药物定量分析与分析方法验证.ppt

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1、第四章药物定量分析与分析方法验证第四章药物定量分析与分析方法验证第一节第一节定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法一、概述一、概述分析含金属或含分析含金属或含卤素、氮、硫、磷、硒卤素、氮、硫、磷、硒等特殊元素药等特殊元素药物分析的前处理方法。物分析的前处理方法。含金属或卤素的药物，如葡萄糖酸锑钠，硬脂酸镁、含金属或卤素的药物，如葡萄糖酸锑钠，硬脂酸镁、碘苯酯、磺溴酞钠等，处理方法因金属或卤素在分子碘苯酯、磺溴酞钠等，处理方法因金属或卤素在分子中结合的牢固程度而异，如：中结合的牢固程度而异，如：有机卤素药物，有机卤素药物，所含卤所含卤素原子均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处素原子

2、均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。如果卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳如果卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳原子相连接，则结合不牢固；原子相连接，则结合不牢固；而含金属的有机药物，有两种情况：而含金属的有机药物，有两种情况：一是金属原子不直接与碳原子相连一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机化合物，其分子结构中的盐或配位化合物，称为含金属的有机化合物，其分子结构中的金属原子结合不够牢固，在水溶液中既可离解出金

3、属离子，可金属原子结合不够牢固，在水溶液中既可离解出金属离子，可在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量定；在溶液中直接进行其金属的鉴别或含量定；二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比，结合状态比较牢，称为有机金属药物较牢，称为有机金属药物.在溶液中其金属一般不能解离成离在溶液中其金属一般不能解离成离子状态，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态（多转子状态，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态（多转变为无机的金属盐或离子），方可进行其金属的鉴别或含量测变为无机的金属盐或离子），方可进行其金属的鉴别或含量测定。定。二、不经有机破坏的分析方法二、

4、不经有机破坏的分析方法（一）（一）直接测定法直接测定法 凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些C-M（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定法进行测定。（二）经水解后测定法（二）经水解后测定法1直接回流后测定法直接回流后测定法2用硫酸水解后测定法用硫酸水解后测定法（三）经氧化还原后测定法（三）经氧化还原后测定法1碱性还原后测定碱性还原后测定2酸性还原后

5、测定酸性还原后测定3利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量三、三、经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法（一）（一）湿法破坏湿法破坏1硝酸硝酸-高氯酸法高氯酸法2硝酸硝酸-硫酸法硫酸法3硫酸硫酸-硫酸盐法硫酸盐法4其它湿法其它湿法（二）（二）干法破坏干法破坏（三）（三）氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法（oxygenflaskcombustionmethod）系系将将有有机机药药物物放放入入充充满满氧氧气气的的密密闭闭的的燃燃烧烧瓶瓶中中进进行行燃燃烧烧，并并将将燃燃烧烧所所产产生生的的欲欲测测物物质质吸吸收收于于适适当当的的吸吸收收液液中

6、中，然然后后根根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。的有机药物。本法是快速分解有机物的简单方法，它不需本法是快速分解有机物的简单方法，它不需要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定量分解成离子型。该方法被各国药典所收载。量分解成离子型。该方法被各国药典所收载。1仪器装置仪器装置燃烧瓶为燃烧瓶为500ml、1000ml、或或2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、空磨口、硬质玻璃锥形瓶

7、，瓶塞应严密、空心、底部熔封铂丝一根（直径为心、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），），铂丝下铂丝下端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的23，如图如图2称样称样3燃烧分解操作法燃烧分解操作法4吸收液的选择吸收液的选择（2）仪器与材料仪器与材料仪器装置仪器装置燃烧瓶为燃烧瓶为250、500、1000或或2000ml无色、磨口、厚无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞塞空心，底部熔封铂丝一空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状根，下端呈螺旋状或网状称样用材料及称样称样用材料及称样A.固体样品固体样品无灰滤纸无灰滤纸B.液体样品液体样品

8、纸袋纸袋 C.软膏类样品：将适量样品置不含被测成分软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹样品的燃烧样品的燃烧点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。合并洗液及吸收液，同法另做空白

9、试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。检查或含量测定。吸收液吸收液A.A.作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态氧气氧气B.吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 （HFHF）氯氯 NaOHNaOH溶液（溶液（HClHCl)溴溴 H H2 2O O2 2-NaOH(-NaOH(NaOHNaOH饱和溶液饱和溶液-SO-SO2 2(Br(Br2,HBr),HBr)

10、碘碘 NaOHNaOH饱和溶液饱和溶液-SO-SO2 2(I(I2 2,HI),HI)硫硫 浓浓H H2 2O O2 2溶液溶液 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液（3）操作方法）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备用洗液洗净后，按各药品项下的规定加用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备样品的准备取样品适量，精密称定后按规定方法取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。（5）应用）应用例例磺

11、溴酞钠的含量测定磺溴酞钠的含量测定ChP(2000)燃烧分解燃烧分解O2HBr+S2-+SO4+HBr+S2-NaBr+Na2SO4+H2ONaOH,H2O2溴溴取本品约取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录照氧瓶燃烧法（附录C）进行有进行有机破坏，选用机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液10ml，浓过氧化氢溶液浓过氧化氢溶液0.5ml与水与水10ml作为吸收液，俟生成的作为吸收液，俟生成的烟雾完全吸入吸收液后，用水稀释至烟雾完全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸煮沸5分钟，分钟，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液放冷，加稀硝酸使成酸性，精密

12、加硝酸银滴定液（0.1mol/l）20ml，摇匀，再加硫酸铁胺指示液摇匀，再加硫酸铁胺指示液2mL，用用硫氰酸胺滴定液硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每试验校正。每1mL硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于7.990mg的溴的溴(Br)。例例碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定ChP（2005）原原理理 碘碘苯苯酯酯系系有有机机碘碘化化物物，用用氧氧瓶瓶燃燃烧烧分分解解，转转变变为为碘碘化化物物，继继而而氧氧化化为为游游离离的的碘碘，并并被被定定量量地地吸吸收收于于吸吸收收液液中中，和和氢氢氧氧化化钠钠反反应应，生

13、生成成碘碘化化物物与与碘碘酸酸盐盐，加加入入溴溴-醋醋酸酸溶溶液液，使使全全部部转转变变为为碘碘酸酸盐盐，过过量量的的溴溴以以甲甲酸酸及及通通空空气气去去除除。加加入入碘碘化化钾钾，使使与与碘碘酸酸盐盐反反应应析析出出游游离离碘碘，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠液液滴滴定定，碘碘与与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点淀粉结合所显的蓝色消失即为终点 取取本本品品约约20mg，精精密密称称定定，照照氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法进进行行有有机机破破坏坏，用用氢氢氧氧化化钠钠试试液液2ml与与水水l0ml为为吸吸收收液液，待待吸吸收收完完全全后后，加加溴溴醋醋酸酸溶溶液液(取取醋醋酸酸钾钾10g，加加冰冰醋醋酸酸适适量

14、量使使溶溶解解，加加溴溴0.4ml，再再加加冰冰醋醋酸酸使使成成1000m1)l0ml，密密塞塞，振振摇摇，放放置置数数分分钟钟，加加甲甲酸酸约约lml，用用水水洗洗涤涤瓶瓶口口，并并通通入入空空气气流流约约35min以以除除去去剩剩余余的的溴溴蒸蒸气气，加加碘碘化化钾钾2g，密密塞塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02Mol/L)滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定的的结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml的的硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0.02mol/L)相相当当于于1.38

15、8mg的的C19H29IO2。滴定度的计算滴定度的计算放大反应放大反应2mol碘苯酯碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2molNaIO3即即2mol碘苯酯碘苯酯2molNaIO32molNaIO3+10I-6molI2即即2mol碘苯酯碘苯酯1molI26molI212molI12molNa2S2O3反应摩尔比为反应摩尔比为1 698：140.氧瓶燃烧法中的装置有A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.磨口软质玻璃锥形瓶C.铂丝D.铁丝E.铝丝选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品A.磨口硬质玻璃锥形瓶B.铂丝C

16、.普通滤纸D.氢气 E.无灰滤纸99：76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为A.H2O2溶液B.H2O2NaOH溶液C.NaOH溶液D硫酸肼饱和液E.NaOH硫酸肼饱和液.氧瓶燃烧法可用于A.含卤素有机药物的含量测定B.醚类药物的含量测定C.检查甾体激素类药物中的氟D.检查甾体激素类药物中的硒E.芳酸类药物的含量测定第二节第二节定量分析方法特点定量分析方法特点一、一、容量分析法容量分析法（一）（一）容量分析法的特点容量分析法的特点（二）（二）容量分析法的计算问题容量分析法的计算问题1滴定度滴定度2滴定度（滴定度（T）的计算的计算3百分含量计算百分含量计算（1）直接滴定法直接滴定法

17、（2 2）回滴定法（剩余滴定法）回滴定法（剩余滴定法）A:被测药物，被测药物，B：滴定剂：滴定剂m滴定液的摩尔浓度滴定液的摩尔浓度（mol/l)滴定度滴定度T例：用碘量法测定例：用碘量法测定VitC(176.13VitC(176.13）m m(I(I2 2)=0.05mol/l)=0.05mol/laMA bWA mBVT:T:药典规定的摩尔浓度的滴定度药典规定的摩尔浓度的滴定度剩余滴定法：剩余滴定法：药物药物+定量过量的滴定液定量过量的滴定液A，用另一滴定液，用另一滴定液B回滴；回滴；空白实验空白实验剩余滴定法：剩余滴定法：二、二、光谱分析法光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法1特点紫外-可

18、见分光光度法是根据物质分子对波长为200nm760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的光谱分析方法。主要特点如下：（1）灵敏度高，可达10-4g/ml10-7g/ml。（2）准确度高，相对误差为2%5%。（3）仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。2郎伯郎伯-比耳定律比耳定律3仪器校正和检定仪器校正和检定4对溶剂的要求对溶剂的要求5测定方法测定方法1)对照品比较法对照品比较法标示量（标示量（%）：）：制剂含量相当于标示量的百分数制剂含量相当于标示量的百分数 单位制剂的平均装量，如：单位制剂的平均装量，如：g/g/片，片，g/g/粒，粒，g/ml,ml/mlg/ml,ml/mlB:B:标示

19、量标示量:单位制剂的标示量（单位制剂的标示量（g/g/片，片，g/g/粒，粒，g/ml,ml/ml g/ml,ml/ml）2）吸收系数法）吸收系数法（二）（二）荧光分析法荧光分析法1特点特点2荧光分析仪荧光分析仪3含量测定含量测定三、三、色谱分析法色谱分析法（一）（一）高效液相色谱法高效液相色谱法1对仪器的一般要求对仪器的一般要求系统适用性实验系统适用性实验（1）色谱柱的理论塔板数（）色谱柱的理论塔板数（n）（2）分离度分离度.测定法测定法（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：内标法内标法样品中加入内标物，以待测组分和内标物的响应样品中加入内标

20、物，以待测组分和内标物的响应信号对比定量信号对比定量内标物和标准物是同一物质时内标物和标准物是同一物质时应用示例应用示例（一）黄体酮测定（一）黄体酮测定-HPLC柱柱:C:C1818流动相流动相:甲醇甲醇-水水(65:35)(65:35)检测波长检测波长:254nm:254nm内标物内标物:已烯雌醇已烯雌醇1mg/ml1mg/ml对照品对照品:黄体酮标品黄体酮标品方法方法:（1 1）取本品约）取本品约20mg20mg，精密称定，置，精密称定，置25 ml25 ml量瓶中，加甲量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀醇溶解并稀释至刻度，摇匀.精密量取该溶液与内标溶精密量取该溶液与内标溶液各液各5ml

21、5ml，置另一个，置另一个25ml25ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，进样匀，进样20 20 ll 得峰面积分别为得峰面积分别为A A样样和和A A内内，（2 2）另取对照品）另取对照品m m对对同法测定，得峰面积分别为同法测定，得峰面积分别为A A对对和和A A内内按内标法以峰面积计算含量按内标法以峰面积计算含量.（1 1）求含量）求含量（2 2）求）求f fi i(1)求fi（黄体酮对已烯雌醇的相对校正因子）（黄体酮对已烯雌醇的相对校正因子）（2）求药片中黄体酮含量）求药片中黄体酮含量注意注意:mi是指样品中含有纯黄体酮的质量是指样品中含有纯黄体酮的质量实际工作

22、中的计算方法实际工作中的计算方法m样样是指称取样品的质量是指称取样品的质量对于液体或气体样品对于液体或气体样品（2）外标法测定供试品中主成分含量：外标法测定供试品中主成分含量：外标法可分为标准曲线法和外标一点法。外标法可分为标准曲线法和外标一点法。1）标准曲线法：）标准曲线法：2）外标一点法：）外标一点法：(二二)气相色谱法气相色谱法1.对仪器的一般要求对仪器的一般要求2.系统适应性实验系统适应性实验3.测定法测定法第三节第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证验验证证内内容容有有：准准确确度度、精精密密度度（包包括括重重复复性性、日日间间和和日日内内精精密密度和重现性）、专属性

23、、检测限、定量限、线性范围和耐用性。度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性范围和耐用性。一、一、准确度准确度（一）含量测定的准确度（一）含量测定的准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率（度，一般以回收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。）表示。准确度应在规定的范围内建立。回收率的计算可按下式：回收率的计算可按下式：原料药原料药原料药原料药二二、精密度精密度精密度系指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经过多精密度系指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得的结果之间的接近程度。次

24、取样测定所得的结果之间的接近程度。(一一)精密度表示方法精密度表示方法1.偏差偏差(deviation，d).标准偏差标准偏差(standarddeviation，SD)S=（XiX）2n13.相相对对标标准准偏偏差差(relativestandarddeviation,RSD),也也称称变变异系数异系数(coefficientofvaration,CV)RSD=标准偏差标准偏差平均值平均值100%=SX100%(二二)重复性、中间精密度及重现性重复性、中间精密度及重现性1.重复性重复性在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的在相同的条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。精

25、密度称为重复性。2中间精密度中间精密度同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。同设备测定结果的精密度，称为中间精密度。3重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度，称为重现性。称为重现性。(三三)数据要求数据要求三、专属性三、专属性专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方能准确测定出被测物的特性。能存在下，采用的方能准确测定出被测物的特性。(一一)鉴别反应鉴别反应(二二)含量测定和

26、杂质测定含量测定和杂质测定四、四、检测限检测限检测限（检测限（limitofdetection，LOD）是试样中被测物能被检是试样中被测物能被检测出的测出的最低浓度或量最低浓度或量。LOD是一种限度检验效能指标，即反映是一种限度检验效能指标，即反映方法与仪器的灵敏度和噪音方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白的大小，也表明样品经处理后空白（本底）值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该（本底）值的高低。它无需定量测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。根据所采用的方法来确定检测限。规定的浓度或量即可。根据所采用的方法来确定检测限。(一一)常用的方法常用的方法1.非仪

27、器分析目视法非仪器分析目视法2.仪器分析时的测定法仪器分析时的测定法（二）数据要求（二）数据要求五、定量限五、定量限 定量限（定量限（limitofquantitation，LOQ）是指样品中被测是指样品中被测物能物能被定量测定的最低量被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密，其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。度。杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。六、线性六、线性 线性线性系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。度直接呈正比关系的程度。七、范围七、

28、范围范围是指能到达一定精密度、准确度和线性、测试方法适用范围是指能到达一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限浓度或量的区间。的高低限浓度或量的区间。八、耐用性八、耐用性耐用性耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。的承受程度，为常规检验提供依据。1用于鉴别试验用于鉴别试验2用于原料药中杂质测定或制剂中的降解产物测定的方法用于原料药中杂质测定或制剂中的降解产物测定的方法3用于原料药中主成分或制剂中有效组分含量测定及溶出用于原料药中主成分或制剂中有效组分含量测定及溶出度测定度测定第四节第四节生物样品分析方

29、法的基本要求生物样品分析方法的基本要求一、常用样品的种类、采集和储贮藏一、常用样品的种类、采集和储贮藏生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是比生物样品包括各种体液和组织，但实际上最常用的是比较容易得到的血液（血浆、血清、全血）尿液、唾液。较容易得到的血液（血浆、血清、全血）尿液、唾液。(一一)血样血样血浆（血浆（plasma）和血清（和血清（serum）是最常用的生物样品。是最常用的生物样品。(二二)唾液唾液(三三)尿液尿液二、生物样品分析前处理技术二、生物样品分析前处理技术(一一)去除蛋白质去除蛋白质1加入与水相混溶的有机溶剂加入与水相混溶的有机溶剂2加入中性盐加入中性盐3加入强酸加

30、入强酸4加入含锌盐及铜盐的沉淀剂加入含锌盐及铜盐的沉淀剂5酶解法酶解法（二）缀合物的水解（二）缀合物的水解（三）分离、纯化与浓集（三）分离、纯化与浓集1 液液-液液 提提 取取 法法(liquid-liquid extraction,LLE)2 液液-固固 提提取取法法(liquidsolidextraction,LSE)3被测组分的浓集被测组分的浓集(四四)化学衍生化化学衍生化1GC中化学衍生化法中化学衍生化法2HPLC中化学衍生化法中化学衍生化法三、三、定量分析方法验证定量分析方法验证(一一)特异性特异性必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，必须证明所测定的物质是原形药物或特定

31、的活性代谢物，内原性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰内原性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定。对于色谱法至少要提供空白样品色谱图、空白样品的测定。对于色谱法至少要提供空白样品色谱图、空白生物样品加标准物质色谱图及用药后的样品色谱图。生物样品加标准物质色谱图及用药后的样品色谱图。(二二)标准曲线与线性范围标准曲线与线性范围所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法所所得得的的回回归归方方程程来来评评价价。一一般般控控制制相相关关系系数数r0.9900。标标准准曲曲线线高高低低浓浓度度范范围围为为线线性性范范围围

32、，在在线线性性范范围围内内浓浓度度测测定定结果应达到试验要求的精密度和准确度。结果应达到试验要求的精密度和准确度。(三三)精密度与准确度精密度与准确度 要求选择三个浓度的质控样品同时进行方法的精密度要求选择三个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察，低浓度选择在最低定量限（和准确度考察，低浓度选择在最低定量限（LOQ）附近，附近，高浓度在标准曲线的上限附近，中间选一个浓度，每一个高浓度在标准曲线的上限附近，中间选一个浓度，每一个浓测定五个样品。浓测定五个样品。精密度用质控样品的日内和日间相对标准偏差精密度用质控样品的日内和日间相对标准偏差（RSD）表表示示，一一般般RSD 应应小小于于

33、15%，在在LOQ附附近近RSD应小于应小于20%。准准确确度度是是指指用用特特定定方方法法测测得得的的生生物物样样品品浓浓度度与与真真实实浓浓度度的的接接近近程程度度，可可用用相相对对回回收收率率表表示示，即即采采用用“回回收收率率”或或“加加样样回回收收率率”得得到到的的药药物物自自样样品品中中回回收收率率。其其值值一一般般应应在在85%115%范范围围内内，在在LOQ附附近近应应在在80%120%范围内。范围内。(四四)最低定量限最低定量限最低定量限指标准曲线的最低浓度点，也称灵敏度，表示最低定量限指标准曲线的最低浓度点，也称灵敏度，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，要求测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，要求LOQ至少能满足测定至少能满足测定35个半衰期时样品中的药物浓度或个半衰期时样品中的药物浓度或Cmax的的1/101/20时的药物浓度。时的药物浓度。(五五)样品稳定性样品稳定性(六六)提取回收率提取回收率(七七)质控样品质控样品(八八)质量控制质量控制