南医大微免实验二.ppt

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1、实验内容实验内容录像：淋转、录像：淋转、E花环花环介绍：免疫学检测技术（书介绍：免疫学检测技术（书229）示教：淋转、示教：淋转、E花环花环 单扩、双扩、火箭电泳单扩、双扩、火箭电泳操作：对流免疫电泳、玻片凝集操作：对流免疫电泳、玻片凝集淋巴细胞转化试验淋巴细胞转化试验转化百分率正常值为转化百分率正常值为70%左右左右分裂相：即染色体型分裂相：即染色体型母细胞：大母细胞：大4-5倍；核质疏松，有倍；核质疏松，有1-3个核仁；个核仁；核周透明区；胞浆有空泡核周透明区；胞浆有空泡过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡过渡型：略大；核质略疏松；着色较淡小淋巴细胞：核质致密；着色深；胞浆少小淋巴细胞：核质

2、致密；着色深；胞浆少示教片示教片E玫瑰花环试验玫瑰花环试验T细细胞胞表表面面有有绵绵羊羊红红细细胞胞受受体体，可可在在自自然然情情况况下下与与绵绵羊羊红红细细胞胞结结合合，形形成成E玫玫瑰瑰花花环环，由由此此可区分可区分T淋巴细胞与淋巴细胞与B淋巴细胞。淋巴细胞。示教片示教片一、抗原抗体反应的原理一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定簇、基础：抗原决定簇抗体的互补决定区抗体的互补决定区 2、特点：特异性、特点：特异性 可逆性可逆性 比例性比例性 阶段性阶段性二、抗原抗体反应的影响因素二、抗原抗体反应的影响因素 1、电解质、电解质 2、温度、温度 3、酸碱度、酸碱度三、抗原或抗体的检测方法三

3、、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术凝集反应凝集反应概念：抗原概念：抗原+抗体抗体 凝集团块凝集团块直接凝集：颗粒性抗原直接凝集：颗粒性抗原+抗体抗体 凝集团块凝集团块 玻片法、试管法玻片法、试管法间接凝集：可溶性抗原包被于载体间接凝集：可溶性抗原包被于载体+抗体抗体 凝集团块凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体反向间接凝集：抗体包被于载体+抗原抗原 凝集团块凝集团块协同凝集：抗体结合金葡菌协同凝集：抗体结合金葡菌SPA+抗原抗原 凝集团块凝集团块沉淀反应沉淀反应概念：可溶性抗原概念：可溶性抗原+抗体抗体 沉淀物沉淀物单向琼脂扩散、火箭电泳：抗

4、原定量试验单向琼脂扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、双向琼脂扩散、对流免疫电泳：抗原分析、抗原定性试验等抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向）抗原、抗体同时扩散（自由、定向）单向单向琼脂琼脂扩散扩散单向琼脂扩散试验单向琼脂扩散试验是一种定量试验。是一种定量试验。将一定量将一定量已知已知抗体混于琼脂中抗体混于琼脂中，制板，制板，在适当在适当位置打孔位置打孔，将抗原加入孔中扩散将抗原加入孔中扩散，与板中抗体与板中抗体相遇相遇，在比例合在比例合适适处呈现白色沉淀环处呈现白色沉淀环，环的直环

5、的直径与抗原径与抗原含量含量成正比成正比。主要用于主要用于测定测定血清各种血清各种Ig和补体成分的含量和补体成分的含量单向定量免疫电泳单向定量免疫电泳（火箭电泳火箭电泳）将一定量将一定量已知已知抗体混于琼脂中抗体混于琼脂中，制板，制板，在在板板的一端的一端打一排小孔打一排小孔，加入待检样品加入待检样品，置于阴极端进行电泳。置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰沉淀峰，状如火箭状如火箭，称火箭电泳。沉淀峰的高低与称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿敏感度与单扩相仿，但需时较短。但

6、需时较短。双向双向琼脂琼脂扩散扩散在在琼脂板上打孔琼脂板上打孔，抗原和抗体分别加到相抗原和抗体分别加到相应孔中应孔中，二者自由，二者自由向四周扩散向四周扩散，在比例合在比例合适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原适处形成沉淀线。若同时含有若干对抗原抗体系统抗体系统，可出现多条沉淀线。可出现多条沉淀线。可用可用于于分析和鉴定标本中多种抗原成分分析和鉴定标本中多种抗原成分对流免疫电泳对流免疫电泳材料材料n电泳仪电泳仪n缓冲液缓冲液n琼脂板琼脂板1块块/2人，打孔器人，打孔器2个个/组，组，n抗抗AFP血清血清 已知已知AbnAFP阳性血清阳性血清 阳性阳性Agn对照阴性血清对照阴性血清 阴性阴性Ag

7、n待检血清：标本待检血清：标本1 未知未知Ag 标本标本2 未知未知Ag对流免疫电泳对流免疫电泳打孔：打孔：金属打孔器打两排孔金属打孔器打两排孔，抗原孔与抗体孔间距抗原孔与抗体孔间距离为离为4毫米毫米至至5毫米。毫米。加样加样：抗抗AFP血清加于抗体孔内血清加于抗体孔内；病人血清病人血清、AFP阳性血清阳性血清、阴性对照血清分阴性对照血清分别别加于抗原孔内。加于抗原孔内。电泳电泳：将琼脂将琼脂板板置电泳槽置电泳槽，抗原孔置阴极端。抗原孔置阴极端。板板两两端分别用湿纱布与缓冲液相连端分别用湿纱布与缓冲液相连，通电通电30分钟。分钟。观察观察：在相应抗原、抗体孔间在相应抗原、抗体孔间出现出现沉淀线

8、。沉淀线。对流免疫电泳方法方法 打孔打孔 加样加样 电泳电泳35minAgAbAgAb45mm45mm5mm5mm阴性阳性标1阴性标2阳性对流免疫电泳结果判定：结果判定：在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。直接凝集反应直接凝集反应玻片凝集玻片凝集材料：玻片材料：玻片1张张/1人，人，1号、号、2号菌落，生理盐号菌落，生理盐水，诊断血清，接种环水，诊断血清，接种环方法：取生理盐水方法：取生理盐水34环，菌落环，菌落12环，后加环，后加血清血清2环环 轻摇玻片，轻摇玻片，12分钟后观察分钟后观察结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片扔在后面的玻片缸里玻片扔在后面的玻片缸里*消毒水泡手消毒水泡手生理盐水 1号菌落生理盐水+1号菌落诊断血清实验报告实验报告五张图：淋转、五张图：淋转、E花环、单扩、双扩、花环、单扩、双扩、火箭电泳火箭电泳原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集 （结果可用图示）（结果可用图示）