、不准确。3 3、讨论没有主体，缺乏逻辑、讨论没有主体，缺乏逻辑性性，句子不完整。，句子不完整。4 4、作业没有按要求填写。、作业没有按要求填写。实验一植物细胞工程基础实验技术一实验目的1、了解植物组织细胞培养条件与设施2、掌握MS养基的配制方法3、熟悉无菌操作的步骤为下次试验作准备二实验原理MS培养基：1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高应用广泛培养基的主要成分：水无机成分：无机大量元素 氮：铵态氮、硝态氮混合

3、 磷：磷酸盐 钾：钾盐 钙、硫、镁无机微量元素 主要有：铁、硼、锰、锌、铜、钼、钴、氯有机成分：糖、维生素、肌醇、氨基酸及有机附加物。植物生长调节物质：生长素类：NAA、IAA、IBA、2,4-D 细胞分裂素类：BAP,KT，TDz，ZT 其他类：GA3,ABA琼脂pH值大量元素(母液)mgLNHNH4 4NONO333300033000KNOKNO333800038000CaClCaCl2 22H2H2 2O8800O8800MgSOMgSO4 47H7H2 2O7400O7400KHKH2 2POPO4434003400母液母液母液母液为为为为2020倍浓缩液倍浓缩液倍浓缩液倍浓缩液此处配

4、制此处配制此处配制此处配制300ml300ml母液母液微量元素(母液)mgLKI166H3BO31240MnSO44H2O4460ZnSO47H2O1720Na2MoO42H2O50CuSO45H2O5CoCl26H2O5母液母液为为200倍浓缩液倍浓缩液此处配制此处配制100ml母液铁盐(母液)mgLFeSOFeSO4 47H7H2 2O5560O5560NaNa2 2-EDTA2H-EDTA2H2 2O7460O7460母液母液母液母液为为为为200200倍浓缩液倍浓缩液倍浓缩液倍浓缩液 保存在保存在保存在保存在棕色玻璃瓶棕色玻璃瓶棕色玻璃瓶棕色玻璃瓶中中中中 此处配制此处配制此处配制此处

5、配制100ml100ml母液母液有机成分(母液)mgLA肌醇20000B烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6)100盐酸硫胺素(维生素B1)100甘氨酸400母液母液200倍浓缩液倍浓缩液 此处配制此处配制100ml母液植物激素配制MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质 0.1 mg/ml的的2,4-D溶液溶液：取25mg的2,4-D，加入少量95%的酒精和1N的NaOH溶解，再加蒸馏水定容至250ml萘乙酸(NAA):可用适量酒精溶解.三实验用品1.MS培养基粉剂、琼脂、蔗糖、乙醇、氢氧化钠、盐酸、2,4-D、萘乙酸(

6、NAA)。2.材料：本实验以胡萝卜贮藏根3.培养容器的准备：三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、封口膜、橡皮筋4.电炉、pH试纸（或酸度计）湿热灭菌器三三 配制培养液配制培养液1 1、母液、母液为为50mL50mL，母液，母液、A A和和B B各各5mL5mL。再取植物。再取植物激素母液一定量，与各种母液一起放入烧杯中。激素母液一定量，与各种母液一起放入烧杯中。三种培养基三种培养基:MS+2.0mg/L:MS+2.0mg/L2,4-D(2,4-D(根根)()(第第1212组各组各3030瓶瓶)MS+0.5mg/LMS+0.5mg/LNAA(NAA(茎茎)()(第第3434组各组各3030瓶瓶)2 2、

7、称取琼脂、称取琼脂9g9g、蒸糖、蒸糖30g30g，放入烧杯中，再加入蒸馏水，放入烧杯中，再加入蒸馏水750mL750mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状 3 3、再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水、再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至定容至1000mL1000mL，搅拌均匀，搅拌均匀 4 4、调调调调pHpH 用滴管吸取物质的量浓度为用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L1mol/L的的NaOHNaOH或或HClHCl溶液，溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的

8、逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pHpH试纸试纸(5.4(5.47.0)7.0)测培养基的测培养基的pHpH，一直到培养基的，一直到培养基的pHpH为为5.85.8为止为止 5 5、将烧杯中的培养基、将烧杯中的培养基趁热趁热倒入锥形瓶倒入锥形瓶(50mL(50mL或或100mL)100mL)中。培中。培养基的量约为锥形瓶容量的养基的量约为锥形瓶容量的1/51/51/41/4。66、封口膜封口、封口膜封口,记号笔记录记号笔记录注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。四四 思考及讨论思考及讨论1 1，植物组织培养的理论基础是什么？，植物组织培养的理论基础是什么？，植物组织培养的理论基础是什么？，植物组织培养的理论基础是什么？2 2，培养基的成份主要有哪几类？，培养基的成份主要有哪几类？，培养基的成份主要有哪几类？，培养基的成份主要有哪几类？本次需灭菌的物品1培养基2解剖工具3滤纸