琼脂扩散实验.ppt

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1、实验十三实验十三 琼脂扩散试验琼脂扩散试验一、实验目的一、实验目的学习掌握琼脂扩散试验的原理与应用学习掌握琼脂扩散试验的原理与应用熟悉掌握其基本操作方法熟悉掌握其基本操作方法二、实验原理二、实验原理沉淀反应是指沉淀反应是指可溶性抗原可溶性抗原与相应抗体特异与相应抗体特异性结合，在二者性结合，在二者比例适当比例适当并有并有电解质电解质存在存在及一定的及一定的温度条件温度条件下，可形成肉眼可见的下，可形成肉眼可见的沉淀物的反应。沉淀物的反应。根据反应中使用的介质和检测方法不同，根据反应中使用的介质和检测方法不同，可将沉淀反应分为可将沉淀反应分为液相沉淀反应液相沉淀反应和和凝胶内凝胶内沉淀反应沉淀反

2、应两种类型两种类型适合比例性适合比例性抗体含量抗体含量抗原含量抗原含量前带前带后带后带等价带等价带网格学说网格学说（lattice theory）抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适液相沉淀反应液相沉淀反应环状沉淀环状沉淀絮状沉淀（免疫比浊）絮状沉淀（免疫比浊）凝胶内沉淀反应凝胶内沉淀反应单向琼脂扩散单向琼脂扩散双向琼脂扩散双向琼脂扩散免疫电泳免疫电泳凝胶内沉淀反应凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫扩散技术免疫电泳技术免疫电泳技术单向扩散试验单向扩散试验双向扩散试验双向扩散试验火箭电泳火箭电泳对流电泳对流电泳免疫电泳免疫电泳免疫扩散免疫扩散根根据据沉沉淀淀线线的的数数量量、位位置置和和形形状状，与与已

3、已知知的的标标准准(或或正正常常)抗抗原原抗抗体体形形成成的的沉沉淀淀线线比比较较，即即可可对对样样品品中中所所含成分及其性质进行分析、鉴定。含成分及其性质进行分析、鉴定。由于电场的作用，限制了抗原、抗体的由于电场的作用，限制了抗原、抗体的自由扩散，而使其定向泳动，因而增加自由扩散，而使其定向泳动，因而增加了试验的灵敏度，并缩短反应时间。了试验的灵敏度，并缩短反应时间。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度抗原的含量；反之，当琼脂中抗原浓度固定时，便可测定待测抗体的含量。固定时，便可测定待测抗体的含量。三、实验器材三、实验器材兔抗兔抗BSA抗体抗体BSA0.01mol/LPBS缓冲液缓冲液1%离子琼脂离子琼脂打孔器打孔器四、实验内容及步骤四、实验内容及步骤1、琼脂板制作、琼脂板制作2、打孔、打孔3、加样、加样4、反应、反应5、结果观察、结果观察