BKV病毒的检测-2017.ppt

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1、BKBK病毒的检测病毒的检测1971年，在肾移植接受者的尿液样本中首次发现；多瘤科病毒，BKV、JCV 及 SV40是目前所知的多瘤病毒家族所有成员；人体的肾、肺、眼、肝、脑等器官都可作为BK病毒的生长部位，并引起相关的疾病；无包膜，含有二十面体、直径45nm的衣壳，病毒基因组为5300bp的环形双链DNA。其基因组可分为调控基因、早期基因、晚期基因三部分；许多证据表明，BK病毒与出血性膀胱炎、肾炎相关，BK病毒容易侵犯免疫缺陷患者，特别是实体器官移植和骨髓移植的接收者。BKBK病毒简介病毒简介在儿童早期病毒血清阳性率60100。原发性 BKV感染常发生于45岁时，成年人抗体阳性率为46%94

2、%；儿童感染一般无症状，典型症状是发烧和非特异性上呼吸道感染；初次感染后，此病毒在正常人体内呈潜伏状态，在器官移植病人中，BKV病毒经常激活导致疾病；传播途径：暴露的体液，例如唾液，或是通过胎盘传播。BKBK病毒病毒简介简介感染肾：表现为出血性膀胱炎（出血性膀胱炎则增加住院时间和病人死亡率）、非出血性膀胱炎、输尿管狭窄和肾炎；感染肺：肺炎和急性非特异性上呼吸道感染；在各种肿瘤样本中检测到BKV病毒，主要是神经胶质和神经元脑瘤；中枢神经系统疾病；到目前为止，关于眼部感染仅有的报告为双侧非典型视网膜炎。BKVBKV相关疾病相关疾病免疫抑制状态下，潜伏在体内的BKV可再次激活；肾移植术后BKV再次激

3、活发生率高：10%68%，BKV相关肾病患病率：17%；移植肾丧失功能几率高：50%的BKVN会导致移植肾失功；BKV和JCV具有75%的同源性，区分BKV和JCV还是非常重要的，因为JCV很少引起多瘤病毒相关肾病，与肾脏损伤不相关。BKV感染在临床上经常被误诊为急性排斥或是药物毒性。BK BK病毒相关肾病病毒相关肾病BKVBKV相关肾病筛查、诊断、干预相关肾病筛查、诊断、干预Deepali Kumar,Atul Humar,et.al.The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition.2011,51-54.尿液 BKV-DNA 荧光定

4、量pcr法VS尿液 Decoy细胞l人员要求不高，易于培训l灵敏度高、特异性强l可实现自动化，客观性强l重复性好l需要有经验的病理学专家，主观性较强l依据形态不能区分BK病毒和其他病毒感染，例如：JCVl灵敏度低特异性差美国器官移植手册建议：肾移植后，成人两年内至少每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次；BKV-DNA浓度107 copies/mL，建议三个月内复查。BKV-DNA浓度107 copies/mL，建议检测BKV病毒血症。BK病毒尿是病毒开始活动复制的第一标志。早期检测对控制BK病毒的复制，早期干预具有重大意义。研究发现，尿BKV阳性出现在血BKV阳性

5、之前，约有33的肾移植受者中会发现有BK病毒尿症。尿液尿液BKV-DNABKV-DNA检测检测注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化Deepali Kumar,Atul Humar,et.al.The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition.2011,51-54.所谓 decoy 细胞指脱落尿中的含有病毒包涵体的移行细胞。在沉渣尿涂片巴氏染色下,decoy细胞很容易辩认。含病毒包涵体的细胞核有三种表现:典型最多见为不透明的毛玻璃(或冻胶)样改变,或颗粒状嗜硷性包涵体占据整个细胞核,周围无明显的晕圈;或仅核周围存在高密度的染色质;少

6、见可出现鹰眼样改变即核中央出现着色过深的包涵体。尿细胞学检测与尿液BKV-DNA 荧光定量PCR对BKVN的筛选一样具有重要临床意义，但是灵敏度和特异性较低。尿液 Decoy细胞检测在组织学检查阴性而PCR阳性的病人最终约有半数以上病人发展为BKVAN,一般认为从血PCR阳性到组织学证实BKVN有一个数周至数月的窗口期。PCRPCR法检测血浆法检测血浆BKV-DNA BKV-DNA VS VS 组织活检组织活检方法PCR法血浆BKV-DNA组织学活检优点l能够实时反映病毒感染的状态，无窗口期l抽取病人外周血即可，无需肾穿刺BKVN确诊金标准可鉴别排斥反应缺点无法确诊l有一个数周数月的窗口期l需

7、要取肾穿刺标本，具有创伤性美国器官移植手册建议：肾移植后，成人前3个月至少每月检测一次，之后两年内每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次；浓度104 copies/mL,一个月之内重复检测；推荐减少免疫抑制剂用量，建议进行活检。浓度104 copies/mL，推荐减少免疫抑制剂用量。至少每两周检测一次血浆BKV-DNA，建议进行移植物活检。监测血浆中BKV病毒的负荷量可作为调查免疫抑制剂用量、维持治疗时间的一项临床指标。血浆血浆BKV-DNABKV-DNADeepali Kumar,Atul Humar,et.al.The AST Handbook of Transplant Infections,1st edition.2011,51-54.注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化临床上,确诊BKVN必须通过肾穿刺标本的组织学检查。光镜下表现为由浸润的单核淋巴细胞、小管炎和核内包涵体组成的间质性肾炎。免疫组化可用于检测石蜡包埋、冰冻组织或细胞学标本中的BKV组织学检查和免疫组化组织学检查和免疫组化目前对BKV感染还缺乏特效的治疗方法，肾移植术后经穿刺确诊 BKVN的患者，目前有几种治疗措施：适当减少免疫抑制剂的用量来控制BKV的复制或转换为其他免疫抑制剂应用来氟米特治疗应用抗病毒药物治疗治疗治疗Thank you!