免疫细胞的分离及其表面标志检测技术精选课件.ppt

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1、关于免疫细胞的分离及其表面标志检测技术第一页，本课件共有40页第一节 免疫细胞的分离 一、外周血单个核细胞分离 二、淋巴细胞的分离 三、T细胞和B细胞的分离 四、T细胞亚群的分离第二页，本课件共有40页第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 一、一、细胞表面标志及亚群细胞表面标志及亚群 二、二、B B细胞表面标志细胞表面标志 三、三、NKNK细胞表面标志细胞表面标志第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞第四节第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测及应用 一、一、免疫细胞表面标志的检测方法免疫细胞表面标志的检测方法 二、二、淋巴细胞表面标志检测的临床意

2、义淋巴细胞表面标志检测的临床意义思考题小结 第三页，本课件共有40页第四页，本课件共有40页第一节第一节 免疫细胞的分离免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离淋巴细胞的分离 T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离 T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离第五页，本课件共有40页一、外周血单个核细胞分离一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。）。Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是分离液法主要用

3、于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。一种单次差速密度梯度离心的分离法。第六页，本课件共有40页细胞分离基本原理细胞分离基本原理不同细胞密度不同不同细胞密度不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面生物学特性不同不同细胞表面分化抗原不同不同细胞表面分化抗原不同第七页，本课件共有40页不同细胞密度不同不同细胞密度不同人的红细胞密度为人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为1.075-1.090 第八页，本课件共有40页不同细胞密度不同第九页，本课件共有40页用1.07

4、70.001的分层液可将细胞分离 第十页，本课件共有40页密度梯度离心(Ficoll)离心第十一页，本课件共有40页二二、淋巴细胞分离、淋巴细胞分离贴壁粘附法贴壁粘附法 吸附柱过滤法吸附柱过滤法 磁铁吸引法磁铁吸引法 Percoll Percoll 分离液法分离液法 （连续密度梯度离心）（连续密度梯度离心）（去单核细胞）（去单核细胞）第十二页，本课件共有40页E E花环沉降法花环沉降法 尼龙毛柱分离法尼龙毛柱分离法 三、三、T T细胞和细胞和B B细胞的分离细胞的分离第十三页，本课件共有40页四、四、T T细胞亚群的分离细胞亚群的分离 亲和板结合分离法亲和板结合分离法 磁性微球分离法磁性微球分

5、离法 荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法 第十四页，本课件共有40页荧光激活细胞分离仪分离法荧光激活细胞分离仪分离法第十五页，本课件共有40页第十六页，本课件共有40页磁珠大小可以选择磁珠大小可以选择第十七页，本课件共有40页大小免疫磁珠分离细胞的特点比较大小免疫磁珠分离细胞的特点比较 比较项目比较项目大磁珠大磁珠小磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞的影响对对细细胞胞造造成成机机械械压压力力，影影响响其其生生物物学学活活性性，不不利利于于分分离离后培养。后培养。对对细细胞胞温温和和，不不影影响响分分离离细细胞的后续培养。胞的后续培养。对流式细胞仪的影响对流式细胞仪的影响阻阻塞塞流流式式

6、细细胞胞仪仪的的喷喷嘴嘴，影影响散射光。响散射光。可可直直接接上上流流式式细细胞胞仪仪检检测测，不影响散射光。不影响散射光。分离条件要求分离条件要求技技术术简简单单，分分离离可可在在试试管管中中完成。完成。需要很强的磁场来分离细胞。需要很强的磁场来分离细胞。收率收率得率高。得率高。得率不高。得率不高。纯度纯度纯度低。纯度低。纯度高。纯度高。分离时间分离时间分离速度快。分离速度快。分离速度慢。分离速度慢。分离成本分离成本成本低。成本低。需需要要很很强强的的磁磁场场来来分分离离细细胞胞，需需要要一一次次性性的的分分离离柱柱，不不能能在普通试管进行。在普通试管进行。第十八页，本课件共有40页第十九页

7、，本课件共有40页第二十页，本课件共有40页免疫磁珠法细胞分选过程免疫磁珠法细胞分选过程第二十一页，本课件共有40页免免疫疫磁磁珠珠细细胞胞分分选选装装置置第二十二页，本课件共有40页全自动细胞分选系统全自动细胞分选系统第二十三页，本课件共有40页流式细胞分析仪流式细胞分析仪第二十四页，本课件共有40页第二节第二节 淋巴细胞标志及亚群分类淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiationdifferentiation，CDCD）。）。第二十五页，本课件共有

8、40页细胞表面分化抗原（细胞表面分化抗原（CDCD抗原抗原）适用于适用于T T、B B细胞的分离细胞的分离已知已知CDCD抗原细胞亚群的分离抗原细胞亚群的分离未知未知CDCD抗原细胞亚群的分离抗原细胞亚群的分离（阴性分选）（阴性分选）第二十六页，本课件共有40页一、一、T T细胞表面标志及其亚群细胞表面标志及其亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性辅助性T细胞细胞（helpTcell,Th）CD3+CD4-CD8+细胞毒性细胞毒性T细胞细胞（cytotoxicTcell,TcorCTL）CD4+CD25+调节性调节性T细胞细胞（regulatoryTcell,TrorTreg）第二十七页，本课件

9、共有40页二、二、B B细胞表面标志细胞表面标志 SmIgSmIg、FcFc受体、补体受体、受体、补体受体、EBEB病毒受体，部分病毒受体，部分CDCD分分子是子是B B细胞的重要表面标志，其中以细胞的重要表面标志，其中以SmIgSmIg为为B B细胞所细胞所特有，是鉴定特有，是鉴定B B细胞可靠的指标。细胞可靠的指标。CD19/CD5CD19/CD5分子：可将分子：可将B B细胞区分为细胞区分为B1B1细胞和细胞和B2B2细胞，细胞，B1B1细胞为细胞为CD19CD19和和CD5CD5双阳性，而双阳性，而B2B2细胞仅为细胞仅为CD19CD19阳性，阳性，B2B2细胞为通常所指的细胞为通常所

10、指的B B细胞细胞。第二十八页，本课件共有40页三、三、NKNK细胞表面标志细胞表面标志 人类人类NK细胞表面标志主要以细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为淋巴细胞认定为NK细细胞。胞。第二十九页，本课件共有40页T细胞及NK细胞第三十页，本课件共有40页第三节第三节 其他的免疫细胞其他的免疫细胞抗原提呈类细胞表面标志抗原提呈类细胞表面标志第三十一页，本课件共有40页第四节第四节 免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测及应用免疫细胞表面标志的检测方法免疫细胞表面标志的检测方法淋巴细胞表面标志检测的临床意义淋巴

11、细胞表面标志检测的临床意义第三十二页，本课件共有40页一、免疫细胞表面标志的检测一、免疫细胞表面标志的检测抗体致敏细胞花环法抗体致敏细胞花环法 免疫细胞化学法免疫细胞化学法 免疫荧光法免疫荧光法 流式细胞分析法流式细胞分析法 第三十三页，本课件共有40页二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义二、淋巴细胞表面标志检测的临床意义 淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能淋巴细胞表面标志检测是评价免疫功能的重要指标。的重要指标。对对CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T细胞的测定，有助于免疫缺细胞的测定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反应的监测。的监测。第三

12、十四页，本课件共有40页临床常见疾病中的临床常见疾病中的T淋巴细胞的变化淋巴细胞的变化第三十五页，本课件共有40页思考题思考题1.1.免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离纯化？免疫细胞都包括哪些细胞？为什么要将其分离纯化？2.2.淋淋巴巴细细胞胞有有哪哪几几类类细细胞胞？能能用用形形态态学学的的方方法法加加以以区别吗？区别吗？3.3.将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？将细胞分离的原理有哪些？各有什么特点？4.4.形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？形态学相同的一类细胞为什么还要分亚群？5.T5.T细胞和细胞和B B细胞进一步区分亚群的依据是什么？细胞进一步区分亚群的依据是什么？第三十

13、六页，本课件共有40页6.6.什么是细胞表面标志？其作用是什么？什么是细胞表面标志？其作用是什么？7.7.细胞表面标志的检测方法有哪些？细胞表面标志的检测方法有哪些？8.8.利利用用细细胞胞表表面面标标志志（CDCD抗抗原原）分分离离细细胞胞的的方方法法有有哪哪几种？几种？9.T9.T细细胞胞、B B细细胞胞、NKNK细细胞胞、单单核核细细胞胞的的主主要要生生物物标标志志是什么？是什么？10.10.淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么？淋巴细胞表面标志检测的临床意义是什么？第三十七页，本课件共有40页小小 结结淋淋巴巴细细胞胞并并不不是是功功能能单单一一的的群群体体，但但其其在在光光学学显显微

14、微镜镜下下的的形形态态基基本本是是一一样样的的，因因此此要要对对其其进进行行进进一一步步的的分分类类和和观观察察就就不不能能采采用用形形态态学学的的方方法法，而而要要依依靠靠对对其其表表面面标标志志的的检检测测。常常用用于于鉴鉴定定和和检检测测计计数数淋淋巴巴细细胞胞的表面标志是的表面标志是CDCD抗原。抗原。第三十八页，本课件共有40页进进一一步步区区分分淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群可可使使某某一一类类淋淋巴巴细细胞胞的的功功能能趋趋向向一一致致和和单单一一。但但目目前前看看来来，还还很很少少有有只只通通过过一一个个CDCD抗抗原原就就能能将将某某一一类类淋淋巴巴细细胞胞亚亚群群指指示示出出来来的的CDCD抗抗原原，CDCD抗抗原原指指示示出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。出来的淋巴细胞亚群多数都是相对特异。第三十九页，本课件共有40页感谢大家观看12/10/2022第四十页，本课件共有40页