造血干细胞移植精选课件.ppt

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1、关于造血干细胞移植第一页，本课件共有68页造血干细胞移植造血干细胞移植(SCT)按其干细胞的来按其干细胞的来源源,分为：分为：（1）自体造血干细胞移植）自体造血干细胞移植(ASCT)（2）同种异基因造血干细胞移植）同种异基因造血干细胞移植(Allo-SCT)（3）异种造血干细胞移植）异种造血干细胞移植(SCT)。第二页，本课件共有68页根据干细胞采集的部位又可分为：根据干细胞采集的部位又可分为：（1）骨髓移植）骨髓移植(BMT)（2）外周血造血干细胞移植）外周血造血干细胞移植(PBSCT)（3）脐血造血干细胞移植）脐血造血干细胞移植(NCSCT)（4）胎肝造血干细胞移植）胎肝造血干细胞移植(N

2、LSCT)第三页，本课件共有68页 骨骨 髓髓 移移 植植第四页，本课件共有68页 骨髓移植骨髓移植(简称简称BMT)BMT)是指对病是指对病人实施免疫抑制处理后人实施免疫抑制处理后,使机体失使机体失去排斥异体组织的能力去排斥异体组织的能力,通过移植通过移植骨髓中的多能造血干细胞给病人骨髓中的多能造血干细胞给病人,以重建造血和免疫功能以重建造血和免疫功能,从而达到治从而达到治愈某些疾病的一种方法。愈某些疾病的一种方法。第五页，本课件共有68页一、骨髓移植种类一、骨髓移植种类 根据骨髓的不同来源根据骨髓的不同来源,可将骨髓移可将骨髓移植分为：植分为：自体骨髓移植自体骨髓移植(ABMT)(ABMT

3、)同种异基因骨髓移植同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)(Allo-BMT)同种同基因骨髓移植同种同基因骨髓移植(SBMT)(SBMT)异种骨髓移植异种骨髓移植第六页，本课件共有68页(一一)自体骨髓移植自体骨髓移植(ABMT)(ABMT)取患者自身骨髓进行保存。取患者自身骨髓进行保存。在其相应时间内在其相应时间内,用大剂量的放疗和用大剂量的放疗和/或化疗或化疗,最大限度地杀伤患者体内的肿瘤细最大限度地杀伤患者体内的肿瘤细胞胞,然后再输回自体骨髓然后再输回自体骨髓,恢复患者造血功恢复患者造血功能。能。此种移植不会出现排斥和移植物抗宿主此种移植不会出现排斥和移植物抗宿主病病(GVHD)(GVH

4、D)等严重合并症等严重合并症,骨髓移植容易植活，骨髓移植容易植活，但极易复发。但极易复发。第七页，本课件共有68页ABMTABMT时必须注意以下几个方面时必须注意以下几个方面:肿瘤必须未累及骨髓肿瘤必须未累及骨髓,移植前骨盆未受过射线照移植前骨盆未受过射线照射。射。年龄不宜过大。年龄不宜过大。肿瘤必须对放、化疗敏感。肿瘤必须对放、化疗敏感。自体骨髓移植有利于保护骨髓自体骨髓移植有利于保护骨髓,免受放、化疗影免受放、化疗影响。响。不能防止放、化疗对心、肝、肾等脏器的毒性损害。不能防止放、化疗对心、肝、肾等脏器的毒性损害。第八页，本课件共有68页自体骨髓成功的关键是：自体骨髓成功的关键是：保存造血

5、干细胞的活力和基本功能。骨髓保存造血干细胞的活力和基本功能。骨髓采集后如置于常温下采集后如置于常温下,骨髓在培养液或保存骨髓在培养液或保存液内最长不能超过液内最长不能超过7272小时。小时。因此大剂量放、化疗须在短时间内完成因此大剂量放、化疗须在短时间内完成,或者有时难以忍受。或者有时难以忍受。在在-196-196长期保存。长期保存。第九页，本课件共有68页对缓解期肿瘤对缓解期肿瘤(尤其是血液系统的白血尤其是血液系统的白血病和多发性骨髓瘤病和多发性骨髓瘤)进行进行BMT,BMT,采集的骨髓最采集的骨髓最好能行体外净化好能行体外净化,去除残存的肿瘤细胞去除残存的肿瘤细胞,否否则移植后复发率极高。

6、则移植后复发率极高。移植后不出现移植后不出现GVHD,GVHD,就不会出现抗肿瘤效就不会出现抗肿瘤效应应,故复发率极高。故复发率极高。第十页，本课件共有68页（二）同种同基因骨髓移植（二）同种同基因骨髓移植(SBMT)(SBMT)在人类仅限于同卵双胎间的移植在人类仅限于同卵双胎间的移植,这种这种机会极少。因无供受者间免疫方面的障碍机会极少。因无供受者间免疫方面的障碍,无无需免疫抑制处理需免疫抑制处理,也不会出现排斥和也不会出现排斥和GVHD,GVHD,因因而临床效果较好。而临床效果较好。倘若用于治疗白血病、多发性骨髓瘤等血倘若用于治疗白血病、多发性骨髓瘤等血液系统恶性肿瘤液系统恶性肿瘤,移植后

7、复发率比移植后复发率比Allo-BMTAllo-BMT要要高高,这可能与缺乏移植物抗肿瘤效应作用有这可能与缺乏移植物抗肿瘤效应作用有关。关。第十一页，本课件共有68页（三）同种异基因骨髓移植（三）同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)(Allo-BMT)是指供一受者之间主要组织相容性复合物是指供一受者之间主要组织相容性复合物(简简称称MHC)MHC)相合的同种两个个体间的移植。相合的同种两个个体间的移植。目前开展的是基因型相同或基本相同的兄弟目前开展的是基因型相同或基本相同的兄弟姐妹间的移植姐妹间的移植,少数为亲子间的移植少数为亲子间的移植,也有人类白也有人类白细胞抗原细胞抗原(简称简称HLA

8、)HLA)表型相同的无关人员之间移植，表型相同的无关人员之间移植，此种移植机会极少。此种移植机会极少。易并发易并发GVHD,GVHD,但其优点是移植后疗效比但其优点是移植后疗效比ABMTABMT和和SBMTSBMT佳。佳。第十二页，本课件共有68页二、供受者选择二、供受者选择:（一）受者（一）受者(患者患者)选择应注意选择应注意:(1)(1)年龄控制年龄控制2 25050周岁。周岁。(2)(2)选择合适的移植时机选择合适的移植时机,如：急淋高危组如：急淋高危组和急非淋和急非淋CRCR1 1后后,低危组急淋则在低危组急淋则在CRCR2 2后；慢性后；慢性粒细胞性白血病在慢性期的早期粒细胞性白血病

9、在慢性期的早期(发病一年发病一年以内以内)，而重型再生障碍性贫血应尽早移植。，而重型再生障碍性贫血应尽早移植。第十三页，本课件共有68页(3)(3)无急慢性感染病灶。无急慢性感染病灶。(4)(4)左心室射血指数左心室射血指数5.05.0、用力肺活量、用力肺活量(forced vital capatity)60%(forced vital capatity)60%、一氧化、一氧化碳弥散能力碳弥散能力(DLCO)50%(DLCO)50%。(5)(5)血肌酐血肌酐110mol/L(2mg/dl)110mol/L(2mg/dl)和总胆红素和总胆红素18mol/L(18mol/L(2mg/dl2mg/d

10、l）。）。第十四页，本课件共有68页（二）供者选择（二）供者选择:首选首选HLAHLA配型相合的同胞兄弟姐配型相合的同胞兄弟姐妹为供者妹为供者,如有两个以上供者应选择如有两个以上供者应选择与患者与患者ABOABO血型或性别相同者。血型或性别相同者。也可选择单倍型相同的家庭成员也可选择单倍型相同的家庭成员作为供者。作为供者。第十五页，本课件共有68页 选用选用HLAHLA表型相同或相似的无关人表型相同或相似的无关人员作供者员作供者,由于由于HLAHLA的高度多态性的高度多态性,使其概率甚小。使其概率甚小。第十六页，本课件共有68页三、同种异基因骨髓移植三、同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)(

11、Allo-BMT)和同种和同种同基因骨髓移植同基因骨髓移植(SBMT)(SBMT)（一）移植步骤（一）移植步骤:1.1.供受者红细胞血型检测及供受者红细胞血型检测及HLAHLA配型配型,应用应用PCRPCR进行进行HLA-AHLA-A、B B、C C、DRDR抗原分型抗原分型,且且HLAHLA相同供受者进行混合淋巴细胞培养和相同供受者进行混合淋巴细胞培养和淋巴细胞毒交叉试验。淋巴细胞毒交叉试验。第十七页，本课件共有68页2.2.供者准备供者准备:详细询问供髓者的病史和全面体详细询问供髓者的病史和全面体检，对血、骨髓及心、肝、肾、免疫检，对血、骨髓及心、肝、肾、免疫功能等进行检查。骨髓检查包括常

12、规功能等进行检查。骨髓检查包括常规分类、粒分类、粒-单集落形成测定单集落形成测定(GM-CFU)(GM-CFU)、染色体分析染色体分析,此外还应检查血清巨细胞病此外还应检查血清巨细胞病毒等病毒抗体滴度和华康氏反应。毒等病毒抗体滴度和华康氏反应。第十八页，本课件共有68页 如为同性供者应查红细胞同如为同性供者应查红细胞同工酶和血型工酶和血型(包括亚型包括亚型),),以此作为以此作为移植后骨髓是否植入的依据。移植后骨髓是否植入的依据。另外，供髓前另外，供髓前4 4周开始采用自周开始采用自体血保存法储备自体血体血保存法储备自体血600600800800毫毫升。升。第十九页，本课件共有68页3.3.受

13、者准备受者准备预处理前应仔细体检；预处理前应仔细体检；进行痰、尿、粪便、皮肤、耳、鼻、咽拭子进行痰、尿、粪便、皮肤、耳、鼻、咽拭子细菌、真菌培养；细菌、真菌培养；预处理前一周开始口服肠道抑菌剂预处理前一周开始口服肠道抑菌剂,；洗必泰液漱口洗必泰液漱口,洗必泰甘油涂鼻、外耳道洗必泰甘油涂鼻、外耳道,利利福平眼药水滴双眼等；福平眼药水滴双眼等；注意肛周清洁卫生。注意肛周清洁卫生。第二十页，本课件共有68页 实验室检查主要包括骨髓、血实验室检查主要包括骨髓、血及心、肺、肝肾功能等检查。除做与及心、肺、肝肾功能等检查。除做与供者相同的项目外供者相同的项目外,还应查肺功能、还应查肺功能、X X线线胸片、

14、如有条件者可做有关内分泌方面胸片、如有条件者可做有关内分泌方面的检查。的检查。第二十一页，本课件共有68页 入层流室当天剪指甲入层流室当天剪指甲,剃尽全身毛发剃尽全身毛发,清洁淋浴后用洗必泰液药浴清洁淋浴后用洗必泰液药浴20203030分钟分钟,着着无菌衣、帽、口罩无菌衣、帽、口罩,用无菌单包裹送入无用无菌单包裹送入无菌层流室。菌层流室。入室后保持无菌环境入室后保持无菌环境,进无菌饮食进无菌饮食,热热量、蛋白质和维生素补充要足够。量、蛋白质和维生素补充要足够。工作人员严格进行反向隔离。工作人员严格进行反向隔离。第二十二页，本课件共有68页4.4.骨髓移植前预处理骨髓移植前预处理 预处理目的是抑

15、制受体免疫系预处理目的是抑制受体免疫系统统,不使移植的供体造血干细胞被受不使移植的供体造血干细胞被受体所排斥。各疾病预处理的方案很体所排斥。各疾病预处理的方案很多。多。第二十三页，本课件共有68页(1)(1)再障和非肿瘤性疾病再障和非肿瘤性疾病:方案一方案一:单一环磷酰胺单一环磷酰胺(CTX)(CTX)静滴。静滴。方案二方案二:环磷酰胺和全身照射环磷酰胺和全身照射(CTX+TBI(CTX+TBI）。）。(2)(2)白血病白血病:方案一方案一CTX+TBI CTX+TBI 方案二方案二:CTX+:CTX+柔红霉素柔红霉素+TBI+TBI 第二十四页，本课件共有68页骨髓采集骨髓采集 在手术室内对

16、供者进行骨髓采集。在手术室内对供者进行骨髓采集。一般应用硬膜外麻醉一般应用硬膜外麻醉,采髓部位以骼后上采髓部位以骼后上棘为最佳棘为最佳,也可在骼前上棘或也可在骼前上棘或/和胸骨或和胸骨或/和棘突部位和棘突部位,儿童则需加胫骨处儿童则需加胫骨处,以多以多点和不同深度采髓点和不同深度采髓,每点采每点采101015ml15ml骨骼骨骼血血,总量总量101015ml/Kg(60015ml/Kg(6001000ml)1000ml)。第二十五页，本课件共有68页 移植骨髓所需的有核细胞数应按受移植骨髓所需的有核细胞数应按受（患）者体重和根据供体来源而定：（患）者体重和根据供体来源而定：（1 1）SBMTS

17、BMT需需3.0-5.0103.0-5.0107 7/Kg/Kg（2 2）Allo-BMTAllo-BMT需需2.0-6.0102.0-6.0108 8/Kg /Kg 当采集到当采集到400ml400ml时时,应开始回输事应开始回输事先采集的自身贮备血先采集的自身贮备血,以防休克以防休克,术后术后需补充各种造血因子。需补充各种造血因子。第二十六页，本课件共有68页（2 2）过滤）过滤 通过通过1717、1818号针头二次过滤号针头二次过滤,或或不锈钢网不锈钢网(孔径孔径0.2010.2010.307mm)0.307mm)过滤后过滤后注射至血袋或采集瓶中。一般吸取的骨注射至血袋或采集瓶中。一般吸

18、取的骨髓用生理盐水或髓用生理盐水或16401640稀释液肝素抗凝稀释液肝素抗凝,每毫升骨髓血需含肝素每毫升骨髓血需含肝素15152020单位，单位，以防骨髓血凝集。以防骨髓血凝集。第二十七页，本课件共有68页（3 3）骨髓回输）骨髓回输从受者锁骨下大静脉插管内输入。从受者锁骨下大静脉插管内输入。输入前将装有骨髓血的采血袋或采集输入前将装有骨髓血的采血袋或采集瓶倒置半小时瓶倒置半小时,使骨髓中脂肪浮于上层使骨髓中脂肪浮于上层,输输注即将结束时注即将结束时,弃去浮在上层的脂肪滴弃去浮在上层的脂肪滴,以以防发生脂肪栓塞。防发生脂肪栓塞。输毕后须应用采髓时所用肝素剂量的输毕后须应用采髓时所用肝素剂量的

19、同等剂量鱼静蛋白同等剂量鱼静蛋白(1mg(1mg鱼精蛋白中和鱼精蛋白中和100100u u肝素肝素)。第二十八页，本课件共有68页（二）（二）Allo-BMTAllo-BMT骨髓植活标准骨髓植活标准（1 1）植活的直接证据：）植活的直接证据：受者体内出现供者型的性染色体，标记型染受者体内出现供者型的性染色体，标记型染色体，色体，HLAHLA（I I、IIII、和、和IIIIII类）抗原，红细胞、类）抗原，红细胞、粒细胞和血小板抗原，粒细胞和血小板抗原，红细胞与白细胞同工酶，同种异型免疫红细胞与白细胞同工酶，同种异型免疫球蛋白以及其它基因标记等。球蛋白以及其它基因标记等。第二十九页，本课件共有6

20、8页（2 2）植活的间接证据：受者发生急、）植活的间接证据：受者发生急、慢性慢性GVHDGVHD。（3 3）骨髓重建的证据：移植后）骨髓重建的证据：移植后2 24 4周，周，受者网织红细胞、粒细胞、淋巴细胞受者网织红细胞、粒细胞、淋巴细胞和血小板迅速增高，并逐渐重建造血和血小板迅速增高，并逐渐重建造血免疫功能。免疫功能。第三十页，本课件共有68页四、自身骨髓移植四、自身骨髓移植（一）自身骨髓的采集和保存（一）自身骨髓的采集和保存 骨髓的采集在手术室内予以硬膜外麻醉骨髓的采集在手术室内予以硬膜外麻醉下进行，儿童则采用全身麻醉。穿刺部位选下进行，儿童则采用全身麻醉。穿刺部位选择在左、右前后髂上棘和

21、胸骨，儿童可选择择在左、右前后髂上棘和胸骨，儿童可选择胫骨上端等部位。胫骨上端等部位。ABMTABMT需有核细胞总数需有核细胞总数5.05.030.01030.0109 9（0.50.55.0105.0108 8/kg/kg体重），骨髓粒系祖细胞体重），骨髓粒系祖细胞（CFUCFUC C）平均）平均1.01.04.0104.0104 4/kg/kg体重。体重。第三十一页，本课件共有68页 骨髓液按等量比例与保养液混和，骨髓液按等量比例与保养液混和，经不同孔径（经不同孔径（0.2010.2010.307mm0.307mm）的不）的不锈钢滤网，滤去骨髓中脂肪颗粒和碎锈钢滤网，滤去骨髓中脂肪颗粒和碎

22、片。在混有红细胞和骨髓液中每亳升片。在混有红细胞和骨髓液中每亳升加入肝素加入肝素15-2015-20U U，44保存保存36364848小时小时后回输。也可应用后回输。也可应用1010二甲亚砜作为二甲亚砜作为骨髓冷冻保护剂，使骨髓保存于骨髓冷冻保护剂，使骨髓保存于196196的液氮中。的液氮中。第三十二页，本课件共有68页（二）骨髓净化（二）骨髓净化 目前国际上将净化方法分为两大类：目前国际上将净化方法分为两大类：即负净化也称阴性选择：将肿瘤细胞从即负净化也称阴性选择：将肿瘤细胞从移植物中清除掉；正净化也称阳性选择：移植物中清除掉；正净化也称阳性选择：将正常造血干细胞从移植物中分离纯化。将正常

23、造血干细胞从移植物中分离纯化。临床上应用方法多为负净化。但无论是临床上应用方法多为负净化。但无论是物理学、生物学或其他方法都还不够理物理学、生物学或其他方法都还不够理想。想。第三十三页，本课件共有68页（三）自身骨髓移植前预处理（三）自身骨髓移植前预处理 ABMTABMT的预处理目的是：的预处理目的是：使骨髓产使骨髓产生一定空间，使造血干细胞有植入和增生一定空间，使造血干细胞有植入和增殖的场所；殖的场所；进一步清除体内肿瘤细胞。进一步清除体内肿瘤细胞。精典的方案精典的方案CTXCTX加全身照射（加全身照射（TBITBI）或分次全身照射（或分次全身照射（FTBIFTBI）进行预处理。）进行预处理

24、。肺需要适当屏蔽。肺需要适当屏蔽。第三十四页，本课件共有68页（四）骨髓回输（四）骨髓回输：同前：同前（五）自身骨髓移植后造血功能恢（五）自身骨髓移植后造血功能恢复（植活标志）复（植活标志）ABMTABMT后外周血白细胞从无恢复到后外周血白细胞从无恢复到1.0101.0109 9/L/L平均需平均需16162121天；血小板天；血小板恢复恢复501050109 9/L/L平均需平均需14142121天，粒细天，粒细胞恢复胞恢复0.510 0.510 9 9/l/l，平均，平均2121天。天。第三十五页，本课件共有68页外周血造血干细胞移植外周血造血干细胞移植第三十六页，本课件共有68页一、外周

25、血干细移植类型一、外周血干细移植类型 外周血造血干细胞移植可分为：（外周血造血干细胞移植可分为：（1 1）自体外周血干细胞移植（）自体外周血干细胞移植（APBSCTAPBSCT）（2 2）异基因外周血造血干细胞移植）异基因外周血造血干细胞移植（Allo-PBSCT)Allo-PBSCT)。供受体选择及移植前准备同骨髓供受体选择及移植前准备同骨髓移植。移植。第三十七页，本课件共有68页二、外周血干细胞的动员与采集二、外周血干细胞的动员与采集（一）动员（一）动员 在正常生理条件下，外周血干细胞在正常生理条件下，外周血干细胞数量很少，只有骨髓造血干细胞量的数量很少，只有骨髓造血干细胞量的1 1101

26、0，因此，不能满足临床，因此，不能满足临床PBSCTPBSCT数量的需要。常用动员剂有以下几类：数量的需要。常用动员剂有以下几类：1 1重组人造血生长因子重组人造血生长因子 第三十八页，本课件共有68页2 2抗肿瘤化疗药物抗肿瘤化疗药物 （1 1）最大限度地杀灭患者体内的肿瘤细胞；）最大限度地杀灭患者体内的肿瘤细胞；（2 2）在杀伤肿瘤细胞同时，也使正常造血细）在杀伤肿瘤细胞同时，也使正常造血细胞受到损害，但由于正常造血细胞恢复时间胞受到损害，但由于正常造血细胞恢复时间比肿瘤细胞短，故当骨髓抑制解除时和正常比肿瘤细胞短，故当骨髓抑制解除时和正常造血细胞恢复之际，外周血干细胞数量反馈造血细胞恢复

27、之际，外周血干细胞数量反馈性增加达性增加达2525100100倍，从而起到了造血干细胞倍，从而起到了造血干细胞动员效果。国内常用药物有环磷酰胺；阿糖胞动员效果。国内常用药物有环磷酰胺；阿糖胞苷。苷。第三十九页，本课件共有68页 采集前动员方案选择要根据恶性肿瘤的类采集前动员方案选择要根据恶性肿瘤的类型和患者的具体情况而定。型和患者的具体情况而定。白血病或恶性淋巴瘤晚期等血液系恶性肿白血病或恶性淋巴瘤晚期等血液系恶性肿瘤作自身的瘤作自身的PBSCTPBSCT时，以选择抗肿瘤化疗药物时，以选择抗肿瘤化疗药物作为动员剂量为适宜。作为动员剂量为适宜。而对于而对于Allo-PBSCTAllo-PBSCT

28、供者宜选用供者宜选用GMGMCSFCSF或或G GCSFCSF。第四十页，本课件共有68页（二）采集（二）采集1 1采集时机选择：采集时机选择：（1 1）动员化疗结束后）动员化疗结束后2 23 3周，外周血白细周，外周血白细胞计数升至（胞计数升至（1.0-2.0)101.0-2.0)109 9/L/L时。倘若单时。倘若单用用G-CSFG-CSF动员宜在白细胞计数升至（动员宜在白细胞计数升至（5.5-10.05.5-10.0）时，血小板计数时，血小板计数 501050109 9/L/L；（2 2）外周血）外周血CDCD3434阳性细胞阳性细胞 1 1（正常为（正常为0.20.2 0.10.1）。

29、但采集时机仍需根据患者的）。但采集时机仍需根据患者的当时情况而定。当时情况而定。第四十一页，本课件共有68页2 2方法：方法：运用血细胞分离机如运用血细胞分离机如Fenwall Fenwall CS3000CS3000，分离，分离3 34 4次或次或COBE COBE SPECTRASPECTRA分离分离1 12 2次，直至采集到造次，直至采集到造血功能重建所需的细胞数。血功能重建所需的细胞数。第四十二页，本课件共有68页四、外周血干细胞净化四、外周血干细胞净化 净化方法有也是二种：阳性选择和净化方法有也是二种：阳性选择和阴性选择。阴性选择。五、外周血干细胞体外扩增五、外周血干细胞体外扩增 为

30、了确保为了确保PBSCTPBSCT后成功的造血重建，后成功的造血重建，CDCD3434细胞不应低于细胞不应低于2.5102.5106 6/kg/kg。因此，。因此，可采用部分可采用部分CDCD3434细胞进行体对扩增。细胞进行体对扩增。第四十三页，本课件共有68页六、外周血干细胞的冻存六、外周血干细胞的冻存 通常每次经血细胞分离机分离通常每次经血细胞分离机分离后所得的细胞悬液约后所得的细胞悬液约50ml50ml，可加入，可加入等量等量2020二甲基亚砜（二甲基亚砜（DMSODMSO）和）和RDMI1640RDMI1640保养液，使保养液，使DMSODMSO的最终浓的最终浓度调整至度调整至101

31、0。然后分装于血液冻。然后分装于血液冻存袋内（每袋存袋内（每袋100ml100ml）。）。第四十四页，本课件共有68页采取二步降温法：采取二步降温法：第一步先第一步先1/min1/min速率降至速率降至4545，第二步则以第二步则以5 510/min10/min降至降至80809090，程序结束后，最后将样品置，程序结束后，最后将样品置于于196196液氮中贮存。液氮中贮存。第四十五页，本课件共有68页 当需要应用时，回输前将冻存的外周血干当需要应用时，回输前将冻存的外周血干细胞悬液立即置入细胞悬液立即置入40404242水浴中水浴中3min3min内迅内迅速解冻，速解冻，然后低温离心去除含然

32、后低温离心去除含DMSODMSO上清液。上清液。加等量加等量RPMI1640RPMI1640保养液稀释，每次输注保养液稀释，每次输注400400600ml600ml，在，在1 1小时内静脉输完毕。小时内静脉输完毕。第四十六页，本课件共有68页七、外周血干细胞移植后植活特点七、外周血干细胞移植后植活特点 外周血干细胞移植后，其外周血移植后外周血干细胞移植后，其外周血移植后中性粒细胞（中性粒细胞（PMNPMN）上升常出现二个峰值。）上升常出现二个峰值。第一次峰值即在第一次峰值即在PMNPMN恢得到恢得到 0.50.510109 9/L/L，平均出现在移植后，平均出现在移植后1111天，随后呈一度天

33、，随后呈一度下降趋势，然后约在第下降趋势，然后约在第3 34 4周时再次出现第周时再次出现第二峰值，至后白细胞恢得正常。二峰值，至后白细胞恢得正常。第四十七页，本课件共有68页 目前认为第一次目前认为第一次PMNPMN峰的出现峰的出现是由于外周血中较晚造血祖细胞增是由于外周血中较晚造血祖细胞增殖分化的结果；第二次峰值的出现殖分化的结果；第二次峰值的出现则是由于较原始造血干细胞增殖分则是由于较原始造血干细胞增殖分化的结果。而血小板升至化的结果。而血小板升至 50.01050.0109 9/L/L平均时间为平均时间为1313天。天。第四十八页，本课件共有68页脐血造血干细胞移植脐血造血干细胞移植第

34、四十九页，本课件共有68页 70 70年代发现脐血中含有丰富造血细年代发现脐血中含有丰富造血细胞、其数量和质量与骨髓相似。胞、其数量和质量与骨髓相似。8080年代年代末则用脐血代替骨髓行造血干细胞移植末则用脐血代替骨髓行造血干细胞移植获得成功。因此许多国家相继建立脐血获得成功。因此许多国家相继建立脐血库，我国也正在筹划之中，以期有可能库，我国也正在筹划之中，以期有可能解决异基因造血干细胞移植中遇到的一解决异基因造血干细胞移植中遇到的一些难题。些难题。第五十页，本课件共有68页一、脐血的采集一、脐血的采集 脐血可通过脐静脉穿刺收集，有两脐血可通过脐静脉穿刺收集，有两种方式：种方式：(1)(1)胎

35、盘娩出前收集；胎盘娩出前收集；(2)(2)胎盘娩出后收集。胎盘娩出后收集。采集脐血时，可用肝素、采集脐血时，可用肝素、ACDACD（枸橼酸、（枸橼酸、枸橼酸盐和葡萄糖）和枸橼酸盐和葡萄糖）和CPDCPD（枸橼酸盐、磷（枸橼酸盐、磷酸盐和葡萄糖）作为抗凝剂。酸盐和葡萄糖）作为抗凝剂。第五十一页，本课件共有68页 每个胎盘可采集量为每个胎盘可采集量为4242240240（中位数（中位数103103）mlml，其中约含有核细胞，其中约含有核细胞1.01.02.010 2.010 9 9/l/l，单个核细胞，单个核细胞(MNC)1.010(MNC)1.0109 9,CD34,CD34细胞细胞1.010

36、1.0107 7 理论上估测足可供体重理论上估测足可供体重5050公斤以内的患公斤以内的患者移植之用。者移植之用。第五十二页，本课件共有68页二、脐血分离与保存二、脐血分离与保存脐带血中的造血细胞可通过羟乙基淀脐带血中的造血细胞可通过羟乙基淀粉沉淀法、密度梯度分离法、流式细胞仪粉沉淀法、密度梯度分离法、流式细胞仪分离法及单克隆抗体法等，物理生物学方分离法及单克隆抗体法等，物理生物学方法分离获得。法分离获得。冻存的主要步聚：冻存的主要步聚：(1)(1)程控加入程控加入2020DMSODMSO（每分钟加体积的（每分钟加体积的5 5，边加边搅拌）；，边加边搅拌）；（2 2）程控降温、冻存。）程控降温

37、、冻存。第五十三页，本课件共有68页三、脐血造干血细胞扩增三、脐血造干血细胞扩增原因：原因：单个脐血中造血干细胞数量有限。单个脐血中造血干细胞数量有限。另外，在脐血样品分离、冻存、融化、处另外，在脐血样品分离、冻存、融化、处理和输注等各个环节中还要损耗一部分细理和输注等各个环节中还要损耗一部分细胞，因此不能满足成人造血细胞移植的需胞，因此不能满足成人造血细胞移植的需要。要。扩增过程还可清除移植物中残留扩增过程还可清除移植物中残留T T淋巴细胞淋巴细胞和肿瘤细胞的作用，减少和肿瘤细胞的作用，减少GVHDGVHD的发生率。的发生率。第五十四页，本课件共有68页四、脐血造血干细胞移植后植活特点四、脐

38、血造血干细胞移植后植活特点（1 1）受者外周血中性粒细胞绝对值（）受者外周血中性粒细胞绝对值（ANCANC）5.0105.0109 9/L/L恢复所需时间：同胞相关供者平恢复所需时间：同胞相关供者平均为均为2222天，而无关供者平均为天，而无关供者平均为2424天。天。（2 2）血小板计数）血小板计数 5.0105.0109 9/L/L 恢复所需时间：恢复所需时间：同胞相关供者平均为同胞相关供者平均为4848天，而无关供者平均天，而无关供者平均为为5454天。天。第五十五页，本课件共有68页胎肝造血干细胞移植胎肝造血干细胞移植第五十六页，本课件共有68页 1958 1958年年UphoffUp

39、hoff首先发现对致死剂量照射首先发现对致死剂量照射小鼠输注胎肝细胞悬液后具有促进骨髓造血小鼠输注胎肝细胞悬液后具有促进骨髓造血功能恢复的显著疗效。人们发现胎龄为功能恢复的显著疗效。人们发现胎龄为3 36 6个月胎肝含有极其丰富的造血干细胞，它个月胎肝含有极其丰富的造血干细胞，它和骨髓造血干细胞相比，有着类似的增殖和骨髓造血干细胞相比，有着类似的增殖分化和重建骨髓造血功能的能力，且此时分化和重建骨髓造血功能的能力，且此时淋巴细胞量小于淋巴细胞量小于2 2，且多为未完全分化成，且多为未完全分化成熟的熟的T T淋巴细胞淋巴细胞.因此，故移植后因此，故移植后GVHDGVHD的发生的发生率低及严重程度

40、轻。率低及严重程度轻。第五十七页，本课件共有68页一、胎肝造血细胞制备一、胎肝造血细胞制备 人胎肝可以取自水囊引产、前列腺素引产人胎肝可以取自水囊引产、前列腺素引产正常胎儿。在无菌条件下，取得肝脏。将肝脏正常胎儿。在无菌条件下，取得肝脏。将肝脏置于培养皿中剪成细小块。然后，投入装有双置于培养皿中剪成细小块。然后，投入装有双层或单层高压灭菌处理的铜网（孔径层或单层高压灭菌处理的铜网（孔径100100200200目）的小烧杯，然后倒入约目）的小烧杯，然后倒入约20ml20ml的液体，并的液体，并用用10ml10ml注射器针芯将肝组织块研磨成浆状，注射器针芯将肝组织块研磨成浆状，收集在无菌瓶中，并通

41、过带收集在无菌瓶中，并通过带4 4号针头的注射器号针头的注射器制成单细胞悬液后备用。制成单细胞悬液后备用。第五十八页，本课件共有68页三、胎肝造血干细胞分离与贮存三、胎肝造血干细胞分离与贮存（一）胎肝造血干细胞分离（一）胎肝造血干细胞分离 在正常肝组织中近半数肝细胞在正常肝组织中近半数肝细胞和和1 1的的T T淋巴细胞，因此，分离除淋巴细胞，因此，分离除去这些非造血细胞有利于胎肝造血去这些非造血细胞有利于胎肝造血干细胞的超低温贮存。干细胞的超低温贮存。第五十九页，本课件共有68页 采用直径为采用直径为15mm15mm的的10ml10ml角度离心角度离心管以及聚蔗糖一泛影葡胺分层液，胎管以及聚蔗

42、糖一泛影葡胺分层液，胎肝细胞在肝细胞在44下经非连续密度梯度离心下经非连续密度梯度离心（15001500转转/min/min）20min20min后，收集界面层后，收集界面层的单个核心细胞。此时，肝细胞已基本的单个核心细胞。此时，肝细胞已基本被去除，而粒巨核细胞集落形成单位被去除，而粒巨核细胞集落形成单位（CFUCFUGMGM）回收率为）回收率为74748989。第六十页，本课件共有68页（二）胎肝造血干细胞贮存（二）胎肝造血干细胞贮存 将分离的胎肝细胞中的单个核细胞悬将分离的胎肝细胞中的单个核细胞悬液与二甲亚砜保存液液与二甲亚砜保存液1 1：1 1比例混合后，比例混合后，置入低温贮存袋内，然

43、后按二步降温法置入低温贮存袋内，然后按二步降温法降温。降温。第六十一页，本课件共有68页造血干细胞移植造血干细胞移植 合并症和并发症合并症和并发症第六十二页，本课件共有68页一、移植物抗宿主病一、移植物抗宿主病二、感染：在移植过程中感染是常见二、感染：在移植过程中感染是常见的合并症的合并症,也是移植失败的重要的原也是移植失败的重要的原因之一。因之一。三、间质性肺炎（三、间质性肺炎（IPNIPN）：是）：是AllAll0 0BMTBMT后仅次于后仅次于GVHDGVHD第二位致命性并发症，发生第二位致命性并发症，发生率约为率约为4040。第六十三页，本课件共有68页四、肝静脉闭塞病四、肝静脉闭塞病

44、 五、出出血性膀胱炎（五、出出血性膀胱炎（HEHE）六、渗透综合症（或称肺水肿综合症）六、渗透综合症（或称肺水肿综合症）七、移植排斥七、移植排斥八、出血八、出血九、其它：移植后出现的晚期并发症有白九、其它：移植后出现的晚期并发症有白内障、白质脑病、甲状腺功能低下、性腺内障、白质脑病、甲状腺功能低下、性腺功能低下、儿童生长发育迟缓、以及继发功能低下、儿童生长发育迟缓、以及继发第二肿瘤等。第二肿瘤等。第六十四页，本课件共有68页造血干细胞移植造血干细胞移植 适应症及临床应用适应症及临床应用 第六十五页，本课件共有68页一、适应症及临床应用一、适应症及临床应用（一）急性白血病（一）急性白血病（二）慢

45、性粒细胞白血病（二）慢性粒细胞白血病（CGLCGL）（三）恶性淋巴瘤（三）恶性淋巴瘤（四）多发性骨髓瘤（四）多发性骨髓瘤（五）重型再生障碍性贫血（五）重型再生障碍性贫血（六）遗传性疾病（六）遗传性疾病（七）实体肿瘤（七）实体肿瘤第六十六页，本课件共有68页脐血造血干细胞移植前景：脐血造血干细胞移植前景：(1)(1)脐血移植所需有核细胞数量较少，可供儿童脐血移植所需有核细胞数量较少，可供儿童应用；若进一步增加采集量，改善处理过程，应用；若进一步增加采集量，改善处理过程，其造血细胞数足敷成人移植之用。其造血细胞数足敷成人移植之用。(2)(2)脐血淋巴细胞大部分为幼稚型脐血淋巴细胞大部分为幼稚型T T淋巴细胞，淋巴细胞，功能不成熟，功能不成熟，HLAHLA不合的移植后，不合的移植后，GVHDGVHD较同类较同类骨髓移植（骨髓移植（BMTBMT）少而轻。）少而轻。第六十七页，本课件共有68页感感谢谢大大家家观观看看第六十八页，本课件共有68页