上课用--动物细胞培养和核移植技术.ppt

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1、生产单生产单克隆抗体克隆抗体等等 动物细胞工程常用的技术动物细胞工程常用的技术动物细胞培养动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞融合是其他动物细胞工程技术的基础。是其他动物细胞工程技术的基础。为什么要进行动物细胞培养为什么要进行动物细胞培养?一一.动物细胞培养动物细胞培养如何进行细胞培养如何进行细胞培养?从动物机体中取出相关组织，将它们分散成从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个单个细胞，然后放在细胞，然后放在适宜的培养基适宜的培养基中，让这些细胞中，让这些细胞生长生长和和增殖增殖。(一一)概念概念.1.1.试说大致过程试说大致过程2.2.为为什么什么要把组织剪要把组

2、织剪碎、用酶分解开？碎、用酶分解开？3.3.用什么酶？为什么用什么酶？为什么？用胃蛋白酶行不？用胃蛋白酶行不行？行？4.4.这两种酶会不会这两种酶会不会把细胞消化把细胞消化掉？掉？（教材教材P44P44问题问题）5.5.为什么要再分装？为什么要再分装？6.6.原代培养、传代培养？次数？原代培养、传代培养？次数？7.7.培养得到的细胞，如果暂培养得到的细胞，如果暂时不用时，怎么时不用时，怎么保存？保存？（二）动物细胞培养过程 阅读阅读P44P44页回答问页回答问题题胰蛋白酶胰蛋白酶胶原蛋白酶胶原蛋白酶.培养条件动物动物组织组织分散成分散成单个细胞单个细胞细胞细胞悬液悬液培养培养胰蛋白酶胰蛋白酶胶

3、原蛋白酶胶原蛋白酶原理：原理：原理：原理：细胞增殖（有丝分裂）细胞增殖（有丝分裂）细胞增殖（有丝分裂）细胞增殖（有丝分裂）结果：结果：结果：结果：细胞群，细胞产物细胞群，细胞产物细胞群，细胞产物细胞群，细胞产物原代原代培养培养传代传代培养培养动物细胞培养过程胚胎的细胞或刚出生不久动物的组织胚胎的细胞或刚出生不久动物的组织(二二)动物细胞培养过程动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官胚胎或幼龄动物的组织器官细胞悬液细胞悬液10代细胞代细胞50代细代细胞胞剪碎胰蛋白酶或胶原蛋白酶洗涤、稀释、洗涤、稀释、分离分离原代培养用用胰蛋白酶胰蛋白酶分分散散细胞，说明细胞细胞，说明细胞间的物质主要是间的物质

4、主要是蛋白质蛋白质。动物细动物细胞培养适宜的胞培养适宜的PHPH为为7.27.47.27.4，此，此环境下胃蛋白酶环境下胃蛋白酶（2.02.0）没有活）没有活性，而胰蛋白酶性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)(7.2-8.4)的活的活性较高性较高。比老比老龄动龄动物的组织物的组织细胞增殖细胞增殖能力强，能力强，有丝有丝分裂分裂旺盛旺盛。分分化程度化程度越越低，低，繁殖繁殖能力越强，能力越强，越越容易培容易培养。养。动物细胞培养动物细胞培养不能最终培养不能最终培养成生物体成生物体细胞增殖细胞增殖缓慢，核缓慢，核型可能变型可能变化化动物组织细胞间隙中含有一动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质

5、，定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。定弹性和韧性的组织和器官。贴壁生长贴壁生长接触抑制接触抑制1010代以内，保持正常二倍体核型代以内，保持正常二倍体核型传代培养传代培养 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：根据你所学的内环境的知识，思考以下问题：1.1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？体外培养的细胞需要什么样的环境条件？充足营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元充足

6、营养（糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）素等合成成分及血清、血浆等天然成分。）适宜温度、适宜温度、PHPH和气体环境；无菌无毒环境和气体环境；无菌无毒环境1、无菌、无毒消毒、灭菌抗生素定期更换培养液（清除代谢废物）2、营养合成培养基：糖、氨基酸、生长因子、无机盐、微量元素（血清、血浆）3、温度和pH36.50.5，7.2-7.44、气体95%空气，5%CO2（维持培养液PH）.植物组织培养的条件；应用（三）培养条件（四）植物组织培养（四）植物组织培养和和动物细胞动物细胞 培培养养的比较的比较比较项目比较项目植物组织培养植物组织培养动物细胞培养动物细胞培

7、养原理原理细胞的全能性细胞的全能性细胞增殖细胞增殖培养基性质培养基性质固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基培养基特有成分培养基特有成分蔗糖蔗糖 植物激素植物激素葡萄糖葡萄糖 动物血清动物血清培养结果培养结果植物体植物体细胞株、细胞系细胞株、细胞系培养目的培养目的快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株无病毒植株获得细胞或细胞获得细胞或细胞分泌蛋白分泌蛋白P47P47最上面最上面1 1、大规模的生产生物制品。、大规模的生产生物制品。2 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。细胞。3 3、检测判断物质的毒性。、检测判断物质的毒性。4 4、培养正常或各种病变的

8、细胞，用于生、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为等，为 及其及其他疾病提供理论依据。他疾病提供理论依据。(五五)动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用筛选抗癌药物筛选抗癌药物治疗和预防癌症治疗和预防癌症二二.动物细胞核移植技术和克隆动物动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为终发育为动物个体（克隆动物）动物个体（克隆

9、动物）分分类类胚胎细胞核移植：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度细胞分化程度高高，恢复全能性，恢复全能性不不容易容易(一一)、动物细胞动物细胞核移植概念：核移植概念：母绵羊母绵羊A 乳腺细胞乳腺细胞（体细胞）（体细胞）母绵羊母绵羊B未受精的未受精的卵细胞卵细胞 母绵羊母绵羊C“多莉多莉”新的卵细胞发育新的卵细胞发育成早期胚胎成早期胚胎去核卵细胞去核卵细胞提取细胞核提取细胞核核移植核移植胚胎移植胚胎移植（二）体细胞核移植技术实例克隆羊(二二)、体细胞核移植的过程：、体细胞核移植的过程：请看教材请看教材P48P48

10、图图2-212-21思考：思考：1.1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用此细胞作为受体细胞有什么好处？胞作为受体细胞有什么好处？2.2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？M M中期卵母细胞中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。细胞分裂和发育进程。卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富，提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核体现

11、全能性的物质。现全能性的物质。整个过程用了哪些技术？细胞培养、核移植、胚胎移植新生牛的性别、基因？与供体相同繁殖方式？无性繁殖原理？动物细胞核的全能性（三）体细胞核移植技术1.1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏受体细胞

12、的遗传物质去掉或将其破坏(P49(P49小资料）。小资料）。培养的动物细胞一般当传代至培养的动物细胞一般当传代至10105050代左代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而遗传物质可能会发生突变，而1010代以内的细胞代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。一般能保持正常的二倍体核型。因此，在体细因此，在体细胞核移植中，胞核移植中，为了保证供体细胞正常的遗传基为了保证供体细胞正常的遗传基础础，通常采用传代，通常采用传代1010代以内的细胞代以内的细胞。2.2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代用于核移植的供体细胞一般都选用传

13、代1010代以内的细胞，想一想，这是为什么？代以内的细胞，想一想，这是为什么？3.3.你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了物，是对体细胞供体动物进行了100%100%的复制吗？的复制吗？为什么？为什么？绝大部分绝大部分DNADNA来自于供体细胞核，但其核外来自于供体细胞核，但其核外还有还有少少量的量的DNADNA，即线粒体中的，即线粒体中的DNADNA是来自于受是来自于受体卵体卵母母细胞。细胞。此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的物的一一些行为、习性的形成与所处环境有很大关些行为

14、、习性的形成与所处环境有很大关系，系，核核供体动物生活的环境与克隆动物所生活的供体动物生活的环境与克隆动物所生活的环境环境不不会完全相同，其形成的行为、习性也不可会完全相同，其形成的行为、习性也不可能和能和核核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物动物不不会是核供体动物会是核供体动物100%100%的复制。的复制。(四四)、体细胞核移植技术的应用前景：、体细胞核移植技术的应用前景：1 1、在畜牧业中、在畜牧业中可以加速家畜遗可以加速家畜遗传改良的进程传改良的进程2 2、保护濒危物种、保护濒危物种3 3、医药卫生领、医药卫生领域生产医用蛋白域生产医用蛋白质及

15、组织器官的质及组织器官的移植移植4 4、了解胚胎发育和、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研衰老过程；追踪研究疾病的发展过程究疾病的发展过程和治疗疾病和治疗疾病阅读课本阅读课本P50P50页页(五五)、体细胞核移植技术存在的问题：、体细胞核移植技术存在的问题：动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于动物细胞培养与植物组织培养的重要区别在于 A A、培养基不同、培养基不同 B B、动物细胞培养不需要在无菌条件下进行、动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C C、动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能、动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能 D D、动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能、动物细胞能够大量培养，

16、而植物细胞只能 培养成植株培养成植株巩固练习A动物细胞工程技术的基础是动物细胞工程技术的基础是 A A、动物细胞融合、动物细胞融合 B B、胚胎移植、胚胎移植 C C、动物细胞培养、动物细胞培养 D D、核移植、核移植巩固练习在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是是 A A、细胞系、细胞系 B B、细胞株、细胞株 C C、原代细胞、原代细胞 D D、传代细胞、传代细胞CA下列不属于克隆的是下列不属于克隆的是 A A、生物体通过体细胞进行的无性繁殖、生物体通过体细胞进行的无性繁殖 B B、将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系、将某肿瘤细胞在体外培

17、养繁殖成一个细胞系 C C、扦插和嫁接、扦插和嫁接 D D、将鸡的某个、将鸡的某个DNADNA片段整合到小鼠的片段整合到小鼠的DNADNA中中巩固练习D植物体细胞杂交的植物体细胞杂交的结果结果是是 A A、产生杂种植株、产生杂种植株 B B、产生杂交细胞、产生杂交细胞 C C、原生质体的融合、原生质体的融合 D D、形成愈伤组织、形成愈伤组织巩固练习A植物体细胞杂交的植物体细胞杂交的目的目的是是 A A、产生杂种植株、产生杂种植株 B B、产生杂交细胞、产生杂交细胞 C C、原生质体的融合、原生质体的融合 D D、形成愈伤组织、形成愈伤组织A植物体细胞杂交可以解决不同生物之间植物体细胞杂交可以

18、解决不同生物之间 的问题的问题 A A、亲缘关系远、亲缘关系远 B B、地理隔离、地理隔离 C C、生殖隔离、生殖隔离 D D、组织分化、组织分化巩固练习下列细胞中，不具有细胞全能性特点的细胞是下列细胞中，不具有细胞全能性特点的细胞是 A A、心肌细胞、心肌细胞 B B、神经细胞、神经细胞 C C、根的皮层细胞、根的皮层细胞 D D、木质部导管细胞、木质部导管细胞BD思考与探究思考与探究1.1.幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的幼龄与老龄动物的组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？思考一下，这是什么道理？思考

19、一下，这是什么道理？提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的提示：细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比则相反。所以，一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更容易培养。培养。思考与探究思考与探究2.2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为

20、什么？动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？动物细胞培养不需经过脱分化过程动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高。因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了。分化过程了。要想使培养的动物细胞定向要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。其分化成所需要的组织或器官。3.19973.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有年，美国

21、威斯康星州的一个奶牛场有一头一头名名叫卢辛达（叫卢辛达（LucindaLucinda）的奶牛，年产奶）的奶牛，年产奶量为量为30.830.8 t t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目。目前前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般一般为为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3 34 4 t t。（1 1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？请说明理由。达吗？请说明理由。可以。卢辛达的产奶量很高，有高产奶的遗传基础，可以。卢辛达的产奶量很高

22、，有高产奶的遗传基础，利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上利用卢辛达的体细胞克隆的奶牛其遗传物质基本上全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，全部来自该奶牛，其克隆牛具有高产的遗传基础，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，如果精心培育和饲养，有可能在世界范围内推广，克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产克隆牛再与高产的公牛自然繁殖，可得到很多高产的后代，从而加快奶牛改良进程。的后代，从而加快奶牛改良进程。该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤该克隆牛不能无限制地推广，其数量不宜过多，尤其是在小范围内不能无限的繁殖，以避免奶牛群出其是在小范围内不能无限的繁殖，以避

23、免奶牛群出现近亲繁殖而引起种质衰退。现近亲繁殖而引起种质衰退。（2 2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？给你，你将如何对它进行克隆？从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵从卢辛达耳朵（也可用别的组织、器官，耳朵在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外在活体上容易取）上剪取一小块组织，在体外培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠培养获得该组织（如软骨组织）的细胞。从屠宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养宰场取废弃的牛卵巢，抽取卵母细胞体外培养成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细成熟。用显微针去除卵母细胞的核，再将耳细胞注入

24、卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与胞注入卵母细胞，用电刺激方法使卵母细胞与体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细体细胞融合，这时供体核就进入了受体卵母细胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞胞，再用电刺激或化学物质激活注入了体细胞核的卵母细胞，使其完核的卵母细胞，使其完成细胞分成细胞分裂和发育过程。裂和发育过程。核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵核移植胚胎在体外短时间培养后，挑选正常卵裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。裂的胚胎植入经同期发情处理的受体母牛体内。4.4.体细胞核移植技术在研究和应用上还存体细胞核移植技术在研究和应用上还存在什么问题？请你查阅资料，了解这方面在什么

25、问题？请你查阅资料，了解这方面的前沿动态。的前沿动态。研究方面研究方面：克隆动物基因组重新编程的机制克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形尚不清楚，克隆技术效率低，克隆动物畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些率高、死亡率高、易出现早衰等问题。这些问题尚在研究中。问题尚在研究中。应用上应用上：生产克隆动物费用昂贵，距大规模生产克隆动物费用昂贵，距大规模应用还有一定距离。应用还有一定距离。知识拓展知识拓展1 1.动物细胞培养技术是如何发展起来的？动物细胞培养技术是如何发展起来的？19071907年，哈里森（年，哈里森（HarrisonHarrison）在无菌条件下

26、用淋巴液作培养基，培）在无菌条件下用淋巴液作培养基，培养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由养蛙胚神经组织存活数周，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法，奠定了动物组织体外培养的基础。之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传的基础。之后，又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养，提高了传代效率并减少了污染。代效率并减少了污染。19231923年，卡雷尔（年，卡雷尔（CarrelCarrel）设计了卡氏瓶培）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织生存空间。养法，扩大了组织生存空间。19511

27、951年，年，厄尔厄尔 （EarleEarle）发明了发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。体外培养动物细胞的人工合成培养基。19511951年，波米拉年，波米拉（PomeratPomerat）设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，）设计了灌流小室，使细胞生活在不断更新的培养液中，便于作显微摄影和细胞代谢的研究。便于作显微摄影和细胞代谢的研究。19571957年，格拉夫（年，格拉夫（GraffGraff）用）用灌流技术进一步提高了细胞悬浮培养的效率。灌流技术进一步提高了细胞悬浮培养的效率。19571957年，杜尔贝科年，杜尔贝科（DulbeccoDulbecco）等人采用胰蛋白酶消

28、化处理和应用液体培养基的方法，）等人采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对组织培养的发展起了获得了单层细胞培养。单层培养法的出现，对组织培养的发展起了很大的推动作用。此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。很大的推动作用。此后单层培养成为组织培养普遍应用的技术。2020世纪世纪6060年代后，动物细胞大规模培养技术开始起步，并逐步发展。年代后，动物细胞大规模培养技术开始起步，并逐步发展。2020世纪世纪8080年代后，随着基因工程和其他细胞工程技术的发展，细胞年代后，随着基因工程和其他细胞工程技术的发展，细胞培养技术已成为转基因技术、生物制药及其他

29、许多技术的基础，在培养技术已成为转基因技术、生物制药及其他许多技术的基础，在现代生物技术中发挥着重要的作用。现代生物技术中发挥着重要的作用。知识拓展知识拓展2 2.为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用酶消化的为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？用酶消化的是什么物质？是什么物质？细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞细胞原代培养时可以分散成单个细胞培养，也可以用细胞群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培群（团）、组织块培养，经传代培养后，最终都为细胞培养。养。分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的分散成单个细胞、细胞群（团）后容易培养，细胞所需的营养容易供应

30、，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养营养容易供应，其代谢废物容易排出；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难，因此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时，此，这些细胞在体外长时间的生存和生长就较困难。同时，分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术分散成单个细胞培养，可使得在细胞水平操作的其他技术得以实现。得以实现。用酶消化的是细胞间基质，细胞间基质主要成分有胶原蛋用酶消化的是细胞间基质，细胞间基质主要成分有胶原蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等成分。用蛋白白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、弹性蛋白等

31、成分。用蛋白酶可使其消化，从而使细胞相互分离。酶可使其消化，从而使细胞相互分离。知识拓展知识拓展3 3.体细胞核移植技术为什么要选择体细胞核移植技术为什么要选择MM期的卵母细期的卵母细胞做受体细胞？胞做受体细胞？细胞核移植技术中能用作受体细胞的通常有细胞核移植技术中能用作受体细胞的通常有MM期卵母细胞期卵母细胞和受精卵（合子）。早期核移植技术中常用受精卵，后来和受精卵（合子）。早期核移植技术中常用受精卵，后来基本上用基本上用MM期卵母细胞取代了受精卵，主要因为两者的细期卵母细胞取代了受精卵，主要因为两者的细胞质环境不同。有人认为重组需要的因子存在于胞质环境不同。有人认为重组需要的因子存在于MM

32、期卵母期卵母细胞的胞质中，而在原核形成时这些因子已被降解或用光，细胞的胞质中，而在原核形成时这些因子已被降解或用光，因此，原核扩张后受精卵去核可引起胞质中重组因子缺乏。因此，原核扩张后受精卵去核可引起胞质中重组因子缺乏。成熟促进因子（成熟促进因子（MPFMPF）是卵母细胞细胞质中重要的胞质影响）是卵母细胞细胞质中重要的胞质影响因子，因子，MPFMPF的活性在卵母细胞减数分裂的的活性在卵母细胞减数分裂的MIMI期和期和MM期达到期达到最高，受精或激活后，最高，受精或激活后，MPFMPF迅速灭活，因此，迅速灭活，因此，MM期卵母细期卵母细胞中胞中MPFMPF活性高，而受精卵中活性高，而受精卵中MP

33、FMPF活性低。活性低。MPFMPF水平的高低可水平的高低可影响供体核染色质的状态和复制。影响供体核染色质的状态和复制。MM期卵母细胞细胞核、期卵母细胞细胞核、细胞质已成熟，而细胞质已成熟，而MIMI卵母细胞细胞核、细胞质尚未成熟，卵母细胞细胞核、细胞质尚未成熟，其细胞质不能支持胚胎的全程发育，因此，尽管其细胞质不能支持胚胎的全程发育，因此，尽管MIMI期卵母期卵母细胞细胞MPFMPF活性也高，但不能用作受体卵母细胞。活性也高，但不能用作受体卵母细胞。也有人认为用去核合子做受体时，可能由于合子去核时一也有人认为用去核合子做受体时，可能由于合子去核时一些早期发育必需的因子随原核的去除而被去掉了，

34、而使去些早期发育必需的因子随原核的去除而被去掉了，而使去核受精卵缺乏发育能力。因此，目前广泛采用核受精卵缺乏发育能力。因此，目前广泛采用M M期卵母细期卵母细胞做受体。胞做受体。1.1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？用胃蛋白酶行吗？提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主提示：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pHpH约为约为2 2，当，当pHpH大于大于6 6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境的适宜环境pHpH为为7.27.28.48.4。多数动物细胞培养的适。多数动物细胞培养的适宜宜pHpH为为7.27.27.47.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化。宜用于细胞培养时的消化。