体外受精和早期胚胎培养精选课件.ppt
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1、关于体外受精和早期胚胎培养第一页,本课件共有71页一、试管动物技术一、试管动物技术一、试管动物技术一、试管动物技术 是指通过人是指通过人工操作使工操作使卵子卵子和和精子精子在体外条件在体外条件下成熟和受精,下成熟和受精,并通过培养发育并通过培养发育成早期胚胎后,成早期胚胎后,再经再经移植移植产生后产生后代的技术。代的技术。第二页,本课件共有71页一、试管动物技术一、试管动物技术1.1.概念概念:指通过指通过人工操作人工操作使卵子和精子在使卵子和精子在体外条件体外条件下下成熟和受精成熟和受精,并通过培养发育为并通过培养发育为早期胚胎早期胚胎后后,再再经移植产生后代的技术。经移植产生后代的技术。2
2、.2.对象:动物配子或早期胚胎。对象:动物配子或早期胚胎。3.3.应用的技术:体外受精、早期胚胎的培养和胚应用的技术:体外受精、早期胚胎的培养和胚胎移植。胎移植。4.4.意义:实现优良种畜的快速大量的繁殖。意义:实现优良种畜的快速大量的繁殖。第三页,本课件共有71页二、体外受精二、体外受精概念:指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环概念:指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术;境中完成受精过程的技术;包括包括卵母细胞的采集卵母细胞的采集精子的获能精子的获能获能精子和卵细胞的受精。获能精子和卵细胞的受精。第四页,本课件共有71页卵母细胞的采集和培养卵母细胞的采集和培养:
3、1.1.采集方法:采集方法:小型动物如鼠、兔,以及家畜猪、羊等常采用小型动物如鼠、兔,以及家畜猪、羊等常采用超数排卵法超数排卵法,使其排出更多的卵子,然后从输卵,使其排出更多的卵子,然后从输卵管中冲取管中冲取大型动物如牛:大型动物如牛:从已屠宰母畜卵巢中采集卵从已屠宰母畜卵巢中采集卵母细胞母细胞从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞(超从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞(超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等。声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等。第五页,本课件共有71页2.2.采集后培养方法采集后培养方法:从输卵管中冲取的卵子可直接与获能的精子在体外从输卵管中冲取的卵子可直接与获能的精子在体外受精受精;从卵巢中采取的卵
4、母细胞需要在体外人工培养从卵巢中采取的卵母细胞需要在体外人工培养成熟后才能与获能精子受精成熟后才能与获能精子受精.精子的采集和获能精子的采集和获能1.1.采集方法采集方法假阴道法假阴道法:适用于大型家畜或动物适用于大型家畜或动物手握法手握法:适用于体型较小适用于体型较小,易于控制的动物如猪、易于控制的动物如猪、犬犬电刺激法:适用于野生或经济动物。电刺激法:适用于野生或经济动物。第六页,本课件共有71页2.2.获能处理:获能处理:培养法培养法:即将取自附睾的精子即将取自附睾的精子,放入人工配置的放入人工配置的获能液中获能液中,培养一段时间后培养一段时间后,精子即可获能。精子即可获能。适用于:啮齿
5、动物、家兔和猪等适用于:啮齿动物、家兔和猪等化学诱导法:适用于牛、羊等家畜化学诱导法:适用于牛、羊等家畜即将精子放在一定浓度的肝素或即将精子放在一定浓度的肝素或GaGa2+2+载体载体A23187A23187溶液溶液中,用化学药物诱导精子获能。中,用化学药物诱导精子获能。3.3.受精:获能的精子和培养成熟的卵子,在获能溶受精:获能的精子和培养成熟的卵子,在获能溶液和专用的受精溶液中完成受精过程。液和专用的受精溶液中完成受精过程。第七页,本课件共有71页 在在获能溶液获能溶液或或专用的受精溶专用的受精溶液液中完成受精中完成受精过程过程。体外受精体外受精第八页,本课件共有71页概括受精过程概括受精
6、过程:卵母细胞卵母细胞MM期期精子获能精子获能体外受精体外受精受精卵受精卵第九页,本课件共有71页三、胚胎的早期培养:三、胚胎的早期培养:1.1.培养液成分:(两盐、两素、两酸、血清)培养液成分:(两盐、两素、两酸、血清)水、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核水、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清苷酸、血清培养液作用:用于受精卵的继续培养,以检查受精培养液作用:用于受精卵的继续培养,以检查受精情况和受精卵的发育能力。情况和受精卵的发育能力。3.3.胚胎去向胚胎去向 向受体移植向受体移植冷冻保存冷冻保存注:牛、羊一般要培养到桑椹胚或囊胚阶段才进行移植;注:牛、羊一般要培养到
7、桑椹胚或囊胚阶段才进行移植;小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植,人可在小鼠、家兔等实验动物可在更早的阶段移植,人可在8-8-1616个细胞阶段移植。个细胞阶段移植。为了提高胚胎发育率和妊娠率,为了提高胚胎发育率和妊娠率,实验中通常用囊胚阶段的胚胎。实验中通常用囊胚阶段的胚胎。第十页,本课件共有71页目前由于无法进行全体外胚胎培养,目前由于无法进行全体外胚胎培养,胚胎移植胚胎移植成为胚胎工程中获得后代的唯一方法。成为胚胎工程中获得后代的唯一方法。(P74)胚胎工程中通过胚胎工程中通过 、和和 等技等技术获得的胚胎,都必须术获得的胚胎,都必须 才能获得后才能获得后代。因此,代。因此,技术是胚胎
8、工程其他技术的技术是胚胎工程其他技术的最后一道最后一道“工序工序”。转基因转基因核移植核移植体外受精体外受精移植给母体移植给母体胚胎移植胚胎移植第十一页,本课件共有71页四、胚胎移植四、胚胎移植1.1.概念:概念:指将雌性动物的指将雌性动物的早期胚胎早期胚胎,或者通过体外受精,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的雌性动物的体内,使之继续发育为状态相同的雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术新个体的技术2.2.理解理解胚胎来源:胚胎来源:雌性动物体内的早期胚胎雌性动物体内的早期胚胎通过体外受精和早期胚胎的培养获得通过体外受
9、精和早期胚胎的培养获得通过哺乳动物体细胞核移植及培养获得通过哺乳动物体细胞核移植及培养获得通过转基因技术获得的胚胎通过转基因技术获得的胚胎第十二页,本课件共有71页对受体的要求:对受体的要求:同一物种的雌性动物同一物种的雌性动物与供体处于相同的生理状态与供体处于相同的生理状态实质:生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁实质:生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共同繁殖后代的过程。殖后代的过程。地位:是胚胎工程的最后一道工序。地位:是胚胎工程的最后一道工序。(供体:(供体:提供胚胎的个体;提供胚胎的个体;受体:受体:接受胚胎的个接受胚胎的个体;体;受体的条件:受体的条件:同种、生理状态相同同种、生理状态
10、相同)第十三页,本课件共有71页胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序供体:供体:遗传性能和生产性能遗传性能和生产性能优秀的个体;优秀的个体;受体:受体:健康和正常繁殖能力健康和正常繁殖能力的个体的个体处理:处理:同期发情同期发情具体做法:具体做法:注射相关激素。注射相关激素。同期发情技术:主要是借助外源激素剌激卵巢,使其按同期发情技术:主要是借助外源激素剌激卵巢,使其按照预定的要求发生变化,使处理母畜的照预定的要求发生变化,使处理母畜的卵巢生理机能都卵巢生理机能都处于相同阶段处于相同阶段,从而达到同期发情。,从而达到同期发情。(1)对供体、受体进行选择)对供体、受体进行选择第十四页,本课件共有
11、71页第十五页,本课件共有71页(2)采集卵母细胞)采集卵母细胞方法:方法:超数排卵超数排卵具体做法:具体做法:注射促性腺激素注射促性腺激素(3)配种或人工受精)配种或人工受精精子来源:精子来源:同种优良的雄性动物。同种优良的雄性动物。(4)胚胎的收集)胚胎的收集 在配种或输精后第在配种或输精后第7天,用特制的冲卵装天,用特制的冲卵装置,把供体母牛子宫内的置,把供体母牛子宫内的胚胎胚胎冲洗出来(冲洗出来(冲卵冲卵)。)。第十六页,本课件共有71页(5)对胚胎进行质量检查)对胚胎进行质量检查 胚胎发育到胚胎发育到桑椹胚或囊胚桑椹胚或囊胚(6)胚胎的保存或移植)胚胎的保存或移植 -196OC的液氮
12、保存的液氮保存(7)胚胎的移植)胚胎的移植方法一:手术法方法一:手术法方法二:非手术法方法二:非手术法(8)对受体母牛进行是否妊娠的检查)对受体母牛进行是否妊娠的检查(9)受体母牛产下胚胎移植的犊牛)受体母牛产下胚胎移植的犊牛第十七页,本课件共有71页选择选择供体母牛供体母牛受体母牛受体母牛同期发情处理同期发情处理超数排卵超数排卵供体公牛供体公牛配种配种冲卵冲卵质量检查、培养质量检查、培养胚胎移植胚胎移植妊娠检查妊娠检查分娩(胚胎移植的犊牛)分娩(胚胎移植的犊牛)胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序同期发情技术:同期发情技术:主要是借助外主要是借助外源激素剌激卵源激素剌激卵巢,使其按照巢,使其
13、按照预定的要求发预定的要求发生变化,使处生变化,使处理母畜的卵巢理母畜的卵巢生理机能都处生理机能都处于相同阶段,于相同阶段,从而达到同期从而达到同期发情。发情。第十八页,本课件共有71页3.3.胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序第十九页,本课件共有71页4.4.胚胎移植的生理学基础胚胎移植的生理学基础同种动物排卵后,不管是否妊娠,一段时间内供同种动物排卵后,不管是否妊娠,一段时间内供受体生殖器官的生理变化时相同的受体生殖器官的生理变化时相同的为移入的胚胎提供了相同的生理环境;为移入的胚胎提供了相同的生理环境;早期胚胎处于游离状态早期胚胎处于游离状态为胚胎的收集提供了可能;为胚胎的收集提供了可
14、能;受体对移入子宫的胚胎不发生免疫排斥受体对移入子宫的胚胎不发生免疫排斥是胚胎存活的条件;是胚胎存活的条件;供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但其遗传物质不受影响。织联系,但其遗传物质不受影响。第二十页,本课件共有71页供体和受体共同繁殖后代供体和受体共同繁殖后代有什么好处?有什么好处?可以充分发挥雌性优良个体的繁殖能力可以充分发挥雌性优良个体的繁殖能力供体的主要职能:供体的主要职能:产生具有优良遗传特性的胚胎,大大缩短了供产生具有优良遗传特性的胚胎,大大缩短了供体本身的繁殖周期体本身的繁殖周期受体的职能:受体的职能:担任繁重而漫长的妊娠和育仔
15、的任务担任繁重而漫长的妊娠和育仔的任务受体的条件:受体的条件:健康的体质及正常的繁殖能力健康的体质及正常的繁殖能力同种的生理状态相同的其他雌性动物同种的生理状态相同的其他雌性动物第二十一页,本课件共有71页准备移植的胚胎,移植到任何一头动物子宫准备移植的胚胎,移植到任何一头动物子宫内都能发育吗内都能发育吗?胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受体胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受体之间进行,因为同种动物之间的生理特征之间进行,因为同种动物之间的生理特征相近,进行胚胎移植易于成功。相近,进行胚胎移植易于成功。.供体和受体之间进行胚胎移植时会不会发生免供体和受体之间进行胚胎移植时会不会发生免疫排斥反应
16、疫排斥反应?同种动物之间基本上不排斥同种动物之间基本上不排斥第二十二页,本课件共有71页能否直接从母体子宫内进行胚胎收集能否直接从母体子宫内进行胚胎收集?为什么?为什么?能。因为哺乳动物的早期胚胎形成后,在一能。因为哺乳动物的早期胚胎形成后,在一定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系,定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系,而是处于游离状态。而是处于游离状态。.移植的胚胎能否保留供体双亲的特性移植的胚胎能否保留供体双亲的特性?胚胎虽然与受体有生理和组织上的联系胚胎虽然与受体有生理和组织上的联系,但遗但遗传特性不受受体的影响传特性不受受体的影响第二十三页,本课件共有71页2.2.胚胎移植成功与否
17、的条件有哪些胚胎移植成功与否的条件有哪些?(1 1)胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受)胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受体之间进行。体之间进行。(2 2)进行胚胎移植的供体和受体的生理状态)进行胚胎移植的供体和受体的生理状态要相同。要相同。1.1.胚胎移植成功的标志是什么胚胎移植成功的标志是什么?移植的胚胎在受体内能正常发育并分娩移植的胚胎在受体内能正常发育并分娩第二十四页,本课件共有71页思考与讨论思考与讨论:1、在胚胎移植操作中,怎样才能使胚胎在移、在胚胎移植操作中,怎样才能使胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致?例如,供、受体植前后所处的生理环境保持一致?例如,供、受体的发情时间要一致
18、吗?供体胚胎移入受体子宫的位的发情时间要一致吗?供体胚胎移入受体子宫的位置,应与在供体内的位置相同或相似吗?置,应与在供体内的位置相同或相似吗?答案:答案:应对供体和受体母畜进行应对供体和受体母畜进行同期发情处理同期发情处理,使,使它们的生理条件达到同步后一致,这样才能使供它们的生理条件达到同步后一致,这样才能使供体的胚胎移入受体后有相同或相似的生存条件,体的胚胎移入受体后有相同或相似的生存条件,这是胚胎移植成功与否的关键。因此,必须做到这是胚胎移植成功与否的关键。因此,必须做到供、受体母畜的发情时间一致。同时还要做到移供、受体母畜的发情时间一致。同时还要做到移入受体子宫胚胎的位置应该与其在供
19、体内的入受体子宫胚胎的位置应该与其在供体内的位置位置相同或相似相同或相似,移入胚胎一侧的受体子宫对应的卵,移入胚胎一侧的受体子宫对应的卵巢必须有黄体存在。巢必须有黄体存在。第二十五页,本课件共有71页2、胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环、胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。你认为这样的概境条件下空间位置的转移。你认为这样的概括正确吗?括正确吗?正确。正确。第二十六页,本课件共有71页5.5.胚胎移植的意义:胚胎移植的意义:充分发挥了雌性优良个体的繁殖潜力充分发挥了雌性优良个体的繁殖潜力(缩短了供体本身的繁殖周期,增加了供体一生繁殖后代的数量)加速育种工作和品质改良加
20、速育种工作和品质改良一胎多产一胎多产保存品种资源和濒危物种保存品种资源和濒危物种大量节省购买种畜的费用大量节省购买种畜的费用第二十七页,本课件共有71页胚胎分割胚胎分割1.1.概念概念:指采用指采用机械方法机械方法将早期胚胎切割成将早期胚胎切割成2等等份、份、4等份或等份或8等份等,经移植获得同卵双胎等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。或多胎的技术。胚胎分割胚胎分割优势优势:可成倍增加胚胎数量,可以快速繁殖良种畜可成倍增加胚胎数量,可以快速繁殖良种畜。第二十八页,本课件共有71页2.特点:特点:来自同一胚胎的后代具有来自同一胚胎的后代具有相同的相同的遗传遗传物质(因此胚胎分割可以看做动物物
21、质(因此胚胎分割可以看做动物无性繁无性繁殖或克隆殖或克隆的方法之一)的方法之一)3、理论基础、理论基础 动物胚胎细胞的动物胚胎细胞的全能性全能性。物质基础:物质基础:每个细胞核具有相同的遗传物质每个细胞核具有相同的遗传物质4.胚胎分割的时期为:胚胎分割的时期为:囊胚或桑椹胚囊胚或桑椹胚。第二十九页,本课件共有71页4、选择的胚胎:、选择的胚胎:发育良好的发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚。形态正常的桑椹胚或囊胚。5、使用的主要仪器:、使用的主要仪器:实体显微镜实体显微镜和和显微操作仪显微操作仪。6、具体操作、具体操作 用用分割针分割针或或分割刀片分割刀片将胚胎切开,吸出将胚胎切开,吸出其中的半
22、个胚胎,注入预先准备好的空透其中的半个胚胎,注入预先准备好的空透明带中,或直接将裸半胚移植给受体。明带中,或直接将裸半胚移植给受体。第三十页,本课件共有71页7 7、操作注意事项、操作注意事项:对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要将对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要将内细胞团均等分割内细胞团均等分割。目的:有利于分割后的胚胎的恢复和进一目的:有利于分割后的胚胎的恢复和进一步发育。步发育。原因:内细胞团一般到囊胚阶段才出现,它原因:内细胞团一般到囊胚阶段才出现,它是发育为胚胎本身的基础细胞,其他细胞为滋养是发育为胚胎本身的基础细胞,其他细胞为滋养细胞,只为胚胎和胎儿发育提供营养。若分割时细胞,只为胚胎和胎
23、儿发育提供营养。若分割时不能将内细胞团均等分割,会出现含内细胞团多不能将内细胞团均等分割,会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强,少的部分发育受阻或的部分正常发育的能力强,少的部分发育受阻或发育不良,甚至不能发育等问题。发育不良,甚至不能发育等问题。第三十一页,本课件共有71页 胚胎分割的份数越多,操作的难度会越胚胎分割的份数越多,操作的难度会越大,移植的成功率也越低大,移植的成功率也越低。早期胚胎的体积很小,只有在显微镜早期胚胎的体积很小,只有在显微镜下才能看到;再者,细胞数目是有限的。下才能看到;再者,细胞数目是有限的。分割的份数越多,不但难以做到均等分割,分割的份数越多,不但难以做到均
24、等分割,每一份的细胞数会越少,而且作为囊胚期每一份的细胞数会越少,而且作为囊胚期的胚胎内细胞团细胞所受的影响会更大。的胚胎内细胞团细胞所受的影响会更大。因此,分割的份数越多,技术的难度会越因此,分割的份数越多,技术的难度会越大,移植后的恢复和发育的难度会越大,大,移植后的恢复和发育的难度会越大,移植成功率自然会降低。移植成功率自然会降低。第三十二页,本课件共有71页8、胚胎分割技术的缺陷、胚胎分割技术的缺陷(1)刚出生动物的体重偏低,毛色)刚出生动物的体重偏低,毛色和斑纹还存在差异;和斑纹还存在差异;(2)采用胚胎分割技术产生同卵多)采用胚胎分割技术产生同卵多胎的可能性是有限的。胎的可能性是有
25、限的。第三十三页,本课件共有71页胚胎干细胞胚胎干细胞2.2.特点特点:1)1)形态形态:体积小体积小.细胞核大细胞核大,核仁明显核仁明显2)2)功能功能:具有发育的具有发育的全能性全能性,可分化为成年动物体内,可分化为成年动物体内任何一种组织细胞任何一种组织细胞3 3)在)在体外体外培养的条件下,培养的条件下,ESES细胞可以细胞可以增殖而不发生增殖而不发生分化分化。对它可以进行冷冻保存,也可以进行遗传改。对它可以进行冷冻保存,也可以进行遗传改造。造。1.1.概念概念:简称简称ESES或或EKEK细胞细胞,是由是由早期胚胎或原始性腺早期胚胎或原始性腺中中分离出来的一类细胞。分离出来的一类细胞
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