药物色谱分析.ppt

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1、药物色谱分析药物色谱分析-6化学键合相色谱法化学键合相色谱法一、化学键合相的特点和分类一、化学键合相的特点和分类一、化学键合相的特点和分类一、化学键合相的特点和分类二、化学键合相填料新进展二、化学键合相填料新进展二、化学键合相填料新进展二、化学键合相填料新进展三、非极性键合相色谱法三、非极性键合相色谱法三、非极性键合相色谱法三、非极性键合相色谱法四、极性键合相色谱法四、极性键合相色谱法四、极性键合相色谱法四、极性键合相色谱法五、离子交换键合相色谱法五、离子交换键合相色谱法五、离子交换键合相色谱法五、离子交换键合相色谱法主要内容第一节第一节第一节第一节 化学键合相的特点和分类定义化学键合相的特点

2、和分类定义化学键合相的特点和分类定义化学键合相的特点和分类定义一、特点：一、特点：一、特点：一、特点：消除了担体表面活性作用点，清除了某些可能的消除了担体表面活性作用点，清除了某些可能的消除了担体表面活性作用点，清除了某些可能的消除了担体表面活性作用点，清除了某些可能的催化活性催化活性催化活性催化活性耐溶剂冲洗，使用过程中固定相流失耐溶剂冲洗，使用过程中固定相流失耐溶剂冲洗，使用过程中固定相流失耐溶剂冲洗，使用过程中固定相流失热稳定性好热稳定性好热稳定性好热稳定性好表面改性灵活，容易获得重复性产品表面改性灵活，容易获得重复性产品表面改性灵活，容易获得重复性产品表面改性灵活，容易获得重复性产品载

3、样量大，溶剂残留效应小，梯度洗脱平衡快载样量大，溶剂残留效应小，梯度洗脱平衡快载样量大，溶剂残留效应小，梯度洗脱平衡快载样量大，溶剂残留效应小，梯度洗脱平衡快二、化学键相的稳定性二、化学键相的稳定性二、化学键相的稳定性二、化学键相的稳定性键合相中键合相中键合相中键合相中Si-O-SiSi-O-SiSi-O-SiSi-O-Si键易受键易受键易受键易受LewisLewisLewisLewis酸、酸、酸、酸、NaOHNaOHNaOHNaOH、KOHKOHKOHKOH等亲电试剂等亲电试剂等亲电试剂等亲电试剂的进攻而断裂，在低的进攻而断裂，在低的进攻而断裂，在低的进攻而断裂，在低pHpHpHpH和高和高

4、和高和高pHpHpHpH条件下均不稳定。条件下均不稳定。条件下均不稳定。条件下均不稳定。高温会使硅胶溶解，键合硅胶在高温会使硅胶溶解，键合硅胶在高温会使硅胶溶解，键合硅胶在高温会使硅胶溶解，键合硅胶在150150150150下使用为宜下使用为宜下使用为宜下使用为宜物理吸附的水会与硅烷化试剂作用形成副产物物理吸附的水会与硅烷化试剂作用形成副产物物理吸附的水会与硅烷化试剂作用形成副产物物理吸附的水会与硅烷化试剂作用形成副产物,其在有机其在有机其在有机其在有机溶剂中溶解溶剂中溶解溶剂中溶解溶剂中溶解,造成表观的键合相流失的现象造成表观的键合相流失的现象造成表观的键合相流失的现象造成表观的键合相流失的

5、现象.三、化学键合相的分类三、化学键合相的分类三、化学键合相的分类三、化学键合相的分类极性键合相、非极性键合相、离子交换键合相三种极性键合相、非极性键合相、离子交换键合相三种极性键合相、非极性键合相、离子交换键合相三种极性键合相、非极性键合相、离子交换键合相三种第二节化学键合相填料新进展第二节化学键合相填料新进展发展方向：发展方向：发展方向：发展方向：提高填料的化学稳定性、热稳定性，以及提高填料的化学稳定性、热稳定性，以及提高填料的化学稳定性、热稳定性，以及提高填料的化学稳定性、热稳定性，以及改善选择性、提高分离度和适用性改善选择性、提高分离度和适用性改善选择性、提高分离度和适用性改善选择性、

6、提高分离度和适用性一、空间保护键合固定相一、空间保护键合固定相一、空间保护键合固定相一、空间保护键合固定相在在在在C18C18C18C18烷基的侧链引入较大官能团，阻碍硅羟基与分析烷基的侧链引入较大官能团，阻碍硅羟基与分析烷基的侧链引入较大官能团，阻碍硅羟基与分析烷基的侧链引入较大官能团，阻碍硅羟基与分析物的相互作用，如异丙基或异丁基取代物的相互作用，如异丙基或异丁基取代物的相互作用，如异丙基或异丁基取代物的相互作用，如异丙基或异丁基取代每个硅烷化试剂分子中每个硅烷化试剂分子中每个硅烷化试剂分子中每个硅烷化试剂分子中含有两个硅原子，每个含有两个硅原子，每个含有两个硅原子，每个含有两个硅原子，每

7、个硅原子含有一个长链硅硅原子含有一个长链硅硅原子含有一个长链硅硅原子含有一个长链硅烷基官能团，如烷基官能团，如烷基官能团，如烷基官能团，如AgilentAgilentAgilentAgilent公司的公司的公司的公司的ZorbaxZorbaxZorbaxZorbaxExtend-C18Extend-C18Extend-C18Extend-C18色谱柱，在色谱柱，在色谱柱，在色谱柱，在高流动相中稳定性极高流动相中稳定性极高流动相中稳定性极高流动相中稳定性极佳，适于分离游离的强佳，适于分离游离的强佳，适于分离游离的强佳，适于分离游离的强碱性化合物碱性化合物碱性化合物碱性化合物二、双齿键合固定相二、

8、双齿键合固定相解决利巴韦林等强水溶解决利巴韦林等强水溶解决利巴韦林等强水溶解决利巴韦林等强水溶性药物在反相柱中分析性药物在反相柱中分析性药物在反相柱中分析性药物在反相柱中分析的难题，内嵌极性官能的难题，内嵌极性官能的难题，内嵌极性官能的难题，内嵌极性官能团是改善固定相和水溶团是改善固定相和水溶团是改善固定相和水溶团是改善固定相和水溶液兼容能力的途径。液兼容能力的途径。液兼容能力的途径。液兼容能力的途径。1 1 1 1、1995199519951995年年年年WatersWatersWatersWaters公司推公司推公司推公司推出专利极性官能团嵌入出专利极性官能团嵌入出专利极性官能团嵌入出专利

9、极性官能团嵌入技术，如右图技术，如右图技术，如右图技术，如右图三、内嵌极性基团键合固定相三、内嵌极性基团键合固定相图图图图9-59-59-59-5内嵌极性官能团结构示意图内嵌极性官能团结构示意图内嵌极性官能团结构示意图内嵌极性官能团结构示意图水屏蔽层能够掩蔽解离水屏蔽层能够掩蔽解离水屏蔽层能够掩蔽解离水屏蔽层能够掩蔽解离后带负电的硅羟基，减后带负电的硅羟基，减后带负电的硅羟基，减后带负电的硅羟基，减少拖尾，另可降低脱水少拖尾，另可降低脱水少拖尾，另可降低脱水少拖尾，另可降低脱水现象，使填料和样品作现象，使填料和样品作现象，使填料和样品作现象，使填料和样品作用完全，在含水量高的用完全，在含水量高

10、的用完全，在含水量高的用完全，在含水量高的流动相中，样品也有稳流动相中，样品也有稳流动相中，样品也有稳流动相中，样品也有稳定保留和最佳峰形定保留和最佳峰形定保留和最佳峰形定保留和最佳峰形三、内嵌极性基团键合固定相三、内嵌极性基团键合固定相2 2、AgilentAgilentAgilentAgilent公司的公司的公司的公司的Zorbax Bonus-RPZorbax Bonus-RPZorbax Bonus-RPZorbax Bonus-RP色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱:内嵌酰胺内嵌酰胺内嵌酰胺内嵌酰胺基和三封端技术，基和三封端技术，基和三封端技术，基和三封端技术，图图图图9-89-89-89-8

11、3 3 3 3、内嵌磺胺基官、内嵌磺胺基官、内嵌磺胺基官、内嵌磺胺基官能团键合相，有更能团键合相，有更能团键合相，有更能团键合相，有更出色的水解稳定性出色的水解稳定性出色的水解稳定性出色的水解稳定性如图如图如图如图9-99-99-99-9（DionexDionexDionexDionex公司）公司）公司）公司）4 4、PhenomenexPhenomenexPhenomenexPhenomenex公公公公司的司的司的司的Synergi Synergi Synergi Synergi Fusion-RPFusion-RPFusion-RPFusion-RP色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱E E E E采

12、用极性嵌合及书采用极性嵌合及书采用极性嵌合及书采用极性嵌合及书疏水链来达到高选疏水链来达到高选疏水链来达到高选疏水链来达到高选择性的效果择性的效果择性的效果择性的效果1999199919991999年年年年WatersWatersWatersWaters公司公司公司公司发明了杂交颗粒发明了杂交颗粒发明了杂交颗粒发明了杂交颗粒技术，制成了技术，制成了技术，制成了技术，制成了XterraXterraXterraXterra色谱柱填料色谱柱填料色谱柱填料色谱柱填料具有分离效率高、具有分离效率高、具有分离效率高、具有分离效率高、峰形优良、范围峰形优良、范围峰形优良、范围峰形优良、范围宽、分析速度快，宽

13、、分析速度快，宽、分析速度快，宽、分析速度快，四、硅碳杂化硅胶四、硅碳杂化硅胶五、优化柱床设计五、优化柱床设计五、优化柱床设计五、优化柱床设计六、苯基丙胺键合固定相六、苯基丙胺键合固定相六、苯基丙胺键合固定相六、苯基丙胺键合固定相七、以氧化锆为基质的键七、以氧化锆为基质的键七、以氧化锆为基质的键七、以氧化锆为基质的键合固定相合固定相合固定相合固定相八、包覆型填料八、包覆型填料八、包覆型填料八、包覆型填料第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatogra

14、phy）一、疏溶剂作用理论一、疏溶剂作用理论一、疏溶剂作用理论一、疏溶剂作用理论影响溶质分子色谱保留的因素影响溶质分子色谱保留的因素溶质分子中的非极性部分总表面积对色谱保留溶质分子中的非极性部分总表面积对色谱保留溶质分子中的非极性部分总表面积对色谱保留溶质分子中的非极性部分总表面积对色谱保留值的影响。值的影响。值的影响。值的影响。键合相表面烷基的总表面积对色谱保留值的影键合相表面烷基的总表面积对色谱保留值的影键合相表面烷基的总表面积对色谱保留值的影键合相表面烷基的总表面积对色谱保留值的影响响响响 烷基的含碳量、键合相表面的含碳量对烷基的含碳量、键合相表面的含碳量对烷基的含碳量、键合相表面的含碳

15、量对烷基的含碳量、键合相表面的含碳量对色谱行为有重要影响色谱行为有重要影响色谱行为有重要影响色谱行为有重要影响洗脱液的表面张力对色谱保留值的影响洗脱液的表面张力对色谱保留值的影响洗脱液的表面张力对色谱保留值的影响洗脱液的表面张力对色谱保留值的影响第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）二、双保留机制二、双保留机制二、双保留机制二、双保留机制第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase

16、 non-polar bonded phase chromatographychromatography）三、非极性键合相色谱法的流动相的组成三、非极性键合相色谱法的流动相的组成三、非极性键合相色谱法的流动相的组成三、非极性键合相色谱法的流动相的组成基基基基本本本本要要要要求求求求:纯纯纯纯度度度度高高高高、沸沸沸沸点点点点适适适适中中中中、黏黏黏黏度度度度小小小小、化化化化学学学学稳稳稳稳定定定定性性性性好好好好、紫紫紫紫外外外外吸吸吸吸收收收收本本本本底底底底小小小小、对对对对样样样样品品品品有有有有较较较较宽宽宽宽的的的的溶溶溶溶解解解解范范范范围围围围、与所选的色谱系统相匹配与所选的色

17、谱系统相匹配与所选的色谱系统相匹配与所选的色谱系统相匹配混混混混合合合合溶溶溶溶剂剂剂剂的的的的黏黏黏黏度度度度一一一一般般般般高高高高于于于于纯纯纯纯溶溶溶溶剂剂剂剂的的的的黏黏黏黏度度度度，流流流流动动动动相相相相组组组组成成成成变变变变化化化化时时时时压压压压力力力力升升升升高高高高的的的的现现现现象象象象在在在在应应应应用用用用梯梯梯梯度度度度洗洗洗洗脱脱脱脱时时时时应应应应特特特特别别别别注注注注意意意意第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychrom

18、atography）三、非极性键合相色谱法的流动相的基本组成三、非极性键合相色谱法的流动相的基本组成三、非极性键合相色谱法的流动相的基本组成三、非极性键合相色谱法的流动相的基本组成1 1 1 1、一元溶剂系统：、一元溶剂系统：、一元溶剂系统：、一元溶剂系统：一般不采用纯水系统一般不采用纯水系统一般不采用纯水系统一般不采用纯水系统2 2 2 2、二二二二元元元元溶溶溶溶剂剂剂剂系系系系统统统统：一一一一般般般般采采采采用用用用洗洗洗洗脱脱脱脱能能能能力力力力较较较较弱弱弱弱的的的的水水水水作作作作为为为为底底底底剂剂剂剂，再再再再加加加加入入入入一一一一定定定定量量量量与与与与水水水水相相相相混

19、混混混溶溶溶溶的的的的有有有有机机机机溶溶溶溶剂剂剂剂作作作作为为为为调调调调节节节节剂剂剂剂，如如如如甲甲甲甲醇醇醇醇、乙乙乙乙腈腈腈腈，也可考虑四氢呋喃也可考虑四氢呋喃也可考虑四氢呋喃也可考虑四氢呋喃3 3 3 3、三三三三元元元元溶溶溶溶剂剂剂剂系系系系统统统统：在在在在二二二二元元元元溶溶溶溶剂剂剂剂系系系系统统统统基基基基础础础础上上上上添添添添加加加加四四四四氢氢氢氢呋呋呋呋喃喃喃喃、三三三三乙乙乙乙胺、离子对试剂、缓冲盐、醋酸、磷酸等胺、离子对试剂、缓冲盐、醋酸、磷酸等胺、离子对试剂、缓冲盐、醋酸、磷酸等胺、离子对试剂、缓冲盐、醋酸、磷酸等第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键

20、合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则原则原则原则原则解释解释解释解释首选溶剂首选溶剂首选溶剂首选溶剂非极性色谱首选溶剂为甲醇、乙腈、四氢呋喃，非极性色谱首选溶剂为甲醇、乙腈、四氢呋喃，非极性色谱首选溶剂为甲醇、乙腈、四氢呋喃，非极性色谱首选溶剂为甲醇、乙腈、四氢呋喃，底剂为水底剂为水底剂为水底剂为水多元溶剂多元溶

21、剂多元溶剂多元溶剂由不同组别的纯溶剂与底剂（或极性调节剂）组由不同组别的纯溶剂与底剂（或极性调节剂）组由不同组别的纯溶剂与底剂（或极性调节剂）组由不同组别的纯溶剂与底剂（或极性调节剂）组成，一般不同时使用两个相同组别的纯溶剂成，一般不同时使用两个相同组别的纯溶剂成，一般不同时使用两个相同组别的纯溶剂成，一般不同时使用两个相同组别的纯溶剂洗脱能力洗脱能力洗脱能力洗脱能力以重点组分的容量因子为以重点组分的容量因子为以重点组分的容量因子为以重点组分的容量因子为25252525作为溶剂系统洗脱作为溶剂系统洗脱作为溶剂系统洗脱作为溶剂系统洗脱能力的量度能力的量度能力的量度能力的量度替代溶剂替代溶剂替代溶

22、剂替代溶剂当不能达到分离要求时，可用相同洗脱能力的不当不能达到分离要求时，可用相同洗脱能力的不当不能达到分离要求时，可用相同洗脱能力的不当不能达到分离要求时，可用相同洗脱能力的不同溶剂系统代替原溶剂系统。同溶剂系统代替原溶剂系统。同溶剂系统代替原溶剂系统。同溶剂系统代替原溶剂系统。离子抑制离子抑制离子抑制离子抑制色谱色谱色谱色谱在色谱柱耐受范围内，可加入调节剂，抑制弱酸在色谱柱耐受范围内，可加入调节剂，抑制弱酸在色谱柱耐受范围内，可加入调节剂，抑制弱酸在色谱柱耐受范围内，可加入调节剂，抑制弱酸的解离或弱碱的质子化，增加其分配系数。的解离或弱碱的质子化，增加其分配系数。的解离或弱碱的质子化，增加

23、其分配系数。的解离或弱碱的质子化，增加其分配系数。第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析减小保留值减小保留值减小保留值减小保留值增加保留值增加保留值增加保留值增加保留值使用碳链较短的键合相

24、使用碳链较短的键合相使用碳链较短的键合相使用碳链较短的键合相C8C8C8C8、C4C4C4C4使用碳链较长的键合相使用碳链较长的键合相使用碳链较长的键合相使用碳链较长的键合相C18C18C18C18、使用极性低的流动相，增加使用极性低的流动相，增加使用极性低的流动相，增加使用极性低的流动相，增加有机溶剂的比例有机溶剂的比例有机溶剂的比例有机溶剂的比例使用极性大的流动相，增加使用极性大的流动相，增加使用极性大的流动相，增加使用极性大的流动相，增加流动相中水的比例流动相中水的比例流动相中水的比例流动相中水的比例提高色谱柱温度提高色谱柱温度提高色谱柱温度提高色谱柱温度提高色谱柱温度提高色谱柱温度提高

25、色谱柱温度提高色谱柱温度减小色谱柱长度减小色谱柱长度减小色谱柱长度减小色谱柱长度增加色谱柱长度增加色谱柱长度增加色谱柱长度增加色谱柱长度第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析1 1 1 1、改变有机溶剂的比例、改变有机溶剂的比例、改变有机溶剂的比例、改变有机溶剂的比例

26、筛选步骤：筛选步骤：筛选步骤：筛选步骤：100%100%乙腈乙腈80%80%乙腈乙腈60%60%乙腈乙腈40%40%乙腈乙腈第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析2 2 2 2、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型流动相的洗脱

27、强度与有机溶剂的类型有关如图：流动相的洗脱强度与有机溶剂的类型有关如图：流动相的洗脱强度与有机溶剂的类型有关如图：流动相的洗脱强度与有机溶剂的类型有关如图：第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物

28、的分析2 2 2 2、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型、改变有机溶剂的类型一般改变有机溶剂不会影响样品的出峰顺序，但也有特例如图：一般改变有机溶剂不会影响样品的出峰顺序，但也有特例如图：一般改变有机溶剂不会影响样品的出峰顺序，但也有特例如图：一般改变有机溶剂不会影响样品的出峰顺序，但也有特例如图：第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设

29、计原则（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析3 3 3 3、使用混合有机溶剂：、使用混合有机溶剂：、使用混合有机溶剂：、使用混合有机溶剂：在二元系统不能分离时采用如图在二元系统不能分离时采用如图在二元系统不能分离时采用如图在二元系统不能分离时采用如图第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（一）中性化合物的

30、分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析（一）中性化合物的分析3 3 3 3、使用混合有机溶剂、使用混合有机溶剂、使用混合有机溶剂、使用混合有机溶剂采用下图方法设计实验分离样品采用下图方法设计实验分离样品采用下图方法设计实验分离样品采用下图方法设计实验分离样品例：取代萘的溶剂选择性实验，如图例：取代萘的溶剂选择性实验，如图例：取代萘的溶剂选择性实验，如图例：取代萘的溶剂选择性实验，如图第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四

31、、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：与中性化合物分析相似，区别是加入与中性化合物分析相似，区别是加入与中性化合物分析相似，区别是加入与中性化合物分析相似，区别是加入pHpHpHpH值调节剂和缓冲盐。值调节剂和缓冲盐。值调节剂和缓冲盐。值调节剂和缓冲盐。pHpHpHpH值的选择：目的是调节流动相的值的选择：目的是调节流动相的值的选择：

32、目的是调节流动相的值的选择：目的是调节流动相的pHpHpHpH值或利用同离子效值或利用同离子效值或利用同离子效值或利用同离子效应，抑制样品组分的解离，增加其在固定相中的溶解度，应，抑制样品组分的解离，增加其在固定相中的溶解度，应，抑制样品组分的解离，增加其在固定相中的溶解度，应，抑制样品组分的解离，增加其在固定相中的溶解度，达到分离有机弱酸弱碱的目的，称为离子抑制色谱（达到分离有机弱酸弱碱的目的，称为离子抑制色谱（达到分离有机弱酸弱碱的目的，称为离子抑制色谱（达到分离有机弱酸弱碱的目的，称为离子抑制色谱（ISCISCISCISC）适于分析的适于分析的适于分析的适于分析的3.03.03.03.0

33、pKapKapKapKa7.07.07.07.0弱酸弱酸弱酸弱酸，7.07.07.07.0pKbpKbpKbpKb8.08.08.08.0弱碱或两性化合物弱碱或两性化合物弱碱或两性化合物弱碱或两性化合物流动相对反相保留的影响与样品类型（酸、流动相对反相保留的影响与样品类型（酸、碱、中性）的关系，如图碱、中性）的关系，如图表表表表 酸性、碱性官能团的酸性、碱性官能团的酸性、碱性官能团的酸性、碱性官能团的pKapKapKapKa值值值值取代基取代基取代基取代基pKapKapKapKa酸性酸性酸性酸性碱性碱性碱性碱性酯基取代酯基取代酯基取代酯基取代芳环取代芳环取代芳环取代芳环取代酯基取代酯基取代酯基

34、取代酯基取代芳环取代芳环取代芳环取代芳环取代磺酸磺酸磺酸磺酸,-SO,-SO,-SO,-SO3 3 3 3H H H H1 11 1氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸2424912912羧酸羧酸羧酸羧酸-COOH-COOH-COOH-COOH45454545硫醇硫醇硫醇硫醇,-SH,-SH,-SH,-SH101110116767嘌呤嘌呤嘌呤嘌呤24249 9酚酚酚酚,-OH,-OH,-OH,-OH10121012吡嗪吡嗪吡嗪吡嗪1 1亚砜亚砜亚砜亚砜,-SO,-SO,-SO,-SO1212噻唑噻唑噻唑噻唑1313胺，吡啶胺，吡啶胺，吡啶胺，吡啶8118115 5咪唑咪唑咪唑咪唑7 7哌嗪哌嗪哌嗪哌嗪10

35、10第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：缓冲盐的选择：目的是维持组分在色谱柱的内的平缓冲盐的选择：目的是维持组分在色谱柱的内的平衡，得到较好的重现性。要求：衡，得到较好的重现性。要求：应具有适当的缓冲容量应具有

36、适当的缓冲容量缓冲溶液浓度应适当，一般为缓冲溶液浓度应适当，一般为101050mmol/L50mmol/L与色谱系统相匹配，注意缓冲剂的截止波长与色谱系统相匹配，注意缓冲剂的截止波长缓冲液的挥发性，应尽量选择挥发性缓冲盐缓冲液的挥发性，应尽量选择挥发性缓冲盐第三节第三节 非极性键合相色谱法非极性键合相色谱法（non-polar bonded phase non-polar bonded phase chromatographychromatography）四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则四、非极性键合相色谱法的流动相的设计原则（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化

37、合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：（二）酸性化合物和碱性化合物的分析：胺类添加剂：在分析碱性化合物时抑制拖尾现象胺类添加剂：在分析碱性化合物时抑制拖尾现象建立建立建立建立酸性酸性酸性酸性和碱和碱和碱和碱性样性样性样性样品分品分品分品分析方析方析方析方法的法的法的法的步骤步骤步骤步骤图示图示图示图示分析酸性和碱性药物时的常见问题及方法分析酸性和碱性药物时的常见问题及方法分析碱性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析碱性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析碱性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析碱性药物时会遇见的常见问题及解决方法常见问题常见问题常见问题常见问题原因原因原因原因解决方法

38、解决方法解决方法解决方法色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或不出峰不出峰不出峰不出峰亲醇基效应所致亲醇基效应所致亲醇基效应所致亲醇基效应所致流动相中加入小分子流动相中加入小分子流动相中加入小分子流动相中加入小分子有机胺有机胺有机胺有机胺使用离子对技术使用离子对技术使用离子对技术使用离子对技术添加缓冲液添加缓冲液添加缓冲液添加缓冲液色谱峰裂分或色谱峰裂分或色谱峰裂分或色谱峰裂分或多重峰多重峰多重峰多重峰进样后游离药物与质子进样后游离药物与质子进样后游离药物与质子进样后游离药物与质子化的药物在流动相中重化的药物在流动相中重化的药物在流动相中重化的药物在流动相中重新平衡所致新平衡所致新平

39、衡所致新平衡所致流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样调整进样溶液的调整进样溶液的调整进样溶液的调整进样溶液的pHpHpHpH值值值值分析酸性和碱性药物时的常见问题及方法分析酸性和碱性药物时的常见问题及方法分析酸性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析酸性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析酸性药物时会遇见的常见问题及解决方法分析酸性药物时会遇见的常见问题及解决方法常见问题常见问题常见问题常见问题原因原因原因原因解决方法解决方法解决方法解决方法色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或色谱峰拖尾或不出峰不出峰不出峰不出峰待测物质离子化所致待测物质离子化所致待测物质离子

40、化所致待测物质离子化所致调整流动相调整流动相调整流动相调整流动相pHpHpHpH值至酸性值至酸性值至酸性值至酸性加入酸性缓冲液进行离加入酸性缓冲液进行离加入酸性缓冲液进行离加入酸性缓冲液进行离子抑制子抑制子抑制子抑制色谱峰裂分或色谱峰裂分或色谱峰裂分或色谱峰裂分或多重峰多重峰多重峰多重峰二次化学平衡所致二次化学平衡所致二次化学平衡所致二次化学平衡所致流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样流动相溶样后再进样调整进样溶液的调整进样溶液的调整进样溶液的调整进样溶液的pHpHpHpH值值值值第四节第四节 极性键合相色谱法极性键合相色谱法（polar bonded phase chrom

41、atographypolar bonded phase chromatography）极性键合色谱法的特性极性键合色谱法的特性极性键合色谱法的特性极性键合色谱法的特性优点优点优点优点缺点缺点缺点缺点使用非水流动相时，色使用非水流动相时，色使用非水流动相时，色使用非水流动相时，色谱柱稳定谱柱稳定谱柱稳定谱柱稳定可改变流动相或色谱柱可改变流动相或色谱柱可改变流动相或色谱柱可改变流动相或色谱柱来改变分离选择性来改变分离选择性来改变分离选择性来改变分离选择性特别适用于在水溶液中特别适用于在水溶液中特别适用于在水溶液中特别适用于在水溶液中易降解的化合物易降解的化合物易降解的化合物易降解的化合物溶剂黏度低

42、，柱压低溶剂黏度低，柱压低溶剂黏度低，柱压低溶剂黏度低，柱压低有机谷物多溶于正相色有机谷物多溶于正相色有机谷物多溶于正相色有机谷物多溶于正相色谱的溶剂，适于制备液相谱的溶剂，适于制备液相谱的溶剂，适于制备液相谱的溶剂，适于制备液相离子型样品适于非极性色谱离子型样品适于非极性色谱离子型样品适于非极性色谱离子型样品适于非极性色谱不易控制溶剂强度不易控制溶剂强度不易控制溶剂强度不易控制溶剂强度有时柱效较非极性色谱低有时柱效较非极性色谱低有时柱效较非极性色谱低有时柱效较非极性色谱低低沸点溶剂易挥发或产生气泡低沸点溶剂易挥发或产生气泡低沸点溶剂易挥发或产生气泡低沸点溶剂易挥发或产生气泡吸附水使样品保留不

43、稳定，有吸附水使样品保留不稳定，有吸附水使样品保留不稳定，有吸附水使样品保留不稳定，有时不能采用梯度洗脱时不能采用梯度洗脱时不能采用梯度洗脱时不能采用梯度洗脱有机溶剂的处理成本高有机溶剂的处理成本高有机溶剂的处理成本高有机溶剂的处理成本高第四节第四节 极性键合相色谱法极性键合相色谱法（polar bonded phase chromatographypolar bonded phase chromatography）极性键合色谱相表面的基团组成：键型、主体基团和极性键合色谱相表面的基团组成：键型、主体基团和极性键合色谱相表面的基团组成：键型、主体基团和极性键合色谱相表面的基团组成：键型、主体基团和极性端基，如图极性端基，如图极性端基，如图极性端基，如图第五节第五节 离子交换键合相色谱法离子交换键合相色谱法（ion exchange chromatography,IECion exchange chromatography,IEC）以离子交换剂为固定相以离子交换剂为固定相,以缓冲液为流动相以缓冲液为流动相,借助试借助试样中电离组分对离子交换剂亲和力的不同而达到分样中电离组分对离子交换剂亲和力的不同而达到分离离子型或可离子化的化合物的目的的方法离离子型或可离子化的化合物的目的的方法谢谢各位！谢谢各位！