药物分析 第十四章 维生素类药物的分析.ppt

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1、第十四章第十四章维生素类药物的分析维生素类药物的分析 概概 述述 维生素维持正常生理功能所必需的、维生素维持正常生理功能所必需的、微量营养微量营养物质，人体不能合成维生素。物质，人体不能合成维生素。必须从外界食物中摄必须从外界食物中摄取。取。维生素的发现是维生素的发现是维生素的发现是维生素的发现是20202020世纪的伟大世纪的伟大世纪的伟大世纪的伟大发现之一。发现之一。发现之一。发现之一。1897189718971897年年年年,C,C,C,C.艾克曼在爪艾克曼在爪艾克曼在爪艾克曼在爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚气哇发现只吃精磨的白米即可患脚气哇发现只吃精磨的白米即可患脚气哇发现只吃精磨的白

2、米即可患脚气病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。并发现可治脚气病的物质能用水或并发现可治脚气病的物质能用水或并发现可治脚气病的物质能用水或并发现可治脚气病的物质能用水或酒精提取酒精提取酒精提取酒精提取,当时称这种物质为当时称这种物质为当时称这种物质为当时称这种物质为“水水水水溶性溶性溶性溶性B B B B”。Christiaan Eijkman1929 诺贝尔生物医学奖诺贝尔生物医学奖The Discovery of Vitamin发现简史发现简史必需维生素必需维生素 13种种 维生素维生素维生素维生素

3、A A，维生素，维生素，维生素，维生素B B，维生素，维生素，维生素，维生素C C，维生素，维生素，维生素，维生素D D，维生素，维生素，维生素，维生素E E，维生素，维生素，维生素，维生素K K，维生素，维生素，维生素，维生素H H（生物素）（生物素）（生物素）（生物素），维生素，维生素，维生素，维生素P P，维生素，维生素，维生素，维生素PPPP，维生素，维生素，维生素，维生素MM，维生，维生，维生，维生素素素素T T，维生素，维生素，维生素，维生素U U，水溶性维生素。，水溶性维生素。，水溶性维生素。，水溶性维生素。分类分类AB1CDEVitaminsVitaminsContents第一

4、节第一节 维生素维生素A的分析的分析全反式全反式全反式全反式第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析结构结构共轭多烯醇侧链的环己烯共轭多烯醇侧链的环己烯黄色棱形，黄色棱形，62-64 淡黄色棱形，淡黄色棱形，57-58无定型，无定型，28-29去氢维生素去氢维生素VitA2去水维生素去水维生素VitA3易发生脱氢、脱水、聚合反应易发生脱氢、脱水、聚合反应第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 溶解性溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。中不溶。不稳定性：不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定

5、，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被含有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析性质性质紫外吸收：紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm325-328nm之间有最大吸之间有最大吸收，可用于鉴别。收，可用于鉴别。第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析maxmax 相对生物效价相对生物效价顺反异构顺反异构维维生素生素A325.5100%全反式全反式新新维维生素生素Aa32875%2顺顺新新

6、维维生素生素Ab320.524%4顺顺新新维维生素生素Ac310.515%2，4顺顺异异维维生素生素Aa32321%6顺顺异异维维生素生素Ab32424%2，6顺顺第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析v天然维生素天然维生素A主要是反式主要是反式CHCl3可用于鉴别和含量测定可用于鉴别和含量测定 与三氯化锑呈色与三氯化锑呈色:三氯甲烷三氯甲烷+三氯化锑三氯化锑=不稳定的蓝色不稳定的蓝色与三氯化锑呈色反应与三氯化锑呈色反应第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析鉴别实验鉴别实验Vit ASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色（一）（一）Carr-Price反应反应蓝色蓝色紫红紫红第一节第一

7、节 维生素维生素A的分析的分析条件：条件：无水、无醇无水、无醇SbCl3水水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失乙醇可使碳正离子的正电荷消失第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析要求仪器和试剂必须干燥无水，要求仪器和试剂必须干燥无水，三氯甲烷必须无醇三氯甲烷必须无醇第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析max为为326nm一个吸收峰一个吸收峰max为为350390nm三个吸收峰三个吸收峰五个共轭双键五个共轭双键六个共轭双键六个共轭双键最大吸收峰红移最大吸收峰红移（二）（二）UV法法第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析USP 显色剂显色剂 磷钼酸

8、磷钼酸 规定斑点颜色和规定斑点颜色和Rf值值BP 对照品法对照品法 显色剂显色剂 三氯化锑三氯化锑（三）（三）TLC法法第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析展开剂：展开剂：环己烷环己烷-乙醚（乙醚（80：20）均显蓝色斑点，维生素醇（均显蓝色斑点，维生素醇（Rf=0.1）维生素醋酸酯（维生素醋酸酯（Rf=0.45）维生素棕榈酸酯（维生素棕榈酸酯（Rf=0.7）酸值 取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大于2.0（附录VIIH）杂质检查杂质检查过

9、氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5ml。杂质检查杂质检查第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析含量测定含量测定（一）（一）UV法（三点校正法）法（三点校正法）第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析维维生素生素A在在325328nm的波的波长长范范围围内有最大吸收，可用紫外内有最大吸收，可用紫外法法进进行含量行含量测测定但定但维维生素生素A原料

10、常混有原料常混有杂质杂质如：如：第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 维维生素生素A的氧化的氧化产产物物第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 维维生素生素A在光照下在光照下产产生的无活性的聚合物生的无活性的聚合物第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析测定对象：测定对象：VitA醋酸酯时，醋酸酯时，ChP2015规定规定第一法第一法 等波长差法等波长差法第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第二法第二法 等吸收比法等吸收比法测定对象：测定对象：VitA醇时，醇时，ChP2015规定规定第一节第一节 维生素

11、维生素A的分析的分析合成的或天然的合成的或天然的合成的或天然的合成的或天然的维维维维生素生素生素生素A A 均均均均为酯为酯为酯为酯式式式式维维维维生素生素生素生素A A，根据供，根据供，根据供，根据供试试试试品中干品中干品中干品中干扰杂质扰杂质扰杂质扰杂质的多少，可采用：的多少，可采用：的多少，可采用：的多少，可采用：（1 1）直接）直接）直接）直接测测测测定法定法定法定法 （2 2）皂化法）皂化法）皂化法）皂化法 第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析求求求效价求效价（1）基本步骤）基本步骤4.测定方法测定方法A选择，选择，A328测定或测定或A328校正校正求标示百分含量求标示百分含量

12、（1）第一法（直接）第一法（直接测测定法，适用于定法，适用于纯纯度高的度高的维维生素生素A醋酸醋酸酯酯的的测测定定）1）方法）方法 取取样样品适量，精密称定，加品适量，精密称定，加环环己己烷烷溶解溶解在在300、316、328、340、360nm测测吸收度，以确定最吸收度，以确定最大吸收波大吸收波长长（A328或或A328校正校正）。）。第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析b.判断法判断法 最大吸收波最大吸收波长长在在326-329nm之之间间，且，且5个波个波长长下的下的绝对值绝对值差差值值均不超均不超过过0.02时时，可直接用，可直接用328nm波波长处长处的的测测得的吸得的吸收度收度

13、值值求得吸收系数。求得吸收系数。a.计计算吸收度比算吸收度比值值（Ai/A328）：与中国）：与中国药药典的吸收度比典的吸收度比值值相相比比较较，判断每个差，判断每个差值值的的绝对值绝对值是否超是否超过过0.02。第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析最大吸收波最大吸收波长长在在326-329nm之之间间，计计算算5个波个波长长下的下的绝对绝对差差值值，如果有一个或几个超，如果有一个或几个超过过0.02，应应按以下的方法按以下的方法进进行判断：行判断：A328校正校正=3.52（2 A328 A316-A340）第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析（1）第一法（直接）第一法（直接测测定法

14、，适用于定法，适用于纯纯度高的度高的维维生素生素A醋酸醋酸酯酯的的测测定定）1）方法）方法 取取样样品适量，精密称定，加品适量，精密称定，加环环己己烷烷溶解溶解在在300、316、328、340、360nm测测吸收度，吸收度，确定确定A2）计计算算 a.吸光系数吸光系数E1%1cm第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 b.求效价（求效价（IU/g）：效价指每）：效价指每g供供试试品所含品所含维维生素生素的的A的国的国际单际单位数。位数。第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析1IU=0.344g全反式维生素全反式维生素A醋酸酯醋酸酯 IU/g=第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析每克纯

15、品相当多少个单位（每克纯品相当多少个单位（IU）?1IU=0.344g全反式维生素全反式维生素A醋酸酯醋酸酯第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析c.求求维维生素生素A占占标标示量的百分含量示量的百分含量AA328或或A328校正校正D供供试试品的稀品的稀释释倍数倍数换换算因子算因子维维生素生素A醋酸醋酸酯酯在在环环己己烷烷中中1900；维维生素生素A醇在异丙醇中醇在异丙醇中1830W为为平均内容物重量；平均内容物重量；W为为称取内容物重量（供称取内容物重量（供试试品取用量）品取用量）L 比色池厚度比色池厚度标标示量示量为处为处方中方中规规定的每粒中所

16、含的国定的每粒中所含的国际单际单位数位数第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 VitAD胶丸中胶丸中VitA的含量测定的含量测定 精密称取本品精密称取本品(规规格格10000VitAIU/丸丸)装量差异装量差异项项下（平均装量下（平均装量0.08262g/丸）的内容物丸）的内容物 0.2399g 至至250ml量瓶中，用量瓶中，用环环己己烷烷稀稀释释至刻度，至刻度，摇摇匀；精密匀；精密量取量取2.0ml，置另一，置另一20 ml量瓶中，用量瓶中，用环环己己烷烷稀稀释释至至刻度，刻度，摇摇匀。以匀。以环环己己烷为烷为空白，空白，测测定最大吸收波定最大吸收波长长为为328nm，并在下列波，并在

17、下列波长处测长处测得吸收度得吸收度为为第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300/A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 求本品中维生素求本品中维生素A的含量的含量？第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析A300/A328 ：0.564A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.

18、555 0.907 1.000 0.811 0.299 +0.010.01 0+0.02+0.04=第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析适用于维生素适用于维生素A醇醇（等吸收比法）第一法无法消除杂质干扰时用此法第一法无法消除杂质干扰时用此法 皂化法、皂化法、6/7A法法（2）第二法）第二法第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析水溶性水溶性脂溶性脂溶性第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析 判断判断 max是否在是否在323327nm之间之间取未皂化样品采用取未皂化样品采用色谱法纯化后再测色谱法纯化后再测定定 计算计算是是否否第一节第一节 维生素维

19、生素A的分析的分析 判断判断 A300/A325 是否大于是否大于0.73是是否否取未皂化样品采用色谱取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定法纯化后再测定 计算计算A325(校正校正)03%3%f第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析高效液相色谱法高效液相色谱法流动相：正己烷异丙醇（流动相：正己烷异丙醇（9973）检测波长：检测波长：325nm系统适用性实验考察分离度系统适用性实验考察分离度是否能将维生素是否能将维生素A醋酸酯顺式和反式分开醋酸酯顺式和反式分开第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析三氯化锑比色法三氯化锑比色法max 618nm620nm标准曲线法标准曲线法第一节第一节 维生素维

20、生素A的分析的分析缺点：缺点：呈色不稳定呈色不稳定（5 10s内）内）水分干扰水分干扰与标准曲线温差与标准曲线温差1专属性差专属性差三氯化锑有腐蚀性三氯化锑有腐蚀性优点：优点：简便简便 快速快速第一节第一节 维生素维生素A的分析的分析小结小结维维生素生素A共共轭轭多多烯烯醇醇侧链侧链的的环环乙乙烯烯性性质质：脂溶性；不：脂溶性；不稳稳定，可与三定，可与三氯氯化化锑锑呈色呈色鉴别鉴别：三：三氯氯化化锑锑反反应应；UV；TLC含量含量测测定：定：紫外紫外-分光光度法（三点校正）分光光度法（三点校正）三三氯氯化化锑锑比色法比色法AB1CDEVitaminsVitaminsContents 维生素维生

21、素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。第一节第一节 维生素维生素B1的分析的分析氯氯化化4-甲基甲基-3(2-甲基甲基-4-氨基氨基-5-嘧啶嘧啶基基)甲基甲基-5-（2-羟羟基乙基）基乙基）噻唑鎓盐噻唑鎓盐酸酸盐盐结构与性质结构与性质维生素维生素B1（盐酸硫胺）（盐酸硫胺）第二节第二节 维生素维生素B1的分析的分析结构与性质结构与性质维维生素生素B1为为白色白色结结晶或晶或结结晶

22、性粉末晶性粉末易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚醚水溶液呈酸性水溶液呈酸性1.溶解性溶解性性质性质噻唑环、嘧啶环共轭双键噻唑环、嘧啶环共轭双键12.5g/ml盐酸溶液（盐酸溶液（9 1000）max=246nm2.硫色素荧光反应硫色素荧光反应3.UV杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，杂原子的反应，能与某些生物碱沉淀试剂反应，生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。生成组成恒定的沉淀，可用于鉴别和含量测定。4.与生物碱沉淀试剂反应与生物碱沉淀试剂反应5.氯化物的特性氯化物的特性与与NaOH共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑共热，形成硫化钠，硝酸铅生成黑色沉淀；色

23、沉淀；6.硫元素反应硫元素反应7.红外光谱特征红外光谱特征二、鉴别试验（一）硫色素荧光反应为维生素B1所特有NaOHH2O环合O2H硫色素Thiochtome溶于丁醇，显蓝色荧光维生素维生素B1VitB1H+H+H+沉淀反应沉淀反应H+S元素反应元素反应Cl-反应反应硫元素反应和氯化物反应硫元素反应和氯化物反应H+Company Logo三、含量测定三、含量测定高氯酸滴定液（高氯酸滴定液（0.1mol/L）的滴定度）的滴定度(T)为为16.86mg/ml。喹那啶红亚甲蓝喹那啶红亚甲蓝(紫红紫红天蓝天蓝)非水溶液滴定法非水溶液滴定法非水溶液滴定法非水溶液滴定法紫外分光光度法紫外分光光度法维维生素

24、生素B1分子中具有共分子中具有共轭轭双双键键，在紫外区有吸收，在紫外区有吸收10.1MHCl2H203H3PO4buffer4alcohol246232255注意注意维维生素生素B1片的片的测测定定片剂、注射剂片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量的（每片）相当于标示量的%=A=ECLChP11 标示量标示量%WEA%cm 100D 100平均片重平均片重（每（每ml）相当于标示量的）相当于标示量的 标示量标示量%VEA%cm 100D 100NaOH硫色素荧光法：维生素硫色素荧光法：维生素B1的专属性反应的专属性反应原理原理1、2.方法VitB1铁氰化钾NaOH硫色素异丁醇荧光ex-365

25、nmem-435nm+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇对照液+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇供试液SdAb特点特点3、小结小结维维维维生素生素生素生素B B1 1（盐盐盐盐酸硫胺）酸硫胺）酸硫胺）酸硫胺）氨基氨基氨基氨基嘧啶环嘧啶环嘧啶环嘧啶环和和和和噻唑环噻唑环噻唑环噻唑环通通通通过过过过亚亚亚亚甲基甲基甲基甲基连连连连接而成季接而成季接而成季接而成季铵盐铵盐铵盐铵盐。性性性性质质质质：水溶性；硫色素反：水溶性；硫色素反：水溶性；硫色素反：水溶性；硫色素反应应应应；可与生物碱沉淀；可与生物碱沉淀；可与生物碱沉淀；可与生物碱沉淀剂剂剂剂反反反反应应应应鉴别鉴别鉴别鉴别

26、：硫色素反：硫色素反：硫色素反：硫色素反应应应应；沉淀反；沉淀反；沉淀反；沉淀反应应应应；ClCl、S S反反反反应应应应含量含量含量含量测测测测定：非水滴定；紫外分光光度法；定：非水滴定；紫外分光光度法；定：非水滴定；紫外分光光度法；定：非水滴定；紫外分光光度法；硫色素硫色素硫色素硫色素荧荧荧荧光法光法光法光法AB1CDEVitaminsVitaminsContents第三节第三节 维生素维生素C的分析的分析维维生素生素C是胶原蛋白形成所必需的，是胶原蛋白形成所必需的，有助于保持有助于保持间质间质的完整，的完整，维维生素生素C 缺乏可缺乏可导导致致齿龈肿胀齿龈肿胀，出血，皮下瘀点，关，出血，

27、皮下瘀点，关节节及及肌肉疼痛，毛囊角化，肌肉疼痛，毛囊角化，严严重缺乏可引起坏重缺乏可引起坏血病。所以血病。所以维维生素生素C又称又称为为抗坏血酸。抗坏血酸。L-抗坏血酸(有生物活性)L-二酮古罗糖酸L-去氢抗坏血酸无生物活性第三节第三节 维生素维生素C的分析的分析结构与性质结构与性质C3OH的的pKa=4.17C2OH的的pKa=11.572.酸性酸性一元酸一元酸性质性质1.溶解性溶解性易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶易溶于水，水中呈酸性；略溶于乙醇，不溶于三氯甲烷或乙醚于三氯甲烷或乙醚L(+)抗坏血酸抗坏血酸活性最强活性最强比旋度比旋度+20.5+21.5手性手性C（C4、C5）3.

28、旋光性旋光性*含有四个光学异构体含有四个光学异构体有活性有活性有活性有活性无活性无活性4.还原性还原性二烯醇结构二烯醇结构与碱反应与碱反应5.水解反应水解反应弱碱中生成单钠盐，弱碱中生成单钠盐，强碱中水解强碱中水解糖类的显色反应糖类的显色反应50结构与糖类相似结构与糖类相似6.具糖的性质具糖的性质五碳糖五碳糖维生素维生素C7.UV特征特征维维生素生素C具有共具有共轭轭双双键键利用还原性：与氧化剂的反应利用还原性：与氧化剂的反应鉴别试验鉴别试验（一）与（一）与AgNO3反应反应去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸黑色黑色（二）与（二）与2，6-二氯靛酚反应二氯靛酚反应氧化型氧化型玫瑰红色玫瑰红色（酸性）（酸

29、性）还原型还原型蓝色蓝色(碱性碱性)无色无色与碱性酒石酸铜反应与碱性酒石酸铜反应与与KMnO4反应反应（三）与其他氧化剂反应（三）与其他氧化剂反应砖红色沉淀砖红色沉淀试剂褪色试剂褪色磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝与磷钼酸反应与磷钼酸反应（四）薄层色谱法（四）薄层色谱法（五）糖类反应（五）糖类反应H2O-CO2戊糖-3H2O糠醛50蓝色维维生素生素C可在三可在三氯氯醋酸或醋酸或盐盐酸存在下水解、脱酸存在下水解、脱羧羧、生成戊糖，、生成戊糖，再失水，再失水，转转化化为为糠糠醛醛，加入吡咯，加，加入吡咯，加热热至至50 产产生生蓝蓝色色0.01mol/L HCl（五）紫外光谱法（五）紫外光谱法BP2010杂

30、质检查杂质检查（一）溶液的澄清度与颜色检查（一）溶液的澄清度与颜色检查内酯环水解内酯环水解糠醛缩合呈色糠醛缩合呈色高于或低于高于或低于空气、光线、温度空气、光线、温度维生素维生素C C脱羧脱羧控制有色杂质控制有色杂质维生素维生素C（二）铁、铜离子（二）铁、铜离子（三）草酸的检查（三）草酸的检查p草酸与金属离子作用形成沉淀；所以草酸与金属离子作用形成沉淀；所以对对Vc的原的原料，尤其是注射液，要料，尤其是注射液，要进进行草酸行草酸检查检查；p加入加入CaCl2，比，比浊浊法；法；原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法（二）铁、铜离子（二）铁、铜离子原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法四、含量测定四

31、、含量测定维维生素生素C维维生素生素C制制剂剂碘量法碘量法二氯靛酚法二氯靛酚法紫外分光光度法紫外分光光度法高效液相色谱法高效液相色谱法指示剂指示剂 淀粉指示液淀粉指示液（一）碘量法（一）碘量法原理：利用原理：利用Vc强的还原性强的还原性HAc 取本品约取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷，精密称定，加新沸过的冷水水100ml与稀醋酸与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶）滴定，至溶液显蓝色，在液显蓝色，在30秒内不褪。每秒内不褪。每1ml碘滴定液碘滴定液(0.05mol/L)相当于相当于8.806mg

32、的的C6H8O6。2、方法、方法原料药原料药（2）酸性环境）酸性环境 稀醋酸稀醋酸 （1）新沸冷新沸冷H2O减慢减慢VitC被被O2氧化速度氧化速度（3）立即滴定）立即滴定 赶走水中赶走水中O2，减少减少O2的干扰的干扰3、注意事项、注意事项（4）附加剂干扰的排除）附加剂干扰的排除片剂片剂 过滤过滤注射剂注射剂 抗氧剂抗氧剂 丙酮丙酮甲醛甲醛Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5（二）（二）2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法快速滴定，专属性强，用于含快速滴定，专属性强，用于含Vit CVit C的制剂与食品分析的制剂与食品分析自身指示终点自身指示终点1.原理原理2.方法方

33、法（2）快速滴定）快速滴定 2min内内 （1）酸性环境）酸性环境 HPO3-HAc 稳定稳定VitC防止其他还原性物质干扰防止其他还原性物质干扰（3）亦可剩余比色测定）亦可剩余比色测定 （定量过量）（定量过量）（测剩余染料）（测剩余染料）3.注意事项注意事项（4）二氯靛酚不稳定，须临用前配制并标定）二氯靛酚不稳定，须临用前配制并标定专属性强，多用于含专属性强，多用于含 Vc的制剂和食品的分析的制剂和食品的分析配制方法：配制方法：NaHCO3 42mg+水水50 ml，加二，加二氯氯靛靛酚酚钠钠二水合物二水合物0.5g+水水200 ml,过滤过滤，即得。，即得。标标定方法：用干燥的定方法：用干

34、燥的维维生素生素C对对照品照品进进行行标标定定（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法人血浆中人血浆中VitC浓度的浓度的HPLC法测定法测定小结小结维维生素生素C（L抗坏血酸）抗坏血酸）烯烯二醇二醇结结构构性性质质：水溶性；酸性；旋光性；：水溶性；酸性；旋光性；还还原性；水解性原性；水解性 糖糖类类性性质质；紫外吸收特性；紫外吸收特性鉴别鉴别：硝酸：硝酸银银反反应应；二；二氯氯靛酚靛酚钠钠反反应应；氧化反氧化反应应；TLC；糖；糖类类反反应应；紫外；紫外杂质检查杂质检查：澄清度与：澄清度与颜颜色色检查检查 铁铁、铜铜离子离子检查检查 草酸草酸检查检查含量含量测测定：碘量法；二定：碘量法；二氯

35、氯靛酚滴定法；靛酚滴定法；高效液相色高效液相色谱谱 AB1CDEVitaminsVitaminsContentsvSunlightvFoodsvFortified MilkvFish Oilsv佝偻病佝偻病v牙齿松动v鸡胸v骨质疏松v脚成弓形v促进钙、磷的吸收；v促进骨骼和牙齿的正常生长；v调节柠檬酸的代谢第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析胆甾醇7-脱氢胆甾醇维生素 D3(胆骨化醇)维生素 D2(麦角骨化醇)麦角甾醇 维维生素生素D是一是一类类抗佝抗佝偻偻病病维维生素的生素的总总称，目前有称，目前有10多种，都是甾醇衍生物。多种，都是甾醇衍生物。维生素维生素D2 维生素维生素D3第四

36、节第四节 维生素维生素D D的分析的分析维生素维生素D2、D3无色针状结晶或白色结晶性粉末；无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。无臭，无味；遇光或空气均易变质。溶解性溶解性:维生素维生素D2在三氯甲烷中极易溶解在三氯甲烷中极易溶解,在丙酮乙醇乙醚在丙酮乙醇乙醚中易溶；维生素中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚极易溶解；在乙醇、丙酮、三氯甲烷或乙醚极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。二者均在植物油中略溶，在水中不溶。不稳定性不稳定性:毒性增强毒性增强.含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧含有多个烯键，所以极不稳定，宜氧化变质，效价降低，毒性增强。化变质，效

37、价降低，毒性增强。第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析旋光性旋光性:有五到六个手性碳原子有五到六个手性碳原子,均具有旋光性均具有旋光性.维生素维生素D2 6个手性碳原子个手性碳原子 维生素维生素D3 5个手性碳原子个手性碳原子 第四节第四节 维生素维生素D D的分析的分析显色反应显色反应 甾类化合物甾类化合物氯仿溶液氯仿溶液 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色紫外吸收特性紫外吸收特性 无水乙醇无水乙醇 265nm 265nm 维生素维生素D D2 2 为为460460490490 维生素维生素D D3 3 为为465465495495醋酐醋酐硫酸硫酸E1cm1%E1%1cm二、鉴别

38、试验二、鉴别试验（一）显色反应（一）显色反应1 1与醋酐与醋酐-浓硫酸反应浓硫酸反应 氯仿溶液氯仿溶液 黄色黄色 红色红色 紫色紫色 绿色绿色醋酐醋酐硫酸硫酸2 2与三氯化锑反应与三氯化锑反应 本品本品1,2-1,2-二氯乙烷二氯乙烷 三氯化锑试液三氯化锑试液 橙红色橙红色 粉红色粉红色 3 3其它显色反应其它显色反应 维生素维生素D D 三氯化铁三氯化铁 橙黄色橙黄色 二氯丙醇二氯丙醇 乙酰氯乙酰氯 绿色绿色 （二）比旋度鉴别（二）比旋度鉴别无水乙醇溶液无水乙醇溶液 维生素维生素D D2 2 比旋度为比旋度为102.5102.5至至107.5 107.5 维生素维生素D D3 3 比旋度为比

39、旋度为105105至至112 112（三）其它鉴别方法三）其它鉴别方法 薄层色谱法、薄层色谱法、HPLCHPLC法法制备衍生物测熔点制备衍生物测熔点 紫外、红外吸收光谱紫外、红外吸收光谱（四）维生素（四）维生素D D2 2、D D3 3的区别反应的区别反应维生素维生素D D2 2 维生素维生素D D3 3 96%96%乙醇乙醇 10ml 取取0.1ml0.1ml 乙醇乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml 红色红色max570nm 黄色黄色 max495nm 三、杂质检查三、杂质检查（一）麦角甾醇的检查（一）麦角甾醇的检查维生素维生素D D2 290%乙醇溶液乙醇溶液 洋地黄皂苷

40、溶液洋地黄皂苷溶液 不得发生浑浊或沉淀不得发生浑浊或沉淀 （二）前维生素（二）前维生素D D的光照产物的光照产物（三）有关物质检查（三）有关物质检查Ch.P 2010NP-HPLC四、含量测定四、含量测定正相高效液相色谱法正相高效液相色谱法 （一）维生素（一）维生素D D测定法测定法 含量以单位表示含量以单位表示每单位相当于维生素每单位相当于维生素D 0.025D 0.025g g 注意：计算的是维生素注意：计算的是维生素D D及前维生素及前维生素D D经折经折 算成维生素算成维生素D D的总量的总量u 固定相：硅胶u 流动相：正己烷正戊醇（997：3）u 检测波长：254nm第一法：用于无维

41、生素A醇及其他干扰的供试品第二法：(1)皂化提取;(2)净化用色谱柱系统分离收集维生素D，得供试品溶液B;(3)按第一法进行测定。第三法：当样品经皂化提取及净化用色谱系统分离收集后，前维生素D峰仍受干扰时，采用此法。小结小结维生素维生素D抗佝偻病维生素的总称抗佝偻病维生素的总称性质：脂溶性；不稳定；旋光性；性质：脂溶性；不稳定；旋光性；显色反应；紫外显色反应；紫外鉴别：显色反应；比旋度；鉴别：显色反应；比旋度；VD2、VD3区别区别杂质检查：麦角甾醇；杂质检查：麦角甾醇；前维生素前维生素D光照产物；有关物质光照产物；有关物质含量测定：含量测定：三法三法AB1CDEVitaminsVitamin

42、sContents第五节第五节 维生素维生素E的分析的分析维生素维生素E E早在早在2020世纪世纪2020年代就被人们年代就被人们发现，发现，EvansEvans和他的同事在研究生殖和他的同事在研究生殖过程中发现，酸败的猪油可以引起大过程中发现，酸败的猪油可以引起大鼠的不孕症。鼠的不孕症。是与生育有关的维生素的总称是与生育有关的维生素的总称1936 1936 年分离出结晶体年分离出结晶体1938 1938 年被瑞士化学家人工合成年被瑞士化学家人工合成维生素维生素E的显微照片的显微照片维维生生素素E胶胶囊囊维生素维生素E类结构与相对活性类结构与相对活性名称R1R2烃链相对活性-生育酚CH3CH

43、3C16H331.0-生育酚CH3HC16H330.5-生育酚HCH3C16H330.2-生育酚HHC16H330.1-生育酚CH3HC16H270.5维生素维生素E的结构的结构2R*(4R*,8R*)-3,4-二氢-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲基十三烷基)-2H-苯并吡喃苯并吡喃-6-醇醋酸酯-生育酚醋酸酯生物效价 右旋体 ：消旋体 =1.4：10（天然品）（天然品）（合成品）（合成品）维生素维生素维生素维生素E E的性质的性质的性质的性质l性状性状:黄色或金黄色黄色或金黄色粘稠状粘稠状透明透明液体液体l脂溶性脂溶性:溶于溶于丙酮、乙醇、乙醚或植物油丙酮、乙醇、乙醚或植物

44、油等等有机溶剂有机溶剂中中l水溶性水溶性:不不溶于水溶于水l稳定性稳定性:无氧时对热、酸稳定，对碱不稳定，无氧时对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，遇光可被氧化，对氧敏感，遇光可被氧化，色渐变深，色渐变深，l UV：乙醇溶液中：乙醇溶液中max284nm（一）（一）硝酸反应硝酸反应二、鉴别试验二、鉴别试验生育酚HNO3（橙红色）生育红维生素维生素E在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚水解水解三氯化铁联吡啶反应三氯化铁联吡啶反应O（二）（二）生育酚生育酚对对-生育醌生育醌红色红色Fe3+Omax=284nmmin=254nm0.01%无水乙醇中无水乙醇中UV法法（三）

45、（三）薄层板薄层板 硅胶硅胶G展开剂展开剂 环己烷环己烷-乙醚（乙醚（4 ：1）显色剂显色剂 硫酸（硫酸（105 5）TLC法法（四）（四）VitE Rf =0.7-生育酚生育酚 Rf =0.5-生育醌生育醌 Rf =0.9维生素维生素维生素维生素E E合成过程合成过程合成过程合成过程2,3,5-三甲基对二苯酚植醇+-生育酚-生育酚醋酸酯 三、杂质检查三、杂质检查 三、杂质检查三、杂质检查（一）酸度（一）酸度游离醋酸游离醋酸（二）生育酚 硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄二苯胺（亮黄灰紫）灰紫）利用游离生育酚的还原性，利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈将硫

46、酸铈还原成硫酸亚铈 三、杂质检查三、杂质检查 1.原理原理2.试剂试剂问药典中规定的维生素问药典中规定的维生素E中所含的游离生育中所含的游离生育酚的限量是多少？酚的限量是多少？计算每ml硫酸铈滴定液（0.01mol/L）相当于0.002154g的游离生育酚2.15限量限量(三)有关物质的检查(四)残留溶剂：环己烷的检查四、含量测定四、含量测定GC法法（一）（一）GC特点特点1、选择性好选择性好灵敏度高灵敏度高速度快速度快分离效能好分离效能好挥发性低、不稳定、挥发性低、不稳定、极性强极性强衍生化。衍生化。易受样品蒸气压限易受样品蒸气压限制制载气载气N2固定液固定液硅酮（硅酮（OV-17）担体担体

47、硅藻土或高分子多孔小球硅藻土或高分子多孔小球柱温柱温265检测器检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器(FID)内标内标正三十二烷正三十二烷 n 500 R2内标法加校正因子定量内标法加校正因子定量2、VitE测定的色谱条件测定的色谱条件内标法内标法供试液（样品供试液（样品+内标）内标）内标物内标物对照液（对照对照液（对照+内标）内标）是样品中不存在的物质是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近与被测组分峰靠近能与各组分完全分离能与各组分完全分离与被测组分的量接近与被测组分的量接近样品样品 dl生育酚生育酚固定相固定相十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶流动相流动相甲醇甲醇-水（水（49

48、：1）检测波长检测波长292nm R2.6 RSD0.8%（二）（二）HPLC法（外标法）法（外标法）（三）荧光分光光度法对照品对照品 dl生育酚生育酚在在220400nm波长范围内，以发射、激发波长范围内，以发射、激发波长间隔波长间隔为为40nm40nm扫描同步荧光光谱，扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰的荧光强度信号值。测定同步荧光峰的荧光强度信号值。VE=F样品样品-F空白空白F标准标准-F空白空白 4.0（mg/L)第六节第六节 复方制剂中多种维生素的分析复方制剂中多种维生素的分析一、离子对HPLC法测定多种维生素 以樟脑磺酸作为离子对试剂，以二巯基丙烷磺酸钠作为抗氧剂二、反相HPLC法

49、同时测定9种水溶性维生素三、非水反相HPLC法同时测定4种脂溶性维生素练习与思考练习与思考AA型题型题 1.1.维生素维生素B B1 1的鉴别方法是的鉴别方法是A.A.三氯化铁反应三氯化铁反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.柯柏反应柯柏反应 D.D.与碱性酒石酸铜试液反应与碱性酒石酸铜试液反应 E.E.双缩脲反应双缩脲反应2.2.维生素维生素E E中国药典中国药典规定的含量规定的含量 测定方法为测定方法为A.A.非水溶液滴定法非水溶液滴定法 B.B.旋光法旋光法 C.HPLCC.HPLC法法 D.D.紫外分光法紫外分光法 E.GCE.GC法法BB型题型题 A A。亚硝基铁氰化钠反应。亚

50、硝基铁氰化钠反应 B.B.硫色素反应硫色素反应 C.C.硝酸反应硝酸反应 D.D.三氯化锑反应三氯化锑反应 E.E.硝酸银试液的反应硝酸银试液的反应 1.1.维生素维生素C C 2.2.维生素维生素E E 3.3.维生素维生素B B1 1 4.4.维生素维生素A AECBDXX型题型题 1.1.用碘量法测定的药物有用碘量法测定的药物有A.A.醋酸地塞米松醋酸地塞米松 B.B.丙酸睾酮丙酸睾酮 C.C.维生素维生素C C D.D.硫酸阿托品硫酸阿托品 E.E.维生素维生素C C注射液注射液返 回2.2.可用紫外分光光度法测定含量的可用紫外分光光度法测定含量的 药物有药物有A.A.维生素维生素A