抗体精选课件.ppt

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1、关于抗体课件1第一页，本课件共有57页2第一节第一节 概述概述第二节第二节 抗体的结构抗体的结构 第三节第三节 抗体的生物学功能抗体的生物学功能第四节第四节 五类抗体分子的功能及特点五类抗体分子的功能及特点第五节第五节 抗体的抗原性抗体的抗原性第六节第六节 人工制备抗体人工制备抗体第二页，本课件共有57页3第一节第一节 概述概述 抗体抗体：受抗原刺激后，由：受抗原刺激后，由B淋巴细胞分化成的浆淋巴细胞分化成的浆细胞产生的能与相应抗原特异结合的免疫球蛋白。细胞产生的能与相应抗原特异结合的免疫球蛋白。一、抗体一、抗体抗原抗原B B浆细胞浆细胞浆细胞浆细胞抗体抗体抗体抗体T TT T效应淋巴细胞效应

2、淋巴细胞效应淋巴细胞效应淋巴细胞第三页，本课件共有57页4v1 1、Ab Ab 的发现：的发现：18901890年，年，Behring Behring 和北里在德国和北里在德国KochKoch实验室使用实验室使用白喉脱白喉脱毒外毒素毒外毒素注射马，在马血清中发现了一种能中和白喉外毒注射马，在马血清中发现了一种能中和白喉外毒素的物质，称为素的物质，称为“抗毒素抗毒素”，并挽救了成千上，并挽救了成千上 万的白喉患儿。万的白喉患儿。60%60%死亡率降到死亡率降到26%26%。医学史上的一个重要里程碑，人类医学史上的一个重要里程碑，人类防治传染病的重要方法防治传染病的重要方法血清疗法血清疗法诞生了。

3、诞生了。获获19011901年的第一届诺贝尔奖年的第一届诺贝尔奖第四页，本课件共有57页52、证明是球蛋白、证明是球蛋白证明：抗体是证明：抗体是球蛋白；球蛋白；但但球蛋白并非都具有抗体活性球蛋白并非都具有抗体活性第五页，本课件共有57页6 指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。蛋白。与抗体概念的异同。与抗体概念的异同。二、免疫球蛋白二、免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）抗体：生物学功能抗体：生物学功能免疫球蛋白：化学结构免疫球蛋白：化学结构 IgAb第六页，本课件共有57页7免疫球蛋白存在形式免疫球蛋白存在形式分泌型分泌型（secret

4、ed immunoglobulin,sIg）抗体抗体 膜型膜型（membrane immunoglobulin,mIg）BCR(B细胞受体细胞受体)B第七页，本课件共有57页8第二节第二节 抗体的结构及功能区抗体的结构及功能区 一、四肽链结构一、四肽链结构“Y”字型字型 四肽链四肽链2条重链条重链(heavy chain,H)2条轻链条轻链(light chain,L)二硫键连接二硫键连接第八页，本课件共有57页9轻链：约轻链：约210210个个AAAA残基，分子量约为残基，分子量约为25kD25kD；可分为；可分为 和和 两型：两型：重链：重链：约约450-550个氨基酸残基个氨基酸残基，分

5、子量分子量约约50-75 kD。重链分重链分、和和链链 IgG IgG（IgG IgG 和和 IgG IgG ）IgMIgM （IgM IgM 和和 IgM IgM ）IgAIgA （IgA IgA 和和 IgA IgA ）IgEIgE （IgE IgE 和和 IgE IgE ）IgD IgD（IgD IgD 和和 IgD IgD ）-S-S-S-SS-SNCLHHLN第九页，本课件共有57页10二、可变区和恒定区二、可变区和恒定区可变区可变区（variable region,V 区）：轻链和重链靠近区）：轻链和重链靠近N端的约端的约110个氨基酸变化很大，个氨基酸变化很大，称为可变区。称为可

6、变区。恒定区恒定区（constant region,C 区）：区）：免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸序列较保守的区域。免疫球蛋白轻链和重链中氨基酸序列较保守的区域。H链有一个链有一个VH及及34个个CH区。区。（其中（其中IgM,IgE有有CH4区）区）L链具有链具有VL，CL两个功能区。两个功能区。铰链区铰链区：位于位于CH1与与CH2之间，含之间，含有丰富的脯氨酸，易伸展弯曲，而有丰富的脯氨酸，易伸展弯曲，而且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水且易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解。解。第十页，本课件共有57页11第十一页，本课件共有57页12可变区可变区：超变区超变区：重链和轻链：重链和轻链V区各有区各

7、有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为超变区超变区（hypervariable region,HVR）或决定簇互补决定区（）或决定簇互补决定区（complementary determining region,CDR），），分别为分别为CDR1、CDR2和和CDR3。6个个CDR组成一个抗组成一个抗原结合部位。原结合部位。骨架区骨架区：CDR以外区域的氨基酸组成和排列顺序相对不易变化，称为骨架区以外区域的氨基酸组成和排列顺序相对不易变化，称为骨架区（framework region,FR）。）。可变区可变区第十二页，本课件共有57页13第十三页

8、，本课件共有57页14超变区决定与抗原决定簇结合。超变区决定与抗原决定簇结合。骨架区主要稳定超变区的空间构型。骨架区主要稳定超变区的空间构型。第十四页，本课件共有57页15三、抗体的功能区或结构域三、抗体的功能区或结构域功能区功能区功能区功能区：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链经：是不连续，紧密折叠的区域，由重链和轻链经链内二硫键连接而成的球状结构。链内二硫键连接而成的球状结构。Ag Binding抗原结合位点抗原结合位点Complement Binding Site补体结合位点，活化补体补体结合位点，活化补体Placental TransferIgG 胎盘转移胎盘转移Binding t

9、o Fc ReceptorsFC段受体，亲细胞活性段受体，亲细胞活性同种异型抗原决定簇同种异型抗原决定簇存在部位，遗传标志存在部位，遗传标志促进可变区与抗原表位结合；促进可变区与抗原表位结合；暴露补体结合位点，活化补体暴露补体结合位点，活化补体第十五页，本课件共有57页16四、抗体的其它成分四、抗体的其它成分1 1、连接链（、连接链（Join Chain,Join Chain,J J 链链)连接多聚体连接多聚体 Ig Ig 的蛋白质，存在于的蛋白质，存在于SIgA SIgA 和和IgMIgM。J 链链SIgASIgA（分泌型（分泌型 IgA)IgA)J J 链链IgM第十六页，本课件共有57页

10、172 2、分泌片（分泌片（Secretory piece,SPSecretory piece,SP）只存在于粘膜分泌型只存在于粘膜分泌型IgAIgA中，由上皮细胞合成，中，由上皮细胞合成，防止蛋白酶对防止蛋白酶对IgAIgA的水解。的水解。SIgASP第十七页，本课件共有57页18五、免疫球蛋白的水解片段五、免疫球蛋白的水解片段第十八页，本课件共有57页19水解水解酶酶作用位点作用位点水解片段及其功能水解片段及其功能 木瓜蛋白木瓜蛋白酶酶铰链区重链间二硫铰链区重链间二硫键近键近N N端端（1 1）两个相同的）两个相同的FabFab段：可与抗原结合段：可与抗原结合（2 2）一个）一个FcFc段

11、：激活补体、结合细胞、通过段：激活补体、结合细胞、通过胎盘胎盘胃蛋白酶胃蛋白酶铰链区重链间二硫铰链区重链间二硫键近键近C C端端（1 1）一个具有双价活性的）一个具有双价活性的 F(abF(ab)2 2段：可段：可同时结合两个抗原表位同时结合两个抗原表位 （2 2）若干个小分子多肽碎片）若干个小分子多肽碎片(pFc(pFc)：无生：无生物学作用物学作用IgG 酶解后的比较酶解后的比较第十九页，本课件共有57页20第三节第三节 抗体的生物学功能抗体的生物学功能第二十页，本课件共有57页21（一）（一）V区区-识别并特异性结合抗原识别并特异性结合抗原 病毒病毒毒素毒素二聚体（二聚体（SIgASIg

12、A）-4-4 价价单体分子（单体分子（IgGIgG，IgEIgE）-2-2 价价五聚体（五聚体（IgMIgM）-5-5 价价意义：意义：（1 1）中和效应）中和效应 -中和毒素和病毒中和毒素和病毒第二十一页，本课件共有57页22FabFc固定补体固定补体与与Fc受体结合受体结合BFc受体受体Ig（2 2）与抗原结合）与抗原结合 -C-C区变构，激活补体，与区变构，激活补体，与FcFc受体受体结合，起多种效应。结合，起多种效应。第二十二页，本课件共有57页23(二）二）激活补体激活补体-发挥发挥溶解细胞溶解细胞等多种活性等多种活性AbAb（IgMIgM、IgGIgG）+Ag+Ag C1q 补体补

13、体经典经典途径途径途径途径 IgG4IgG4、IgA和和和和 IgEIgE的的凝聚物凝聚物 补体补体补体补体旁路旁路旁路旁路途径途径 第二十三页，本课件共有57页24发挥杀伤作用发挥杀伤作用 称称 ADCC 激活激活NK细胞细胞促进吞噬促进吞噬 称称调理作用调理作用 结合吞噬细胞结合吞噬细胞3.超敏反应超敏反应：结合肥大细胞及嗜碱性粒细胞。：结合肥大细胞及嗜碱性粒细胞。（三）与（三）与Fc受体（受体（FcR)结合结合-介导免疫细胞活性介导免疫细胞活性 体内多种细胞具有体内多种细胞具有Fc受体，如吞噬细胞、受体，如吞噬细胞、NK细胞、细胞、单核细胞、肥大细胞、粒细胞。单核细胞、肥大细胞、粒细胞。

14、1.ADCC(抗体依赖细胞介导的细胞毒抗体依赖细胞介导的细胞毒)作用作用2.调理作用调理作用：促进吞噬细胞吞噬细菌等：促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性颗粒性抗原。抗原。第二十四页，本课件共有57页25第二十五页，本课件共有57页26第二十六页，本课件共有57页274、通过胎盘、通过胎盘(IgG)和粘膜和粘膜(IgA)IgG是唯一是唯一可通过胎盘可通过胎盘的抗体，在新生儿抗感染的抗体，在新生儿抗感染中有重要作用。中有重要作用。SIgASIgA可通过分泌片介导可通过分泌片介导穿越粘膜穿越粘膜上皮细胞，在上皮细胞，在粘膜表面抗感染中起作用重要。粘膜表面抗感染中起作用重要。第二十七页，本课件共有57页28

15、第二十八页，本课件共有57页29与抗原作特异性结合与抗原作特异性结合激活补体激活补体结合细胞结合细胞 激活吞噬细胞：调理作用激活吞噬细胞：调理作用 激活激活NKNK细胞：细胞：ADCCADCC作用作用 激活肥大细胞：超敏反应激活肥大细胞：超敏反应穿过胎盘和粘膜穿过胎盘和粘膜V V区区活性活性 C C区区活性活性 抗体生物学活性总结抗体生物学活性总结与具有与具有FcFc受体的细胞结合受体的细胞结合第二十九页，本课件共有57页30第四节第四节 五类免疫球蛋白的特性与功能五类免疫球蛋白的特性与功能第三十页，本课件共有57页31第三十一页，本课件共有57页321、IgG 1 1、单体分子；2 2、四个

16、亚类；四个亚类；3、血清中含量最高(75%Ig)；4、半衰期最长(21(212323天)；第三十二页，本课件共有57页335 5、抗感染的主要抗体抗感染的主要抗体，具有抗菌、抗病毒、中和毒，具有抗菌、抗病毒、中和毒素急免疫调节作用，能激活补体。素急免疫调节作用，能激活补体。6 6、再次应答的主要抗体再次应答的主要抗体。7 7、唯一能通过胎盘的抗体唯一能通过胎盘的抗体（在新生儿抗感染中起重要（在新生儿抗感染中起重要作用）；作用）；第三十三页，本课件共有57页342、IgM3 3、在免疫应答中产生最早。、在免疫应答中产生最早。功能：功能：理论上十价，但由于空间位阻，结合价为五价，但仍具理论上十价，

17、但由于空间位阻，结合价为五价，但仍具最强的最强的溶菌、激活补体、免疫调理溶菌、激活补体、免疫调理作用。作用。2 2、在个体发育中最早合成。、在个体发育中最早合成。4 4、占血清、占血清、占血清、占血清IgIg含量的含量的含量的含量的5 510%10%；1 1、五聚体五聚体五聚体五聚体，分子量最大，分子量最大，分子量最大，分子量最大(900kd)(900kd)，又称巨球蛋白），又称巨球蛋白），又称巨球蛋白），又称巨球蛋白）5 5、半衰期、半衰期、半衰期、半衰期5 5天天天天第三十四页，本课件共有57页353、IgA分两型分两型血清型血清型：IgA1,IgA1,单体。占血清单体。占血清Ig10-2

18、0%Ig10-20%分泌型（分泌型（SIgASIgA）：）：IgA2IgA2，二聚体；，二聚体；，二聚体；，二聚体；功能：功能：粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；粘膜局部抗感染免疫，起中和作用，阻止病原微生物黏附；聚合聚合聚合聚合 IgA IgA 激活补体替代途径。激活补体替代途径。激活补体替代途径。激活补体替代途径。粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；粘膜局部浆细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；分泌片由粘膜上皮细胞合成；

19、分泌片由粘膜上皮细胞合成；第三十五页，本课件共有57页36sIgAsIgA的合成的合成和主要作用和主要作用部位在黏膜部位在黏膜第三十六页，本课件共有57页374、IgD2 2、血清中含量极少、血清中含量极少,约占血清约占血清IgIg的的1%1%。4 4、B B细胞成熟的表面标志。细胞成熟的表面标志。3.3.3.3.存在形式：分泌型存在形式：分泌型存在形式：分泌型存在形式：分泌型 血清中，功能不清血清中，功能不清血清中，功能不清血清中，功能不清 1 1 1 1、单体分子、单体分子、单体分子、单体分子 膜结合型膜结合型膜结合型膜结合型 B B B B细胞表面。细胞表面。细胞表面。细胞表面。意义：意

20、义：B细胞成熟的标志。细胞成熟的标志。抗原受体，对抗原受体，对抗原受体，对抗原受体，对B B细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节细胞活化、增殖和分化起调节 作用；作用；作用；作用；成熟成熟B细胞可同时表达细胞可同时表达SmIgD和和SmIgM。不成熟不成熟B细胞只表达细胞只表达SmIgM，第三十七页，本课件共有57页38未成熟未成熟B细胞细胞 成熟成熟B细胞细胞 活化或记忆活化或记忆B细胞细胞mIgM mIgD 第三十八页，本课件共有57页395、IgE1 1、单体分子、单体分子4 4、具亲细胞性（亲细胞抗体）、具亲细胞性（亲细胞抗体）功能：功能：介导

21、介导I I型超敏反应型超敏反应 2 2、血清中含量极微；、血清中含量极微；3 3、呼吸道和消化道粘膜浆细胞产生。、呼吸道和消化道粘膜浆细胞产生。第三十九页，本课件共有57页40IgGIgGIgMIgMIgA/SIgAIgA/SIgAIgDIgDIgEIgE存在形式存在形式存在形式存在形式单体单体单体单体五聚体五聚体五聚体五聚体单体单体单体单体/二聚体二聚体二聚体二聚体单体单体单体单体单体单体单体单体相对分子质量相对分子质量相对分子质量相对分子质量(1000)(1000)146146970970160/385160/385184184188188血清中总血清中总血清中总血清中总IgIg百分含百分

22、含百分含百分含量量量量70757075510510152015201 10.0020.002半衰期半衰期半衰期半衰期23235 56 63 33 3出现时间出现时间出现时间出现时间 出生后出生后出生后出生后三个月三个月三个月三个月出生前出生前出生前出生前出生后四个出生后四个出生后四个出生后四个月月月月晚晚晚晚晚晚晚晚五大类免疫球蛋白特性比较（五大类免疫球蛋白特性比较（1）第四十页，本课件共有57页41IgGIgGIgMIgMIgAIgAIgDIgDIgEIgE与补体结合能力与补体结合能力与补体结合能力与补体结合能力 中和作用中和作用中和作用中和作用 调理作用调理作用调理作用调理作用 ADCCA

23、DCCADCCADCC 参与粘膜防御参与粘膜防御参与粘膜防御参与粘膜防御 能穿透胎盘能穿透胎盘能穿透胎盘能穿透胎盘 与细胞结合与细胞结合与细胞结合与细胞结合 参与超敏反应参与超敏反应参与超敏反应参与超敏反应 五大类免疫球蛋白特性比较（五大类免疫球蛋白特性比较（2 2）第四十一页，本课件共有57页42第五节第五节 抗体的抗原性抗体的抗原性vIg具有双重性：做为抗体能结合抗原 做为大分子蛋白质能被其它抗体结合Ag1Ab1（Ag2）Ab2第四十二页，本课件共有57页43vIg的抗原性可分为3种：1.1.同种型抗原（同种型抗原（IsotypeIsotype）同一种属每个个体都具有的免疫球蛋白的抗原特异

24、性，其抗原决定簇主要存在于Ig的C区。第四十三页，本课件共有57页44 （1 1）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链）类和亚类（根据重链C C C C区抗原性的不同）区抗原性的不同）区抗原性的不同）区抗原性的不同）IgG(gamma)IgA IgA (alpha)(alpha)IgM IgM (mu)IgD (delta)IgE IgE (epsilon)(epsilon)类类亚类亚类亚类亚类IgGIgG：IgG1,IgG2,IgG3,IgG4 IgG1,IgG2,IgG3,IgG4 IgA：IgA1,IgAIgA1,IgA第四十四页，本课件共有57页45（2 2）型和

25、亚型）型和亚型(根据轻链根据轻链C C区抗原的差异区抗原的差异)亚型亚型亚型亚型(链链)(kappa)型型(lambda)型型型型 型型型型11：第：第190190位位(亮氨酸亮氨酸)2222：第：第：第：第190190190190位位位位(精氨酸精氨酸精氨酸精氨酸)33：第第第第154154154154位位(甘氨酸甘氨酸)44：第第154154位位位位(丝氨酸丝氨酸丝氨酸丝氨酸)第四十五页，本课件共有57页462 2、同种异型抗原（、同种异型抗原（AllotypeAllotype）同一种属不同个体所具有的Ig在抗原性上的差异，主要存在于重链和轻链的稳定区特定部位的某个或数个氨基酸的不同中。第

26、四十六页，本课件共有57页473 3）独特型抗原（）独特型抗原（IdiotypeIdiotype）同一个体不同Ig的抗原性各不相同，主要存在于Ig 的V区。第四十七页，本课件共有57页48同一物种同一物种Ig共有的抗原性，共有的抗原性，存在于存在于C区。区。同一物种不同个体同一物种不同个体Ig抗原性抗原性差异，差异在于差异，差异在于C区某些区某些AA不同。不同。同一个体内各同一个体内各Ig抗原性差抗原性差异，存在于异，存在于V区。区。同一个体内各同一个体内各Ig抗原性差抗原性差异，存在于异，存在于V区。区。（个体型标志）（个体型标志）（种属型标志）（种属型标志）（细胞型标志）（细胞型标志）第四

27、十八页，本课件共有57页49第六节第六节 人工制备抗体人工制备抗体 多克隆抗体多克隆抗体（polyclonal antibody，PcAb）单克隆抗体单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb）基因工程抗体基因工程抗体 （engineering antibody）第四十九页，本课件共有57页50 利用抗原免疫动物后从血清中获得的抗体，含有由不同由不同B细胞克隆产生的针对不同抗原细胞克隆产生的针对不同抗原决定簇决定簇的多种类型抗体。（1 1）预防、治疗感染性疾病（特异性差，可发生超敏反应）预防、治疗感染性疾病（特异性差，可发生超敏反应）一、多克隆抗体（一、多克隆抗体（polyc

28、lonal antibody）（2 2）临床诊断）临床诊断Ag第五十页，本课件共有57页51抗血清（多克隆抗体）的制备抗血清（多克隆抗体）的制备第五十一页，本课件共有57页52 1975年建立的技术，通过杂交瘤技术获得的针对单一抗原决定簇的高特异性抗体。二、单克隆抗体（二、单克隆抗体（monoclonal antibody）概念：由单一克隆概念：由单一克隆B B细胞产生的细胞产生的,只针对只针对某一特定某一特定抗原决定簇抗原决定簇的抗体。的抗体。第五十二页，本课件共有57页53第五十三页，本课件共有57页54多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体来源来源动物免疫血清、恢复期病人血动物免疫血清

29、、恢复期病人血清或免疫接种人群清或免疫接种人群多为鼠源性多为鼠源性特点特点来源广泛、制备容易来源广泛、制备容易纯度高、特异性强、效价高、少纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应、制备成本低或无血清交叉反应、制备成本低组成组成针对不同抗原表位的抗体的混针对不同抗原表位的抗体的混合物合物针对单一表位，结构和组成高度针对单一表位，结构和组成高度均一，抗原特异性及同种型一致均一，抗原特异性及同种型一致应用应用疾病的被动免疫治疗疾病的被动免疫治疗广泛用于疾病诊断、特异性抗原广泛用于疾病诊断、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、疾病的被或蛋白的检测和鉴定、疾病的被动免疫治疗和生物导向药物制备动免疫治疗和生物导向药物制备缺点缺点特异性不高、易发生交叉反应，特异性不高、易发生交叉反应，不易大量制备不易大量制备人体应用后可导致人鼠抗体反应人体应用后可导致人鼠抗体反应多克隆抗体与单克隆抗体的比较多克隆抗体与单克隆抗体的比较第五十四页，本课件共有57页55三、基因工程抗体（三、基因工程抗体（Genetically engneering antibody）利用基因重组技术在工程细胞（如大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞等）生产的高特异性抗体。第五十五页，本课件共有57页56第五十六页，本课件共有57页10.12.2022感谢大家观看第五十七页，本课件共有57页