分光光度测定方法精选课件.ppt

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1、关于分光光度测定方法第一页，本课件共有12页一、普通分光光度法一、普通分光光度法1.1.单组分的测定单组分的测定 通常采用通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。标准曲线法定量测定。2.2.多组分的同时测定多组分的同时测定 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在若各组分的吸收曲线互不重叠，则可在各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上各自最大吸收波长处分别进行测定。这本质上与单组分测定没有区别。与单组分测定没有区别。若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根若各组分的吸收曲线互有重叠，则可根据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分据吸光度的加合性求解联立方程组得出各组分的含量。的含量。A1=a1bca b1

2、bcb A2=a2bca b2bcb 第二页，本课件共有12页二、示差分光光度法（示差法）二、示差分光光度法（示差法）普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入含量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。比溶液。设：待测溶液浓度为设：待测溶液浓度为c cx x，标准溶液浓度为，标准溶液浓度为c cs s(c cs s c cx x)。则：。则：Ax=b cx As=b c

3、s x s=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差度之差。第三页，本课件共有12页示差分光光度法（示差法）示差分光光度法（示差法）AAx As=b(cx cs）=bc 测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸光度之差差A。示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与c呈直线关系。由标准曲线上查得呈直线关系。由标准曲线上查得相应的相应的c值，则待测溶液浓度值，则待测溶液浓度cx：cx=cs+c 第四页，本课件共有12页示差法标尺扩展原理：示差法标尺

4、扩展原理：普通法：普通法：cs的的T=10%；cx的的T=5%示差法：示差法：cs 做参比，调做参比，调T=100%则：则：cx的的T=50%；标尺扩展；标尺扩展10倍倍第五页，本课件共有12页三、双波长分光光度法三、双波长分光光度法 不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(1 1和和2 2)；以参比波长；以参比波长1 1处的吸光度处的吸光度A A11作为参比，来消除干扰。作为参比，来消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度

5、等方面都比单波长法有所提高。敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。A A A22 A A11 (22 11)b cb c 两波长处测得的吸光度差值两波长处测得的吸光度差值A与待测组分浓度成正比。与待测组分浓度成正比。11和和22分别表示待测组分在分别表示待测组分在1 1和和2 2处的摩尔吸光系数。处的摩尔吸光系数。第六页，本课件共有12页关键问题关键问题:测量波长测量波长2 2和参比波长和参比波长1 1的选择与组合的选择与组合 以两组分以两组分x x和和y y的双波长法测定为例：的双波长法测定为例：设：设：x x为待测组分，为待测组分，y y为干扰组分，二者的吸光度差分别为为干扰

6、组分，二者的吸光度差分别为:Ax和和Ay，则该体系的总吸光度差，则该体系的总吸光度差Ax+y为：为：Ax+y=A x+A y 如何选择波长如何选择波长1、2有一定的要求。有一定的要求。第七页，本课件共有12页选择波长组合选择波长组合1 1 、2 2的基本要求是：的基本要求是：选定的波长选定的波长1 1和和2 2处干扰组分应具有相同吸光度，处干扰组分应具有相同吸光度，即：即：Ay=y=A y y22 A y y11=0=0故：故：Ax+y=x+y=A x=(x=(x x22x x11)bcbcx x此时：测得的吸光度差此时：测得的吸光度差A只与待测组分只与待测组分x x的浓度呈线性关系，而的浓度

7、呈线性关系，而与干扰组分与干扰组分y y无关。若无关。若x x为干扰组分，则也可用同样的方法测定为干扰组分，则也可用同样的方法测定y y组组分。分。可采用作图法选择符合可采用作图法选择符合上述两个条件的波长组合。上述两个条件的波长组合。在选定的两个波长在选定的两个波长1 1和和2 2处待测组分的吸光度应具有足处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。够大的差值。第八页，本课件共有12页四、导数分光光度法四、导数分光光度法 导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示景干扰、加强光谱的

8、精细结构以及复杂光谱的辨析等方面，显示了很大的优越性。了很大的优越性。利用吸光度利用吸光度(或透光度或透光度)对波长的导数曲线来进行分析：对波长的导数曲线来进行分析：0 0 e e-bcbc假定入射光强度假定入射光强度0 0 在整个波长范围内保持恒定：在整个波长范围内保持恒定：d dI I 0 0/d/d0 0则则：d dI I/d/d0 0 bcbc e e-bc-bc d d/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 第九页，本课件共有12页导数分光光度法导数分光光度法 d dI I/d/d 0 0 bcbc d d/d/d 一阶导数信号与试样浓度呈一阶导数信号与试样浓度呈线性关系；线性关

9、系；测定灵敏度依赖于摩尔吸光系测定灵敏度依赖于摩尔吸光系数对波长的变化率数对波长的变化率d d/d/d。吸收曲。吸收曲线的拐点处线的拐点处d d/d/d最大，故其灵敏最大，故其灵敏度最高度最高(见图）。见图）。同理可以导出其二阶和三阶导数同理可以导出其二阶和三阶导数光谱（略）光谱（略）第十页，本课件共有12页请选择内容：请选择内容：第一节第一节 基本原理基本原理第二节第二节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计第三节第三节 显色与测量条件的选择显色与测量条件的选择第四节第四节 分光光度测定方法分光光度测定方法第五节第五节 有机合物紫外光谱解析有机合物紫外光谱解析结束结束第十一页，本课件共有12页感谢大家观看12/10/2022第十二页，本课件共有12页