电泳和色谱分离技术(应用)精选课件.ppt

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1、关于电泳和色谱分离技术关于电泳和色谱分离技术(应用应用)第一页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n各种不同分子量的蛋白质在电场内迁移速率与它的净电荷数成正比，而与其分子半径及溶液黏度成反比。n实验证明，蛋白质的电泳迁移速率与蛋白质分子量的对数成线性关系第五页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n根据此性质，可对具有相同电荷，不同分子量的蛋白质进行分离。第六页，本课件共有3

2、7页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程电泳技术分类电泳技术分类n影响电泳迁移率的因素n n电场强度。电场强度是指单位长度(cm)的电位降也称电势梯度。根据电场强度不同，将电泳分为常压电泳(2-10V/cm)和高压电泳(20-200V/cm)。电场强度高，带电质点的迁移率加速，因此省时，但会产生大量热量。n 第七页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n溶液的pH值。溶液的pH值决定被分离物质

3、的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。n对于带有两性基团的电解质，溶液存在一pH值，此时，溶液所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，在电场中不再移动，这一pH值称为电解质的等电点（isoelectric point,PI)。n若溶液pH值处于等电点酸侧，即pHp I，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动；n若溶液pH值处于等电点碱侧，即pHpI，则蛋内质带负电荷,向正极移动。溶液的pH值离pI越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。第八页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离

4、工程n 溶液的离子强度n一方面，电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。n带电质点吸引相反电荷的离子聚集其周围，形成一个与运动质点电荷相反的离子氛(ionic atmosphere),离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。n另一方面，离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响n质点的带电量，改变泳动速度。第九页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n电渗。在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗(electr

5、oosmosis)。由于电渗的影响，质点迁移的表观速度不同于其固有速度。n因固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附OH-带负电荷，而与纸接触的水溶液因产生H3O+，带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表观速度比其固有速度要快；若质点原来移向正极，表观速度比其固有速度要慢。因此应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。第十页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n电泳的

6、技术问题和对策：n影响迁移速率的主要因素（1）各组分的分子净电荷数;(2)分子量;(3)电泳系统介质的有效黏滞度。n（1）一般控制溶液pH4.5-9.5范围内。n（2）选择适当的缓冲系统。n（3）表面活性剂n（4）控制电泳系统介质的有效黏滞度第十一页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程n（5）电泳过程的产热问题nA、蛋白质变性;B、引起区带扩散，降低分辨率。n最常采用的办法是将电泳产生的热量从电泳系统中移出，保持电泳温度恒定。第十二页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程第十五页，本课件共有37页制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春制作者：黄德春高等制药分离工程高等制药分离工程2022/12/8感感谢谢大大家家观观看看第三十七页，本课件共有37页