简化糖化血红蛋白标准化与现状精选课件.ppt

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1、关于简化糖化血红蛋白标准化与现状第一页，本课件共有107页糖尿病的严重性糖尿病是全世界主要的公共的健康问题，已经影响了几亿人。美国糖尿病的发病率为5.1%。另外，发病率正在快速增长：年龄在4074岁的人群，在19761980年发病率为8.9%，19881994年上升为12.3%。疾病并发症很严重：视力丧失、肾衰、非外伤性的截肢等。第二页，本课件共有107页糖尿病的严重性疾病的经济负担很重，据1992年实际计算，费用为1000亿美金；估计每7个健康美国人的钱用于一个糖尿病病人，主要用于处理治疗糖尿病的慢性并发症，而不是初级预防。我国的糖尿病发病率同样很高。最近报道：上海的糖尿病发病率为10。第三

2、页，本课件共有107页认识糖尿病的重大步骤美国卫生部（U.S.Department of Health and Human Services）美国卫生研究院（National Institutes of Health,NIH）美国国家糖尿病、消化病、肾病研究院（National Institute of Diabetes and Dogestive and Kidney Diseases，NIDDK），于1983年开展了9年的糖尿病控制与并发症研究（Diabetes Control and Complications Trial，DCCT)。第四页，本课件共有107页引起糖尿病并发症的原因很复

3、杂，特别是糖血症和并发症的关系已经被关注了50年。研究说明，使血糖水平尽可能保持于正常水平，有可能减缓因糖尿病引起的眼、肾、与神经等疾病的出现与进展。事实上，显示了如果个体具有血糖控制不良史的，能维持降低血糖的都有好处。DCCT认识糖尿病的重大步骤第五页，本课件共有107页 依据DCCT结果，NIH、美国糖尿病学会（American Diabetes Association,ADA）和其他专家组建议：对所有糖尿病病人治疗时，应该使血糖水平控制到正常水平，以减少并发症。也是第一次依据DCCTGHB值，确定了科学的血糖目标。例如，ADA 推荐所有糖尿病病人必须将GHB控制在以下（非糖尿病的参考范围

4、为）；超过的病人应该考虑需要“有进一步的措施”。DCCT认识糖尿病的重大步骤第六页，本课件共有107页什么是糖化蛋白？糖尿病病人的血液内糖浓度较健康人要高，血液中的各种蛋白“浸润”于富含糖的环境中。引起葡萄糖等加成于蛋白上，形成“糖化”蛋白。葡萄糖及其他单糖和蛋白质的自由氨基反应，取决于它们的浓度。另一方面，就蛋白质而言，各氨基的pK和邻近的多肽结构是反应的关键限速步骤。这种不可逆的、非酶催化的反应称为糖基化。第七页，本课件共有107页什么是糖化蛋白？如：糖化血清/血浆蛋白；因血浆蛋白的半衰期和浓度不同以及有时体内波动相对大，用于常规监测糖尿病病人长期血糖状态较差。使用得很少。红细胞内的糖化血

5、红蛋白作为一个长期的参数评定血糖浓度特别适合。第八页，本课件共有107页糖化血红蛋白 血红蛋白的半衰期定义为红细胞存活时间，相对恒定在100120天。除血红蛋白半衰期的影响外，糖化程度基本取决于血糖升高的程度以及持续时间。因此检测糖化血红蛋白对于了解病人在以往的生活中，控制血糖是否良好是很有用的项目。第九页，本课件共有107页血红蛋白（Hb）成年人的血红蛋白通常的组成为：Hb A（占总的97）；Hb A2（占总的2.5）；Hb F（占0.5）。每个Hb A有四条多肽链两个为a-链、两个为b-链。第十二页，本课件共有107页人的血红蛋白第十三页，本课件共有107页糖化血红蛋白根据每个糖化位点和反

6、应参与物，总的糖化血红蛋白可分成若干个亚组分。天然（非糖化）血红蛋白是Ao（2、2链）HbAo。血红蛋白-链N-末端缬氨酸的游离氨基与不同碳水化合物糖基化形成糖化亚组分（HbA1a1，HbA1a2，HbA1b和HbA1c）。这些亚组分总称为HbA1。第十四页，本课件共有107页糖化血红蛋白除了血红蛋白链的N-末端缬氨酸外，血红蛋白分子内其它游离氨基也参与糖基化（链N末端缬氨酸、赖氨酸-氨基）。相对于HbA1，所有-链N-末端和其它游离氨基糖基化的血红蛋白被称作总糖化血红蛋白。第十五页，本课件共有107页糖化血红蛋白 除基本的成人血红蛋白A0外，在健康人里发现少量的胎儿血红蛋白HbF（2a，2g

7、链）和血红蛋白A2（2a、2d链）。缬氨酸在g链N-末端，以类似的方式糖基化，例如，通过与葡萄糖的共价键形成HbA2c。第十六页，本课件共有107页糖化血红蛋白（GHB或HbA1）HbA (9597%)血红蛋白A HbA0 (90%)非糖化血红蛋白部分 HbA1 (57%)糖化血红蛋白A0（a2 b2）-HbA1a 糖化血红蛋白HbA1 链 HbA1a1 果糖-1，6-二磷酸的糖化 HbA1a2葡萄糖-6-磷酸的糖化 第十七页，本课件共有107页糖化血红蛋白（GHB或HbA1）-HbA1bHbA1带有未知反应部分 -HbA1c 75%80%的HbA1，在b-链N-末端缬氨酸D-葡萄糖糖化 1-

8、HbA1C 不稳定的HbA1C（醛亚胺）S-HbA0稳定的HbA1C（酮胺）HbA2 (3%)血红蛋白A2（a2 d2）HbF (1%)血红蛋白F（a2 g2）第十八页，本课件共有107页糖化血红蛋白结果的表示 糖化血红蛋白结果以糖化血红蛋白量在总的血红蛋白量中的比率表示：第十九页，本课件共有107页GHB检测结果差异大 1970年代后期，常规实验室开始进行GHB的检测。而DCCT 发表结果在1993年，当时已经有许多不同的GHB 的检测方法，实验室间的结果无可比性。DCCT GHB的结果是为研究服务的，一般的糖尿病病人和医务人员还无法使用。所以两个不同的方法，对同一份血标本的结果差异很大。C

9、AP Survey的GHB结果数据反映，即使相似的方法结果差异很大，室间变异系数很大。第二十页，本课件共有107页CAP调查第二十一页，本课件共有107页测定糖化血红蛋白的方法测定糖化血红蛋白的方法按照电荷差异的离子交换层析、HPLC、电泳、等电聚焦等；按照结构差异的亲和层析、免疫测定；或化学反应：光电比色、分光测定等。无论什么方法，报告结果均以总血红蛋白的表示。第二十二页，本课件共有107页离子交换层析技术 使用阳离子交换树脂（阴性电荷）柱。使患者标本溶血，用溶血液上柱。选择洗脱缓冲液的离子强度与pH，使糖化血红蛋白的阳性电荷弱于血红蛋白HbA，使它不能与树脂结合，首先洗脱下来。用分光检测糖

10、化血红蛋白（即：HbA1中的A1cA1bA1c）。用第二个缓冲液洗脱血红蛋白主要部分，在分光光度计上的读数为总血红蛋白。糖化血红蛋白HbA1表示为总血红蛋白的百分率。第二十三页，本课件共有107页高效液相层析高效液相层析（HPLC）使用HPLC可以分离HbA1c与其他血红蛋白组分。HPLC检测的原理是阳离子交换树脂层析。当样品注射上柱后，使用增加离子强度的磷酸盐缓冲液逐步洗脱血红蛋白，在415与690 nm检测。该方法全自动，有商品。可以报告HbA1和HbA1c。所有HPLC方法均具有优良的精密度。HPLC的Hb A1c在DCCT中，用于所有患者样品的检测，被推荐为参考方法。第二十四页，本课件

11、共有107页GHB标准化 1993年，在DCCT结果公布前，美国临床化学学会(AACC)成立了糖化血红蛋白标准化委员会。委员会的任务是：实现糖化血红蛋白可比性。虽然，委员会的第一个目标是实现美国实验室的可比性，肯定了实现GHB检测国际可比性的重要性；为此，委员会成员包括了欧洲成员，他们在GHB 的可比性和室间评估上有丰富的经验。第二十五页，本课件共有107页GHB标准化 AACC首先确定了，实现可比性计划的重要内容是建立合适的GHB确认参考方法和纯化GHB的参考标准。在尚无确立参考标准前，委员会建议，在研究和建立纯化参考标准和确认参考方法时，可以学习胆固醇参考方法实验室网络方式进行可比性计划。

12、第二十六页，本课件共有107页GHB标准化 开始时以DCCT参考实验室作为可比性依靠者，可以加快标准化进程。常规实验室使用协调的GHB检测方法，使报告GHB检测结果可以和DCCT值比较；这样为糖尿病病人和他们的医务人员提供的检验结果可以对平均糖血症和并发症危险予以确认。第二十七页，本课件共有107页DCCT的GHB标准化 DCCT参考系统由2部分组成1个在密苏里大学（University of Missouri），另1个在明尼苏达大学(University of minnesoda)。密苏里实验室是离子交换高效液相层析（HPLC）系统模式，是指定的比较方法，作为DCCT的参考可比者。明尼苏达实

13、验室有自动离子交换HPLC系统，用于GHB测定。实验室进行常规研究标本的分析用。第二十八页，本课件共有107页NGSP AACC委员会围绕DCCT参考实验室发展了可比性方案，该方案在1995年被美国厂商的协调委员会认可。1996年AACC委员会解散，被国家糖化血红蛋白标准化计划（National Glycohemoglobin Standardization Program,NGSP）替代，在1996年7月开始工作。第二十九页，本课件共有107页NGSP的任务 NGSP的首要任务是支持厂商建立完整的校准，确定他们的检测结果和DCCT数据的可比性。1996年5月CAP GHB的室间评估计划开始，

14、是对NGSP的重要配合。使用的是新鲜全血标本。1996年12月，第一组GHB检测方法被正式核实和认可为：其检测结果可以和DCCT参考方法结果具可比性。1997年ADA认可NGSP。第三十页，本课件共有107页DCCT结果的临床意义 1993年发表的DCCT结果说明，在GHB水平和发展糖尿病并发症危险间具有直接关系。所以要求使各实验室的GHB结果和DCCT值具有可比性成为必须了。毫无问题，如果仅确定GHB值在或超出实验室的正常范围，意义不大。需要更精确地了解：这个检测值和DCCT值的关系是什么？因为只有DCCT结果直接和平均血糖和后果危险有关。第三十一页，本课件共有107页ADA对DCCT结果的

15、认可 DCCT结果对病人治疗是如此重要，在DCCT结果发表的几个月内，美国糖尿病学会(ADA)发表了依据特定DCCT GHB的检测结果，确定糖尿病治疗目标的规定。所以，这是临床后果的数据，使GHB检验具有可比性被高度重视。第三十二页，本课件共有107页NGSP网络的作用 作为GHB可比性，NGSP保持参考实验室的网络，该网络被校准至DCCT参考值。中心实验室设定初次校准，并负责监视网络实验室。网络实验室直接和GHB测定方法厂商工作，首先校准它们的方法，使他们能提供相当于DCCT的值，然后按照方案，提供方法确认的比较数据。第三十三页，本课件共有107页 NGSP对于测定方法具有高精密度的、能和网

16、络实验室在新鲜样品比较结果上具有所需的可比性的，给予认可。以常规实验室检测的新鲜调查品的室间质量评估结果评估认可过程的整个有效性。NGSP网络的作用第三十四页，本课件共有107页NGSP网络的作用 总之，可比性过程有三个主要步骤：第一步是对厂商的测定方法进行校准，使GHB结果和某NGSP的网络实验室结果具有可比性；第二步是由厂商确认检测，用多个新鲜血样品实现方案确定的可比性；第三步是各实验室参加室间评估，对具有NGSP实验室网络定值的新鲜全血样品检测。第三十五页，本课件共有107页 指导委员会指导委员会 网络监视网络监视校准校准 证实证实（精密度与偏倚）（精密度与偏倚）能力比对试验能力比对试验

17、新鲜血液新鲜血液新鲜血液新鲜血液新鲜血液新鲜血液 厂商与实验室厂商与实验室 （水平（水平和和）证实）证实 常规临床实验室常规临床实验室第三十六页，本课件共有107页使用NGSP确认方法的基本原理 DCCT说明了GHB检测和糖尿病的血糖控制、以及发展为微血管和神经病并发症危险的关系。DCCT提供了：为了使糖尿病病人降低并发症危险，要求控制GHB和血糖靶值目标的最新科学基础。第三十七页，本课件共有107页 ADA建议：医生协调的保健机构应该重视临床试验的结果，如对1型糖尿病病人治疗目标时，注意DCCT设定各个血糖的靶值。目前使用的糖尿病控制推荐GHB靶值来自DCCT导则。医生和保健机构应确保他们实

18、验室检测的GHB结果是否和DCCT具有可比性。使用NGSP确认方法的基本原理 第三十八页，本课件共有107页 使用NGSP确认的方法可以使临床实验室的GHB结果在数字上和DCCT结果相当，也可以和其他使用NGSP确认方法的临床实验室结果互相比较。所以被NGSP确认的方法提供了最佳使用GHB检测的结果。使用NGSP确认方法的基本原理 第三十九页，本课件共有107页 选择GHB检测方法考虑要点 为了确保某实验室的结果可以在数字上可以和DCCT结果相当，并和其他实验室结果具可比性，ADA建议：实验室只使用被NGSP确认的GHB的检测方法。除了能提供和DCCT结果具有可比性、可以使用由DCCT建立的参

19、考范围外，NGSP确认的方法具有良好的重现性；它的总不精密度小于5%，这是厂商进行确认评估时要求的。第四十页，本课件共有107页英国UKPDS 1998年英国前瞻性糖尿病研究（UK Prospective Diabetes Study,UKPDS）发表了结果。对2型糖尿病病人进行了10年研究，重复了DCCT的发现，即并发症的减少和GHB的降低有关。UKPDS使用了NGSP认可的GHB测定方法，另外，参与NGSP参考网络仔细的比较过程来确保DCCT和UKPDS 检测结果间的可比性。所以，DCCT和UKPDS二者的GHB结果都可以用于1型或2型糖尿病的病人，估计未来发展为并发症个人危险。第四十一页

20、，本课件共有107页NGSP标准化的效果 依据DCCT的参考方法实施标准化过程，NGSP对实验室间的GHB的可比性有了巨大的改进。2003年CAP的GH2调查，使用NGSP确认方法的参加实验室，98的报告为HbA1c或HbA1c等当值。在瑞典与日本有相似的标准化计划，使GHB结果的变异有了显著的下降。第四十二页，本课件共有107页第四十三页，本课件共有107页NGSP对实验室的认证进行HGB检测的实验室，必须向NGSP申请被认可。并不是使用了被NGSP认证的方法（厂商产品）的结果，就被认为符合要求。只有接受了来自NGSP全血样品检测，获得认可的实验室，才被认为：该实验室可以报告出与NGSP一致

21、的结果。这样的认可，每年一次。不保持永远有效。第四十四页，本课件共有107页IFCC标准化 在AACC进行协调GHB结果可比性的计划的同时，1995年IFCC组成了HbA1C标准化工作组（IFCC-WG）以实现检测的统一国际标准。发展和确认了2个侯选参考方法和HbA1C、HbAo参考物，作为全球可比性分析准确度的基础。第四十五页，本课件共有107页 几乎所有商品的检测都说检测的是HbA1C形式的糖化血红蛋白，实际上，有些测定是检测血中糖化血红蛋白的总和，但是这些方法都说明以指定的比较方法检测的HbA1C标准化。DCCT的参考方法检测的值，并不是真正的唯一HbA1C值。糖化血红蛋白（GHB Hb

22、A1C）第四十六页，本课件共有107页 HPLC方法常被用做“参考方法”，因为精密度好、结果长期稳定，但是非特异。同一个血样，依据不同的层析系统会得到不同的HbA1C的结果。如：树脂的类型、树脂的批间差、柱的大小、缓冲液的组成、洗脱时间等。认为是HbA1C的峰，但是依据定义可以不是HbA1C，由于可能缺少免疫活性、或在亲和层析时不能结合等。一些方法间的差异可以很大。糖化血红蛋白（GHB HbA1C）第四十七页，本课件共有107页 被美国DCCT研究与在NGSP计划中指定作为比较方法的Bio-Rad 70 HPLC方法；在瑞典推荐Mono S HPLC方法为标准化方法；它们间在判断限水平处的差异

23、达20，事实说明这些方法并不仅检测出HbA1C。很清楚，没有一个方法在计量上真正符合参考方法要求。糖化血红蛋白（GHB HbA1C）第四十八页，本课件共有107页IFCC的HbA1C国际标准化 为了克服这个标准化差的问题，IFCC建立了工作组，以确定国际标准化。工作组决定发展一个参考系统，使常规方法可以溯源。参考系统的主要组成是参考方法，它能特异地检测HbA1C，是对参考物质定值的必须手段。方法被要求可特异地检测血红蛋白b-链糖化N-端残基。第四十九页，本课件共有107页 经研究和实验确定，有两个分析方法被证实适合要求：HPLC/电雾离子化质谱方法（HPLC-ESI/MS）与HPLC/毛细管等

24、电聚焦电泳方法（HPLC-CE）。二者原理与工作均很好，并得到一样的结果。适应参考实验室使用设备的方便，确认了两个参考方法。IFCC的HbA1C国际标准化第五十页，本课件共有107页参考方法程序流程 溶血液溶血液酶切分解酶切分解HPLC-毛细管电泳毛细管电泳HPLC-质谱质谱第五十一页，本课件共有107页HbAo-多肽多肽HbA1c-多肽多肽 血红蛋白链蛋白水解的原理第五十二页，本课件共有107页IFCC参考方法的步骤一共为三步：红细胞分离与溶解 分离人红细胞，清洗后用水溶血，储存于pH6.2的缓冲液。血红蛋白的酶解离 使用蛋白酶（endoproteinase Glu-C）水解血红蛋白，形成多

25、肽混合物，其中有b链的糖化（HbA1c）和非糖化（HbAo）的N-端六肽。第五十三页，本课件共有107页分析与校准 分析检测糖化与非糖化六肽的比率。可以由HPLC-ESI/MS（方式A）或HPLC-CE（方式B）作分析。依据检测层析血红蛋白N-端六肽的面积，计算糖化与非糖化多肽的比率。校准品内由纯HbA1c和HbAo参考物质组成，用于校准。IFCC参考方法的步骤第五十四页，本课件共有107页IFCC HbA1C参考物质HbA1C参考物质：糖化N-端b-链人血红蛋白，纯度95；使用标准加入方式确定含量。HbAo参考物质：非糖化N-端b-链人血红蛋白，纯度99。第五十五页，本课件共有107页 纯H

26、bA1C与纯HbAo的混合物是参考方法的校准品。HbA1C与HbAo被分离、纯化至均一，并被确定特性。纯化与确定特性使用的技术为离子交换与亲和层析，以及HPLC、毛细管等电聚焦、电雾化的离子化质谱和多肽图谱等。IFCC HbA1C参考物质第五十六页，本课件共有107页使用这些方法，对健康的非糖尿病自愿者的血红蛋白纯化，再以离子交换层析（Mono S）确定纯度为：HbAo99.%；HbA1C98.5。但是，从多肽图谱上显示了：在HbA1C制品内仍然有约5的非N-端b-链糖化血红蛋白和HbA1C一起，从Mono S柱上洗脱下来。这个组分的确实量，采用：标准加入、酶切、最后对产生的b-N-端多肽定量

27、。二者的血红蛋白量使用ICSH参考方法确定。IFCC HbA1C参考物质第五十七页，本课件共有107页HbAo参考物质的质谱图第五十八页，本课件共有107页HbA1C参考物质的质谱图第五十九页，本课件共有107页HPLC非特异扫描的所有酶解后的多肽第六十页，本课件共有107页特异性扫描HbA1c与HbAo第六十一页，本课件共有107页4个HPLC-MS方法与6个HPLC-CE方法结果的比较第六十二页，本课件共有107页11个参考实验室对10例标本检测的结果第六十三页，本课件共有107页NGSP与IFCC计划的主要特征1996年建立了美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）。1995年，国际临

28、床化学学会（IFCC）成立HbA1C标准化工作组。NGSPIFCC组成组成第六十四页，本课件共有107页NGSP与IFCC计划的主要特征使糖化血红蛋白检测结果标准化，要求各实验室的检测结果与DCCT参考实验室具有可比性。DCCT的报告中已明确了GHB与血糖平均水平和糖尿病并发症发展的危险关系。开发了使所有检测HbA1C的常规方法进行国际标准化的参考检测系统，有参考物质与参考方法。可以实现溯源性。但是，临床应用价值必须详细说明IFCC值与DCCT值的关系。NGSPIFCC任务任务第六十五页，本课件共有107页NGSP与IFCC计划的主要特征HbA1c是根据指定的比较方法检测的层析图中的选定峰值定

29、义的。指定的检测方法与DCCT参考实验室方法一致，为HPLC方法，采用Bio-Rax 70树脂分离层析。HbA1C是根据非糖化与糖化血红蛋白的分子结构，建立HbA1C与HbAo参考物为标准、以确认的参考方法，经对样品的红细胞分离、溶血、酶解血红蛋白、用HPLC-ESI/MS或HPLC-CE方法检测。NGSPIFCC原理原理第六十六页，本课件共有107页NGSP与IFCC计划的主要特征由DCCT参考实验室对新鲜全血样品检测，形成冰冻全血。分发给厂商，校准厂商结果。直接具有HbA1C与HbAo纯物质。用配制方法形成参考方法标准。经参考实验室与厂商间对新鲜全血检测的比对符合要求后，由厂商实验室确定校

30、准品的定值。NGSPIFCC校准校准第六十七页，本课件共有107页NGSP与IFCC计划的主要特征NGSP网络包括一个一级参考实验室、一个候补的参考实验室、遍布全美和欧洲的二级参考实验室。二级参考实验室的检测方法有：离子交换HPLC、亲和HPLC、毛细管电泳、和免疫测定。这些实验室必须定期接受一级参考实验室下发的全血标本被监视。IFCC网络用于IFCC参考系统与各厂商、EQAS等提供服务。网络由618个参考实验室组成。网络实验室每年参加两次实验室间比较，依据网络的指标（CV2.5，所有实验室对于均值的离差2.5）更新他们证实的状态。NGSPIFCC网络网络第六十八页，本课件共有107页NGSP

31、与IFCC计划的主要特征厂商与实验室均可参加认证过程，估计精密度和与DCCT值的相对误差。建立与DCCT的溯源性。目前全球有超过98的实验室以NGSP为准。每年一次准备8个混合全血，发送给网络实验室和参加的厂商。IFCC网络为每个全血定值，厂商将用来校准他们的检测方法。厂商也预定参加监视计划，该计划由IFCC连续提供样品（每年24个样品）。NGSPIFCC服务服务第六十九页，本课件共有107页HbA1c检测的现实问题由于美国等较早地注意到实现实验室间GHB检测结果的可比性的重要性，经过长期的努力，形成了NGSP/UKPDS系统，以DCCT参考实验室的值，统一了全球GHB结果。大量的临床研究，肯

32、定了DCCT的GHB值与临床治疗糖尿病应用的价值。但是，不能以此对患者作糖尿病的诊断。第七十页，本课件共有107页DCCT证实了GHB（HbA1C）与糖尿病患者平均血糖浓度间的线性关关系。NGSP/UKPDS系统临床应用效果肯定，全球应用广泛。虽然，DCCT参考实验室认为，他们检测的GHB就是糖化血红蛋白的HbA1C；但是，没有HbA1C纯物质予以证实。在溯源性上不明确。HbA1c检测的现实问题第七十一页，本课件共有107页 DCCT参考系统的结果是建立于2个参考实验室的工作。该系统没有认可的参考物质。必须在严格控制参考实验室方法的检测条件下，确保结果重现性良好。HbA1c检测的现实问题第七十

33、二页，本课件共有107页IFCC系统从检测上是完整的：提供了非糖化的b-链N-端血红蛋白纯物质（HbAo）；也提供了被葡萄糖加成的b-链N-端糖化血红蛋白纯物质（HbA1C）。具有两个参考方法，其检测的可靠性由纯物质予以确认。所以，IFCC系统的结果有强烈的溯源性。HbA1c检测的现实问题第七十三页，本课件共有107页明确IFCC与NGSP网络间的关系 第七十四页，本课件共有107页在整个检测范围内，IFCC结果总是比NGSP偏低1.52。形成了主要等式 （NGSP 0.915IFCC+2.15）。这个等式将IFCC结果与DCCT（Diabetes Control and Complicati

34、ons Trial，糖尿病控制与并发症研究）、英国前瞻性糖尿病研究（United Kingdom Prospective Diabetes Study，UKPDS）临床有意义的HbA1c结果联系起来。该主要等式也为NGSP提供了可溯源至较高的参考方法。明确IFCC与NGSP网络间的关系 第七十五页，本课件共有107页IFCC还是NGSP结果？第七十六页，本课件共有107页 全球应报告什么结果？决定实施新参考方法的事宜，应由相应的国际学会协调。IFCC结果以准确为依据；NGSP结果可以直接与临床后果、以及糖尿病治疗目标有关。虽然IFCC/NGSP有很好的相关，但是，绝对值不一。IFCC数值没有D

35、CCT(NGSP)-数值的转换，无法与临床后果有关系。IFCC还是NGSP结果？第七十七页，本课件共有107页经研究，转换IFCC的HbA1c数值关系为：MBG(mmol/L)1.84 IFCC-HbA1c如果这个关系能被各个研究确认，就可以从报告HbA1c指示平均血糖。这个方式的优点包括检测的完全的修订，伴随新的参考范围，将避免混淆；（当然，再教育十分必要）；范围简化了，让糖尿病患者从自己的血糖仪就可以理解自己的靶值；在诊断模式上增加了使用的可能性。IFCC还是NGSP结果？第七十八页，本课件共有107页今后怎么办？ADA/EASD/IDF的HbA1c工作组，建立于2004年，目的是使HbA

36、1C报告一致。美国糖尿病学会（ADA）欧洲糖尿病研究学会（European Association for the Study of Diabetes，EASD）国际糖尿病学会（International Diabetes Federation，IDF）对全球报告HbA1C结果具有可比性无异议。第七十九页，本课件共有107页 立即实施 1接受IFCC方法参考方法，作为厂商校准HbA1c检测的新的全球标准。2使用新的IFCC方法学在现有的国际实验室网络内确定为“国际证实过程”。3厂商不需改变现有的报告方式，直至完成以后的工作（即证实IFCC值在临床上的应用价值）；目前继续使用DCCT/UKPDS

37、值。ADA/EASD/IDF的HbA1c工作组推荐第八十页，本课件共有107页 3年后 1要确定是否还有各个研究的数据，将HbA1C与MBG联系起来。特别是2型糖尿病患者的数据最有价值。2设计与进行对全球不同人群的前瞻性研究，以确认/建立HbA1C/MBG关系。3对新报告系统计划对公众与医学专业的信息体系。ADA/EASD/IDF的HbA1c工作组推荐第八十一页，本课件共有107页欢迎指正！第八十二页，本课件共有107页蛋白糖化的化学蛋白糖化的化学蛋白糖化开始于糖的醛基或酮基与游离的蛋白上的氨基间非酶的、不可逆作用，形成易变的Schiff碱。在数小时形成平衡，并与周围的葡萄糖浓度呈比例关系。S

38、chiff碱的加成物又缓慢地重新转换为较稳定的酮胺“Amadori”产物，约在46周达到平衡。“Amadori”产物又经数月的不可逆转换，与游离氨基反应，形成荧光的交联高级的糖化终端（Advanced Glycation End,AGE）产物。第八十三页，本课件共有107页这些蛋白糖化的“Amadori”产物结构高度非均相。它们随着年龄累积，反映了血糖的升高，特别在血糖控制差的患者中表现明显升高。基底膜蛋白上的AGE产物，相信会破坏正常的血管功能，也是晚期糖尿病并发症的主要影响因子。蛋白糖化的化学蛋白糖化的化学第八十四页，本课件共有107页带有Amadori产物蛋白的比例与蛋白的半衰期、在过去

39、时间内的血糖浓度有关。在细胞外蛋白分子上，糖化产物几乎全部来自葡萄糖，而细胞内的蛋白可以与许多不同的天然的、磷酸化的糖反应。但是，在细胞内，如红细胞可以自由地与葡萄糖接触的，糖化产物的主要来源是葡萄糖。蛋白糖化的化学蛋白糖化的化学第八十五页，本课件共有107页糖化血红蛋白与血红蛋白发生糖化作用的产物为糖化血红蛋白。糖化发生于各种类型的Hb（如：HbA、HbA2、与HbF）的多个氨基酸残基端。HbA层析分析说明，称为HbA1或快速血红蛋白的糖化血红蛋白系列，有亚属：HbA1a、HbA1b、和HbA1c。第八十六页，本课件共有107页糖化血红蛋白 HbA1c其中HbA1c是HbA的每个b-链的N-

40、端与葡萄糖的Amadori产物，约占HbA1的80，占总糖化血红蛋白（GHB）的一半。因为这个组分与血液平均葡萄糖浓度具有最佳相关。由于红细胞有很长的半衰期，HbA1c的比例是以往68周时间内血液葡萄糖浓度的指数，从采用层析技术分离糖化血红蛋白的上世纪80年代起，报告的GHB结果都以HbA1c为代表。依据采用的检测方法，HbA1c参考区间为总血红蛋白的46。第八十七页，本课件共有107页第八十八页，本课件共有107页第八十九页，本课件共有107页第九十页，本课件共有107页第九十一页，本课件共有107页以下资料来自Roche第九十二页，本课件共有107页HbA1c的定义 HbA1c的定义是：“

41、在的b-链的N-端被糖化的血红蛋白。”第九十三页，本课件共有107页IFCC的参考方法为两个不同的参考方法。HPLC-毛细管电泳（HPLC-CE）HPLC-电雾化离子化质谱分析（HPLC-MS）二者均对血红蛋白的N-端多肽是特异的，如HbA1c。可以得到一致的结果。第九十四页，本课件共有107页IFCC的参考物质 一级参考物质 （Primary Reference Materials）纯HbA1c 纯HbAo第九十五页，本课件共有107页IFCC参考系统的实验室间比较经实验室间的循环比较：说明参考系统实用性强、精密度好。实验室内的CV为0.52；实验室间的CV为1.42.3。第九十六页，本课件

42、共有107页Roche的HbA1c 所有罗氏的HbA1c产品的检测结果，均实现了标准化；可直接溯源至IFCC参考系统第九十七页，本课件共有107页IFCC结果与其他系统值的转换 罗氏系统的IFCC-HbA1c结果可转换为各个国家标准化方法确定的值。例如：美国的DCCT/NGSP值、日本糖尿病学会的JDS值等。第九十八页，本课件共有107页IFCC方法的初步参考范围对120个健康人（年龄3555岁）的全血检测，为3.330.48（均值2 SD），无性别差异。如预期预料的一致，IFCC参考范围低于其他的常规方法，如：DCCT/NGSP值的范围。第九十九页，本课件共有107页IFCC-HbA1c临床

43、应用判断限 初步判断限为：34为无糖尿病；5为糖尿病控制良好的目标；6为需要调整治疗方案。第一百页，本课件共有107页IFCC-HbA1cIFCC标准化方法的参考范围较低，是因为IFCC参考方法具有较好的特异性。罗氏免疫方法也具有较低的参考范围，因为方法对HbA1c检测的特异性，以及按照IFCC参考方法标准化。第一百零一页，本课件共有107页HbA1c检测的历史回顾现有的DCCT/NGSP标准化是基于非特异的离子交换层析的HPLC方法。该方法仅依据修饰与未修饰的血红蛋白分子电荷的差异，来区分糖化与非糖化的血红蛋白。这样的差异可以发生于缬氨酸a-氨基上的多个化学反应（如：氨基甲酰化、乙酰化、以及

44、糖化作用）。第一百零二页，本课件共有107页DCCT/NGSP标准化方法在HPLC的“HbA1c”峰中，不仅有HbA1c，还有表现为相同电荷数的其他修饰血红蛋白。所以，该方法对HbA1c的估计偏高。第一百零三页，本课件共有107页现今测定HbA1c的常规HPLC方法（如：Bio-Rad Variantt、TOSOH）有了很大的改善，几乎完全解决了特异性的问题。但是，DCCT的标准化方法依然如旧，使NGSP的结果仍然是老方法的，存在着特异性差的问题。DCCT/NGSP标准化方法第一百零四页，本课件共有107页DCCT标准化方法的分离图谱第一百零五页，本课件共有107页分离图谱的问题注意：层析的分离峰没有完整的底线。这就是为什么历史上DCCT/NGSP的HbA1c结果偏高的原因。第一百零六页，本课件共有107页感感谢谢大大家家观观看看第一百零七页，本课件共有107页