叶绿素的提取.ppt

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1、一、实验目的掌握叶绿体色素的提取方法；掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤；掌握叶绿体色素的部分理化性质。二、实验原理1.叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂:酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。2.色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。四种色素的化学性质均为亲脂性亲水性：均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。极性大小：叶绿素b叶绿素a叶黄素胡萝卜素 根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：叶绿素b叶绿素a 叶黄素胡萝卜素三、叶绿素

2、的光学性质n 叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。四、实验材料与试剂新鲜的菠菜叶片。95%乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油。量筒，滤纸，大培养皿一只，小培养皿一只，长滴管，剪刀。五五.实验步骤实验步骤1.提取叶绿素提取叶绿素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素研磨法提取光合色素材料剪碎材料剪碎材料剪碎材料剪碎研磨法研磨法研磨法研磨法加入有机溶剂加入有机溶剂加入有机溶剂加入有机溶剂研磨、匀浆研磨、匀浆研磨、匀浆研磨、匀浆过滤过滤过滤过滤提取液提取

3、液提取液提取液z将深将深绿绿色的菠菜叶剪碎放入研色的菠菜叶剪碎放入研钵钵中。中。z放入放入少量的少量的SiO2和和CaCO3，再加入，再加入3 3滴管无滴管无水乙醇水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。后迅速、充分研磨至糊状。z将糊状研磨物倒入放有尼将糊状研磨物倒入放有尼龙龙布的漏斗中，布的漏斗中，用研用研钵锤挤压钵锤挤压，将，将滤滤液收集到小玻璃瓶中，液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。并盖上瓶盖。具体实验步骤具体实验步骤（提取色素）（提取色素）2、叶绿体色素的分离（纸层析法）用滤纸条浸色素提取液（用滤纸条浸色素提取液（试管试管1），吹干，反复多），吹干，反复多次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在

4、培养次；将带色素的滤纸条卷成灯芯，将表面皿放在培养皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层皿内，注上汽油，把灯芯浸在汽油内，加盖，色素层分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。分清后，取下吹干，即可看到分离的各种色素。实验关键实验关键1.选材时应注意选择选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿鲜嫩、色浓绿、无浆汁的、无浆汁的叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。叶片。如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。2.画滤液细线时应以画滤液细线时应以细、齐、直细、齐、直为标准，重复为标准，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复画线时必须等上次画线干燥后再进行，重复2-3次。次。3.层析时不要让滤液细线触及层析液层析时

5、不要让滤液细线触及层析液。1.因因丙酮和层析液丙酮和层析液都是易挥发且都是易挥发且有一定毒性的有一定毒性的有机溶剂有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。剂的挥发。2.在研磨时要加少许在研磨时要加少许二氧化硅二氧化硅，目的是为了研目的是为了研磨充分，磨充分，有利于色素的提取；加少许有利于色素的提取；加少许碳酸钙碳酸钙的目的是为了的目的是为了防止防止研磨过程中，研磨过程中，叶绿体中的叶绿体中的色素受到破坏色素受到破坏。3.分分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细离色素时，一定不要让滤

6、纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层色素易溶解在层析液中析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。，导致色素带不清晰，影响实验效果。叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离实验结果实验结果（西安交通大学实验报告纸）（西安交通大学实验报告纸）（写清姓名、班级、实验名称、日期等）（写清姓名、班级、实验名称、日期等）一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验记录三、实验记录 1.1.讲义中的表格（改动见下页）讲义中的表格（改动见下页）2.2.画图画图四、讨论及思考题四、讨论及思考题 1.1.谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训 2.2.思考题思考题实验报告实验报告思考题思考题1.1.研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少层膜？层膜？2.2.滤纸剪角的目的是什么？滤纸剪角的目的是什么？3.3.到了秋天叶色变黄、变红的原因是什么？到了秋天叶色变黄、变红的原因是什么？叶绿体中色素的提取和分离叶绿体中色素的提取和分离