2023年生物制药复习重点.docx

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1、2023年生物制药复习重点 【专业符号】 rhIFN 重组人干扰素 EPO 促红细胞生成素 rhGH 重组人生长激素 rhtPA 重组人组织纤溶蛋白酶源激活剂 INS 胰岛素 HBV 乙肝病毒 HBsAg 乙型肝炎表面抗原 IL 白细胞介素 CSF 集落刺激因子 SOD 超氧化物歧化酶 PEG 聚乙二醇 Ag 抗原Ab 抗体 SCF 超临界流体 RCF 相对离心力 HPLC 高效液相色谱 SDS-PAGE SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 HIC 疏水作用层析 IEF 等点聚焦电泳 PCR 聚合酶链反应技术 ELISA 酶联免疫反应 G-CSF 粒细胞集落刺激因子 LacZ -半乳糖苷酶 IPTG

2、 异丙基-D-硫代吡喃半乳糖苷 DTT 二硫苏糖醇 CM 羧甲基 DEAE 二乙氨基乙基 MVL 脂质体多囊颗粒 McAb 单克隆抗体 IFN干扰素 CSF集落刺激因子 HAMA人抗鼠抗体反应 GF生长因子 【名词解释】 1生物药物：来源于生物体的，用于预防治疗和诊断或用于调节机体生理功能，促进集体康复、保健物质。 干细胞：是一类未分化的细胞或原始细胞，是具有自我复制能力的多潜能细胞。 转基因动物：将外源基因导入哺乳动物的受精卵和胚胎中，使导入基因与受精卵染色体整合，并将外源基因稳定的传给自带，使子代表现外源基因的性状。 基因治疗：在基因水平上治疗疾病的方法，其手段包括，基因置换，基因修正，基

3、因修饰，基因失活，引入新基因等。 反义药物（信息药物）：是根据碱基互补原理，用人工合成或生物体内合成的载有特殊生物信息的药物分子和特殊核酸酶。 生物技术：利用生物有机体和其部分组成成分，形成新的技术手段来发展新产品和新工艺的一种技术体系。 细胞工程：通过细胞融合入，核质转移，染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，重组细胞的结构和内含物，以获得人们所需的特定的细胞，细胞产品和新物种的生物工程技术。 酶工程：指通过化学方法，酶学方法和DNA重组技术改善自然酶的形成，结果和性质，提高酶的催化效率，降低成本并在大规模工业生产化中应用。 微生物工程：又称发酵工程，是一门利用微生物的生长和代谢活动来生

4、产各种有用物质的工程技术，是生物工程的重要组成部分。 2生化药物：从生物体分离纯化制得的生化基本物质，以及用化学合成，微生物合成或现代生物技术制得的一类药物。 生物技术药物：利用生物体或其组成部分发展产品的技术体主要是DNA重组技术研制的药物。 基因工程药物：利用重组DNA技术，将该基因导入可以大量产生的受体细胞中不断繁殖或表达，并能进行大规模生产的基因或蛋白质。 生物制品：引用普通的或以基因工程，细胞工程，蛋白质工程，发酵工程等生物技术获得的微生物，细胞及各种动物和人源组织和液体等生物材料制备，用于疾病预防，治疗和诊断的药品。 疫苗：一切通过注射或黏膜途径接种，可以诱导机体产生针对特定致病原

5、的特异性抗体或细胞免疫，从而使机体获得保护或消灭该致病原的生物制品。 3 亲和层析：利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力 纸层析法：纸纤维上吸附的水为固定相，有机溶剂为流动相，当流动相流经固定相，样品中各组分电荷，亲和力等差异，各组分分配不同，以不同速度前进而分离。 超临界流体萃取技术：supercritical fluid,scf 利用超临界流体，即其温度和压力略超过或靠近临界温度（Tc）和临界压力（pc），介于气体和液体之间的流体为萃取剂，从固体或液体中萃取出某种高沸点或热敏性成分。 4基因工程:是指在分子水平上按照人们的设计方案将DNA片段插入载体DNA分子，从而实现DNA

6、分子体外重组，产生新的自然界从未有过的重组DNA，然后再将之引入特定的宿主细胞，进行扩增和表达，使宿主细胞获得新的遗传性状的技术。 蛋白质工程：基因工程的基础上，结合蛋白质结晶学，计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科的基础知识通过对基因的人工定向改造等手段，对蛋白质进行修饰，改造和拼接以生产出能满足人类需要的新型蛋白质的技术。 重组DNA技术：在体外将两个或多个不同的DNA片段全部或部分构建成一个DNA分子的方法。 限制性内切酶：一类能识别并切割双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶。 聚合酶链反应技术：指在四种脱氧核苷三磷酸存在下，以寡聚糖核苷酸为引物，以单链DNA为模板，经DNA聚合酶

7、催化，合成DNA互补链达到基因扩增目的的过程。 原位杂交：直接用探针与菌落或组织细胞中核酸杂交，未改变核酸位置。 插入失活：抗四环素基因上插入一个外源基因后，导致抗四环素基因失活，变成只对氨苄青霉素有抗性。 5初生氨基酸：微生物通过固氮作用，硝酸还原自然界吸收氨使酮酸氨基化成相应的氨基酸，或微生物通过转氨酶作用，将一种氨基酸的氨基转移到另一种酮酸上，生成的新氨基酸。 固定化酶：借助物化方法，将酶限制或定位于特定空间仍具有催化活性。 次生氨基酸：在微生物作用下，以初生氨基酸为前体转化成的其他氨基酸。 吸附法：通过载体表面和酶分子表面的次级键相互作用。 物理吸附：通过氢键，疏水键和-电子力等将酶固

8、定于不溶性载体。 共价结合法：借助共价键将酶的活性非必需侧脸集团和载体的功能基因进行偶联。 交联法：利用双功能或多功能试剂CHO戊二醛CHO在酶分子间，或酶分子与载体间。交联以共价键。 包埋法：将酶或细胞定位于凝胶网络或微胶囊内技术。 脂质体：是具有脂双层结构和一定包裹空间的微球体。 抗体药物：抗体是有机体在抗原性物质的刺激下所产生的一种免疫球蛋白，能与细菌，病毒或毒素等异源性物质结合而发挥预防，治疗疾病作用。 细胞因子：多种细胞所分泌的能调节细胞生长分化、调节免疫功能、参与炎症发生和创伤愈合等小分子多肽。 多肽类药物：机体特定腺体合成并释放的一种物质，通过与远程敏感细胞表面的手提相互作用而使

9、靶细胞发生变化。 基因工程技术：利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不用需要进行加工改造和重新装配，经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子，第二代单克隆抗体。 单克隆抗体：由一个杂交瘤细胞的细胞株（或克隆系）产生的抗一种抗原决定簇的抗体。 单克隆抗体技术：体外能无线增殖的骨髓瘤细胞和能分泌抗体的小鼠肝脏B淋巴细胞融合，制备杂种细胞，再通过筛选和克隆化培养生产某种预定性质的单克隆抗体，又可在体外无限增值。 质粒：独立于染色体外能够进行自我复制的双链DNA分子。 【填空题】 疫苗分类 1传统性疫苗:a灭火疫苗b减毒疫苗 2新型疫苗:a重组疫苗b核酸疫苗 3治疗（预防）性疫苗:a重组幽门螺

10、杆菌疫苗Hp；b乙肝（HBV）治疗性疫苗；c针对自身免疫性疾病治疗性疫苗；d心血管病疫苗；e肿瘤疫苗；f糖尿病疫苗 抗体药物结构分类 1诊断性抗体：单克隆抗体和多抗2鼠源和兔源3治疗性抗体：人源性或人源化抗体 抗体药物按结构分5类 1鼠或兔源抗体：用于各种诊断试剂，OKT-3，美国FDA批准的第一单抗，抗CD3，用于治疗和预防急性肾移植排斥反应。 2嵌合抗体：人源序列2/3，鼠源1/3 3人源化抗体：人源序列90%，鼠源序列10% 4全人源抗体：噬菌体展示技术Humira,转基因小鼠技术Vectibix 5抗体片段：Fab、scFv.、dsFv、Diabody、Minibody 生物技术的基本

11、内容 a基因工程 b细胞工程 c酶工程d 微生物工程：发酵工程 酶与细胞的固定化方法 酶：a可溶间歇；b固定化间歇（吸附、包埋）；连续（交联、共价键结合） 基因药物种类 1基因治疗2反义核酸药物3小干扰RNA 生物制品分类 1 疫苗 2 抗毒素及免疫血清 3血液制品 4 细胞因子及重组DNA产品 5 诊断制品 生物药物分类 按化学本质和化学特性分类 1 氨基酸类药物及其衍生物：a单一氨基酸制剂 b 复方氨基酸制剂 2 多肽和蛋白质类药物：a多肽 b 蛋白质类药物 c 细胞生长因子 3 酶类药物：a助消化的酶类 b消炎酶 c 心血管疾病的治疗酶 d 抗肿瘤类 e 其他酶类 f辅酶类药物 4 核酸

12、及其降解物和衍生物：a核酸类 b多聚核苷酸 c核苷、核苷酸及其衍生物 5 多糖类药物 6 维生素与辅酶 7 脂类药物：a磷脂类 b多价不饱和脂肪酸和前列腺素 c胆酸类d固醇类 f卟啉类 按原料来源分类：人体组织来源、动物组织来源、微生物来源、植物来源、海洋生物来源 按功能用途分类：治疗药物、预防药物、诊断药物、其他生物医药用品、常用提取方法 ：1.酸、碱、盐水溶液提取方法2有机溶剂提取 3表面活性剂提取方法与反胶束萃取法 4双水相萃取法 5 超临界萃取法 测定蛋白质的浓度方法：凯氏定氮法、紫外吸收法、分光光度法、考马斯亮兰法 蛋白质纯度的方法：色谱纯、电泳纯、结晶纯 层析分离方法：吸附层析、分

13、配层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析、疏水作用层析 空间结构分析方法 二级结构的比例：圆二色谱法 三维结构：a X射线晶体衍射法-蛋白质晶体b 核磁共振c电子显微镜 按分子大小分离方法：有超滤法、透析法（膜分离法）、凝胶过滤法、超速离心机法 按所带电荷差异分离方法：电泳、离子交换层析、等点聚焦 亲和层析方法：免疫亲和层析、生物亲和层析、金属螯合亲和层析、染料亲和层析、凝集素亲和层析 重组DNA技术必备的四个工具：工具酶、载体、目的基因（靶基因）、宿主细胞 主要工具酶：限制性内切酶、T4 DNA连接酶、大肠杆菌DNA聚合酶I、反转录酶 质粒三种构型：cccDNA、LDNA、OCDNA PCR

14、技术反应周期三个步骤：高温变性、低温退火、适温延伸 PCR技术的应用：遗传性疾病的基因诊断、传染病的诊断（肝炎病毒）、癌基因监测、法医学（亲子鉴定）上的应用、DNA测序、基因克隆、引入基因点突变，基因融合等 DNA重组体筛选和鉴定方法：抗生素抗性基因分析法、X-gal显色反应筛选重组体、质粒小量快速提取加酶切鉴定 20种蛋白质氨基酸和分类 根据R基侧链的极性：a非极性AAb极性AA 最大吸收波长：Trp最大吸收波长为279nm, phe259nm, tyr278 -氨基参加的反应:与亚硝酸反应（脯氨酸除外）、与酰化试剂反应、烃基化反应、Edman反应、脱氨基反应、 -氨基和-羧基共同参加的反应

15、和作用：茚三酮反应、成肽反应、 发酵法的基本过程：培养基与灭菌菌种菌种灭菌接种发酵产品提取及分离纯化 氨基酸分析主要方法：纸层析法、薄层层析法、高效液相层析法（HPLC）、质谱（MS） 氨基酸分离方法：溶解度法、特殊试剂沉淀法、吸附法、离子交换法、等电点沉淀法 氨基酸的生产方法和特点：蛋白质水解法、化学合成法、发酵法、酶法 固定化方法：a载体结合法：共价结合法、离子结合法、物理吸附法b交联法c包埋法：格子型、散胶囊型 多肽抗生素的作用：抗菌活性，免疫活性，抗氧化作用，结合矿物质，杀虫、抗病毒作用 多肽药物的种类： 1、多肽激素：促皮质激素、胃泌素、胸腺素 2、多肽类细胞生长调节因子：表皮生长因

16、子、转移因子等 3、其他生化药物：蜂毒、蛇毒、各种水解物 与蛋白质分离纯化相关的理化特性：分子大小，分子形状，带点特性，溶解特性，与配体特异性结合不同，吸附性质，变性和复性 蛋白质的粗分级方法：硫酸铵分级沉淀，有机溶剂分级沉淀，超速离心，等电点沉淀，透析、超过滤，蛋白质结晶 蛋白质溶液的浓缩方法：盐析浓缩，有机溶剂沉淀浓缩，葡聚糖凝胶浓缩，聚乙二醇透析浓缩，超滤浓缩，真空减压浓缩与薄膜浓缩 【简答题】 生物制药分类方法？能举二例。（填空题） 生物制品的概念（名解）、特点、分类（填空）。 1 其质量控制和质量检定是采用生物学分析方法，其效价或生物活性检定有其变异性 2 生物制品原材料、中间品、成

17、品、运输、贮存、甚至使用保持在“冷链”系统中 3 特别是预防制品使用对象不是病人，而是健康人群 4 生物制品的质量控制实行生产全过程监控。 离子交换色谱的操作步骤 1 离子交换剂预处理 2 离子交换剂转型（阳离子交换剂用NaOH处理，可转为Na+型，用HCl处理，则转为H+型；阴离子交换剂用NaOH处理转为OH-型，用HCl处理转为Cl-型等） 3 装柱 4 溶剂或缓冲液平衡 5 上柱（加样） 6 洗脱和收集（洗脱液中应含有离子，样品离子交换，交换剂亲和力） 7再生（再次转型） 分离纯化原理 1 根据分子形状与分子大小 2 根据电荷差异 3 根据分子极性与溶解度大小 4 根据吸附特性 5 根据

18、生物配基特性 基因工程的基本过程 1 目的基因（靶基因）的制备 2 能自我复制并具有选择几号的载体的选择与制备 3 目的基因与载体的链接 4 将重组DNA分子转入适当的宿主细胞，并在其中进行复制、扩增 5 重组子的筛选与鉴定 6 表达产物的鉴定 7 工程菌（细胞）的大规模培养 8 表达产物的分离与纯化 型限制酶的基本特性 1 识别位点为48核苷酸序列 2 识别位点即为切割位点 3 位点上核苷酸顺序通常呈双重旋转对称结构，即呈回文结构。 理想质粒载体具备的条件 1 其分子结构中带有多克隆位点（MCS），多个单一限制酶切位点 2 构建后的重组质粒必须易于转化 3 带有一个以上强选择性标记 4 分子

19、量较小，属松弛型复制控制（拷贝数多，可大10200个拷贝受宿主细胞的控制不严），便于操作 5 宿主范围小，无感染性 6 具有复制起始点（origin,ori） 表达载体具备的条件 1 一个强启动子Lac（乳糖启动子）或Trp（色氨酸启动子）、及其两侧的调控序列 2 有SD序列且该序列与起始密码ATG之间要有合适的距离 3 在克隆基因与启动之间有正确的阅读框架 4 外源基因下游有转录终止子等 目的基因获得的常用方法 1 基因分离的物理方法 2 基因的化学合成 3 聚合酶链反应技术（PCR） 4 cDNA文库的建立（逆转录法） 5 基因组文库法 6 鸟枪法，又成散弹法 AA在医药中的应用：构成蛋白

20、质的基本组成单位；蛋白质营养价值是氨基酸作用的反映（八必须）；氨基酸制剂：改善营养状况促进康复（精氨酸组氨酸外界补充）；治疗消化道疾病：谷氨酸甘氨酸及其衍生物；治疗肝病：精氨酸盐酸盐、谷氨酸钠、蛋氨酸、瓜氨酸；治疗脑及神经系统疾病；肿瘤治疗；高氨血症、肝机能障碍：精氨酸；低钾症心脏病、肝病、糖尿病：天冬氨酸；秃发症：半胱氨酸；降压，心绞痛：组氨酸 固定化酶概念与特性：借助理化方法，将酶限制或定位与特定空间，仍具有催化活性，此即为固定化酶，又叫固着酶;优点：稳定性提高，半衰期延长；酶与底物易于分开，可长期反复使用；产品易纯化，质量高；可连续生产，自动控制；酶利用率高；“三废”少；缺点：要进行固定

21、化载体和固定化条件的选择；活力有损失；酶需经纯化制备；投资大，成本高；对操作管理人员要求高。 发酵法的基本过程：培养基与灭菌；接种及发酵罐培养控制；取样及分离纯化。技术关键是选择合适工业化的高产氨基酸新菌种及其优化发酵条件。 固定化生产L-Asp:菌种培养（天冬氨酸酶）；E-coli的固定（菌体明胶戊二醛凝固洗涤）；转化反应（延胡索酸铵转化液）；产品纯化与精致（过滤PH2.8结晶稀氨水溶解 活性炭脱色真空干燥） 多肽及蛋白质类药物的制备过程：原材料的获取-预处理-细胞破碎（研磨、超声、渗透压、酶）-蛋白溶解（酸碱、醇、去垢剂、尿素）-粗提（沉淀、相分离、分子筛、透析）-精制（各种色谱、电泳分离

22、、差速离心）-保存（浓缩、干燥 制剂、） 胸腺素（1）制备工艺： 1、大肠杆菌惯用密码子将T1、28个氨基酸转化为核苷酸序列，pET-rhT1基因的串联，得到T1的n（2-8）串体； 2、对基因工程菌进行诱导表达；（3）基因工程菌的培养和高密度发酵；（4）融合蛋白的粗提、纯化和裂解：（5）胸腺素1的纯化。 简述胰岛素的结构特点：51个氨基酸，有A（21）、B（30）两条链，两个链之间由两个二硫键连接，在A链本身还有一个二硫键 胰岛素提取制备方法的基本过程：1.提取2.碱化、酸化3减压浓缩4去脂、盐析5精制（1）除酸性蛋白 （2）锌沉淀（3）结晶 基因工程方法生产胰岛素的基本步骤：在实验室中将人胰岛素基因A、B链的人工合成基因分别组合到E.coli的不同质粒上，然后再移至菌体内，着种重组质粒在E.coli细胞内进行正常的复制和表达，从而使带有A、B链基因的工程菌株分别产生人胰岛素A、B链，然后再用人工的方法，在体外通过二硫键使这2条链连接成有活性的人胰岛素。 淋巴细胞杂交瘤技术的基本过程：1选择制备亲本细胞 2细胞融合 3筛选及克隆化培养 4大量生产 5分离纯化。 生物制药复习重点 生物制药考试重点 生物制药复习题 生物制药 生物制药 生物制药 生物制药论文 生物制药考试 生物制药1 生物制药设备