米耶赛买买提艾力答辩.ppt

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1、不同成熟度棉花种子脂肪酶活性测定指导老师：玛依拉老师作 者：米耶赛.买买提艾力 班 级：生技102102班 学 号：103135219 103135219 前言试验材料与方法结果与分析讨论内容简介结论前言棉花是世界上最主要的农作物之一,也是我国重要的经济作物.棉花生产实践表明,棉花种子成熟度与棉花生产保全苗、齐苗、壮苗有直接关系.成熟度好的种子不仅发芽率高,更重要的是田间出苗率高,出苗整齐健壮,即种子活力高.所以,种子成熟度是反映种子活力的重要内在指标.不同成熟度的棉花种子所含的脂肪酶和它的活性不同,因此选取不同成熟度的棉花种子提取脂肪酶并且测定其活力根据实验结果找出活力较高的棉花种子对以后的

2、农业生产提供依据.二、材料与方法2.1 试验材料2.1.1 棉花种子 棉花惠远710品种 不同采收期吐絮当天、吐后第10天、吐絮后20天、混合收的种子为实验材料.参与本实验的品种是新疆农业大学农学院棉花育种教研室提供.2.1.2 实验仪器与药品仪器：高速匀浆机，离心机,冰谷,镊子,剪刀,发芽盒，移液抢，离心机，恒温水溶谷，烧杯，PH测定纸,定容瓶,玻璃棒，三角胶头滴管,电磁搅拌器,双层纱布,烘干箱.药品：升汞，蔗糖,PH试纸，乙酸铜,Twenn-20和橄榄油,EDTA,KCI,MgCI2,DTT,磷酸缓冲液,双氧水,吡啶的溶液,橄榄油,脂肪酸显色剂,乳酸苯酚透明液，蒸馏水,95%酒精,4%聚乙

3、烯醇,橄榄油,底物溶液，氢氧化钠，酚酞指示液.2.2 试验方法2.2.1 实验处理 选用细沙为发芽床，发芽温度为常温3035温度和沙床，共4个处理的，每处理3个重复，每重复120粒种子。2.2.2 室内标准发芽实验2.2.2.1 砂床准备 2.2.2.2 种子处理2.2.2.3 棉花叶子处理 我将发芽第4天的棉花幼苗用于做实验（如图所示）我将长好的子叶拔下来装到空的发芽盒里面.然后把它消毒了以后做实验材料.第四天发芽的棉花种子 2.2.3 棉花种子脂肪酶的提取棉花种子脂肪酶的提取参考参考参考参考Huang11Huang11的方法的方法的方法的方法,将种子或幼苗蒸馏水洗将种子或幼苗蒸馏水洗将种子

4、或幼苗蒸馏水洗将种子或幼苗蒸馏水洗净后净后净后净后,取两片子叶加入取两片子叶加入取两片子叶加入取两片子叶加入1.0ml1.0ml含含含含0.6mol/L0.6mol/L蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖,lmmol/LEDTA10mrnol/LKCI,lmmol/LMgC12,lmmol/LEDTA10mrnol/LKCI,lmmol/LMgC12,2mmol/LDTT2mmol/LDTT及及及及0.15mmol/LTrieine,pH0.15mmol/LTrieine,pH为为为为7.57.5的的的的酶提取液酶提取液酶提取液酶提取液,在在在在4 4度冰浴研磨度冰浴研磨度冰浴研磨度冰浴研磨,匀浆经过滤除去组织匀

5、浆经过滤除去组织匀浆经过滤除去组织匀浆经过滤除去组织碎片碎片碎片碎片,即可直接作为酶的粗提取液测酶活性即可直接作为酶的粗提取液测酶活性即可直接作为酶的粗提取液测酶活性即可直接作为酶的粗提取液测酶活性.在部在部在部在部分实验中分实验中分实验中分实验中,为除去匀浆中本身所含有脂类物质的为除去匀浆中本身所含有脂类物质的为除去匀浆中本身所含有脂类物质的为除去匀浆中本身所含有脂类物质的干扰干扰干扰干扰,将滤液在将滤液在将滤液在将滤液在104g 10min104g 10min下离心下离心下离心下离心,弃去浮在表弃去浮在表弃去浮在表弃去浮在表层的脂肪及沉淀物层的脂肪及沉淀物层的脂肪及沉淀物层的脂肪及沉淀物,

6、用上清液部分作为脂肪酶酶用上清液部分作为脂肪酶酶用上清液部分作为脂肪酶酶用上清液部分作为脂肪酶酶源源源源.2.2.4 脂肪酶活性测定法电位滴定法电位滴定法按按pH计使用说明书进行仪器校正；计使用说明书进行仪器校正；取两个取两个100mL烧杯，分别作为空白烧杯，分别作为空白A和样品和样品B，分别加入底物溶液分别加入底物溶液4mL和磷酸缓冲液和磷酸缓冲液5mL，再于，再于A中加入中加入95酒精酒精15.00mL，于，于400.2水浴中水浴中预热预热5min，然后各加，然后各加1mL酶液，立即混匀计时，酶液，立即混匀计时，准确反应准确反应15min后，于后，于B中立即补加中立即补加15.00mL 9

7、5酒精终止反应取出。酒精终止反应取出。在烧杯中加入一转子，置于电磁搅拌器上，边在烧杯中加入一转子，置于电磁搅拌器上，边搅拌，边用氢氧化钠标准溶液滴定，至搅拌，边用氢氧化钠标准溶液滴定，至pH10.3，为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。指示剂滴定法指示剂滴定法取两个100mL三角瓶，分别作为空白A和样品B，分别加入底物溶液4mL和磷酸缓冲液5mL，再于A中加入95酒精15.00mL，于400.2水浴中预热5min，然后各加1mL酶液，立即混匀计时，准确反应15min后，于B中立即补加15.00mL 95酒精终止反应，取出。于A、B瓶中各酚酞两

8、滴，用氢氧化钠标准溶液滴定，直至微红色并保持30s不退色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积。三，结果与分析3.1 两种测定方法对脂肪酶活性的比较两种测定方法对脂肪酶活性的比较测定脂肪酶活力是我们用了电位滴定法和指示剂滴定测定脂肪酶活力是我们用了电位滴定法和指示剂滴定测定脂肪酶活力是我们用了电位滴定法和指示剂滴定测定脂肪酶活力是我们用了电位滴定法和指示剂滴定法等两种方法，测定结果如图表（法等两种方法，测定结果如图表（法等两种方法，测定结果如图表（法等两种方法，测定结果如图表（1 1）所示，从下面图可以看）所示，从下面图可以看）所示，从下面图可以看）所示，从下面图可以看出，电位滴定法和指示

9、剂滴定测定方法的测定结果在数值上出，电位滴定法和指示剂滴定测定方法的测定结果在数值上出，电位滴定法和指示剂滴定测定方法的测定结果在数值上出，电位滴定法和指示剂滴定测定方法的测定结果在数值上有一定差异，不能相互替代。用指示剂滴定法来分别测定棉有一定差异，不能相互替代。用指示剂滴定法来分别测定棉有一定差异，不能相互替代。用指示剂滴定法来分别测定棉有一定差异，不能相互替代。用指示剂滴定法来分别测定棉花种子吐絮当天，第花种子吐絮当天，第花种子吐絮当天，第花种子吐絮当天，第1010天，第天，第天，第天，第2020天，混合种子的结果比滴定天，混合种子的结果比滴定天，混合种子的结果比滴定天，混合种子的结果比

10、滴定法的结果高，那是因为指示剂滴定法试验过程中，用法的结果高，那是因为指示剂滴定法试验过程中，用法的结果高，那是因为指示剂滴定法试验过程中，用法的结果高，那是因为指示剂滴定法试验过程中，用NaOHNaOH滴定生成的脂肪酸滴定生成的脂肪酸滴定生成的脂肪酸滴定生成的脂肪酸,以酚酞作指示剂。滴定以酚酞作指示剂。滴定以酚酞作指示剂。滴定以酚酞作指示剂。滴定NaoHNaoH的体积多一的体积多一的体积多一的体积多一点点点点,在棉花脂肪酶的测定中在棉花脂肪酶的测定中在棉花脂肪酶的测定中在棉花脂肪酶的测定中,由于棉子含油分高、棉酚等的干扰由于棉子含油分高、棉酚等的干扰由于棉子含油分高、棉酚等的干扰由于棉子含油

11、分高、棉酚等的干扰,指示剂显色变化缓慢等当点显色突变很难准确把握指示剂显色变化缓慢等当点显色突变很难准确把握指示剂显色变化缓慢等当点显色突变很难准确把握指示剂显色变化缓慢等当点显色突变很难准确把握棉花种子脂解酶显著的碱性特性。棉花种子脂解酶显著的碱性特性。棉花种子脂解酶显著的碱性特性。棉花种子脂解酶显著的碱性特性。图表(1）电位滴定法与指示剂滴定法对脂肪酶活力变 2.2 不同温度对脂肪酶活力的影响不同温度对脂肪酶活力的影响图（图（2）吐絮当天，吐絮后第）吐絮当天，吐絮后第10天，吐絮后天，吐絮后20天，混合种子天，混合种子活力与温度的关系活力与温度的关系2.3 不同成熟度的棉花种子的脂肪酶不同

12、成熟度的棉花种子的脂肪酶活力比较活力比较不同成熟度对种子活力的影响不同，由表可以看不同成熟度对种子活力的影响不同，由表可以看不同成熟度对种子活力的影响不同，由表可以看不同成熟度对种子活力的影响不同，由表可以看 出随出随出随出随着棉花种子吐絮后采收期的长着棉花种子吐絮后采收期的长着棉花种子吐絮后采收期的长着棉花种子吐絮后采收期的长 ，棉花种子的脂肪酶活，棉花种子的脂肪酶活，棉花种子的脂肪酶活，棉花种子的脂肪酶活力指数逐渐降低力指数逐渐降低力指数逐渐降低力指数逐渐降低,以吐絮后第以吐絮后第以吐絮后第以吐絮后第1010天的最高天的最高天的最高天的最高,说明其活力最说明其活力最说明其活力最说明其活力最

13、强强强强,其次为吐絮当天的其次为吐絮当天的其次为吐絮当天的其次为吐絮当天的.测定方法 吐絮0号 吐絮10号 吐絮20号 混合种子 电位滴定法 6.66u/g 10.661u/g 6.318u/g 6.16u/g 指示剂滴定法 10.66u/g 12.988u/g 6.651u/g 6.56u/g电位滴定法 7.64u/g 9.541u/g 6.28u/g 4.02u/g指示剂滴定法 5.834u/g 6.541u/g 3.81u/g 2.35u/g电位滴定法和指示剂滴定法是3040的，电电位滴定法位滴定法 和指示指示剂剂滴定法滴定法 4050的活力测定。四，讨论四，讨论4.1 4.1 影响脂肪

14、酶测定结果有很多因素影响脂肪酶测定结果有很多因素,其其中底物中底物,反应温度和反应温度和pHpH因素影响最大因素影响最大.在在滴定法中滴定法中,以前国外有报导测定脂肪酶酶以前国外有报导测定脂肪酶酶活力时活力时,不将底物制成乳化液直不将底物制成乳化液直,接在搅接在搅拌状态下对油脂拌状态下对油脂 进行酶解反应然后用进行酶解反应然后用碱滴定生成的脂防酸碱滴定生成的脂防酸.4.2 4.2 虽然虽然PVAPVA对该酶解反应有抑制作用，对该酶解反应有抑制作用，PVAPVA增加了体系的粘度，使反应体系的增加了体系的粘度，使反应体系的流动性变差，对酸碱滴定也会产生一定流动性变差，对酸碱滴定也会产生一定影响，但

15、综合考虑，它能形成较均匀的影响，但综合考虑，它能形成较均匀的乳化体系，使酶能与底物充分接触、反乳化体系，使酶能与底物充分接触、反应，随机误差大大减小。平行测定中，应，随机误差大大减小。平行测定中，PVAPVA的影响作为系统误差可基本抵消，的影响作为系统误差可基本抵消，具有可比性，故宜采用加具有可比性，故宜采用加PVAPVA制成乳化制成乳化液这样的反应体系液这样的反应体系。4.3 酶都有其最适的反应温度，在不同温度下酶所表现的活性也不同，温度的升高可以加快反应速度，但会引起酶蛋白变性失活。同一浓度的碱性脂肪酶在相同的温度下，对同样的底物作用，在不同的pH环境中，所测得的酶活也不同。五，结论 5.

16、1 棉花种子脂解酶显著的碱性特性棉花种子脂解酶显著的碱性特性.5.2 最适最适PH值值7.5时，脂肪酶催化反应的温度作用范围时，脂肪酶催化反应的温度作用范围为为3040，最适温度，最适温度35.5.3从试验结果可看出不同成熟期棉花所采收的种子活从试验结果可看出不同成熟期棉花所采收的种子活力有差异力有差异.最挂采收期吐絮后第十天最挂采收期吐絮后第十天.种子成熟度与子叶中可溶性脂肪含量有相关种子成熟度与子叶中可溶性脂肪含量有相关.当天采当天采收的棉花种子脂肪酶含量比正常成熟的低收的棉花种子脂肪酶含量比正常成熟的低,第第20天采收天采收棉花种子的活力也低棉花种子的活力也低.因为吐絮当天不完全成熟因为

17、吐絮当天不完全成熟,吐絮后第吐絮后第20天以后棉花活力逐渐走向衰老天以后棉花活力逐渐走向衰老,叶片光合速率逐步下降叶片光合速率逐步下降.所以把棉花种子吐絮后第十天采收最好所以把棉花种子吐絮后第十天采收最好,成熟充分成熟充分,又及时又及时采收采收,种子质量好且活力高种子质量好且活力高.谢谢观赏 本试验的完成是在我们的导师玛依拉老师的细心指导下进行的.在每次实验遇到问题时老师不辞辛苦的讲解才使得我的试验顺利地进行.整个实验过程中,花费了玛依拉老师很多的宝贵时间和精力,在此向导师表示衷心地感谢！导师严谨的治学态度,开拓进取的精神和高度的责任心都将使学生受益终生！还要感谢和我同一试验小组的各位同学.他们在平时试验中和我一起探讨问题,并指出我试验上的错误，使我能及时的发现问题，把实试验顺利地进行下去，没有你们的帮助我不可能这样顺利地结稿，在此表示深深的谢意.最后感谢评阅论文和出席论文答辩委员会的诸位专家、教授在百忙中给予的悉心指导！同时也对曾给予我帮助和关心的老师,同学和朋友们表示衷心的感谢！谢谢 辞辞