羟脯氨酸检测试剂盒说明书.docx

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1、货号：QS1907规格：50管/48样羟脯氨酸(Hydroxyproline, HYP)试剂盒说明书可见分光光度法留意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做猜测定。测定意义HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此 HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。测定原理样品经酸水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应, 产生红色化合物，在560nm处有特征汲取峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP 含量。自备试验用品及仪器天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计、1 H1L玻璃比色皿、

2、6moi/L盐 酸、高氯酸和蒸储水。试剂组成和配制组织提取液：6mol/L盐酸，自备。浓盐酸：H20 (V/V) = 1:1,室温保存。细胞提取液：液体lOOmLXl瓶，4保存。试剂一：液体lOmLXl瓶，4避光保存。试剂二：液体lOmLXl瓶，4c避光保存。羟脯氨酸提取.组织：称取约0.5g样品于玻璃管，加入5mL的组织提取液，置于110烘箱，水解6至12 小时，12000g, 25,离心20min,用提取液定容至5mL,取上清待测。1 .细胞：取500万个细胞，加入2mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min,自然降压后待测。3.血清等液体：直接测定。测定操作表空白管测定管样本(

3、配)200试剂一(乩)200200混匀，室温静置20min试剂二(NL)200200H20 (HL)600400混匀，60, 20min,取出后25静置15 min,空白管调零，1mL玻璃比色皿， 测定A.560 o羟脯氨酸含量计算公式标准曲线：y=64.875x+ 0. 0251, R=0. 9991(1)按组织计算HYP 含量(mg/g 鲜重)=(A56o-O. 0251) 4- 64. 875XV 反总(V 样+V 样总XW)=0. 385 X (A56O-O. 0251) 4-W(2)按细胞计算HYP 含量(mg/104 cell) = (A56o-O. 0251) + 64. 875XV 反总+ V 样XV 样总 个 细胞数量(万个)二 0. 154X (A56o-O. 0251) +细胞数量(万个)(3)按液体体积计算HYP 含量(mg/mL) = (A56o-O. 0251) 4- 64. 875 XV 反总小 V 样=0. 077 X (A56o-O. 0251)V反总：反应总体积，1mL； V样：反应中样品体积，0. 2mL； V样总：加入提取液体积，mL； W：样品质量，g留意事项1、3d值入于0.8,样品适当稀释再测定，留意计算公式里乘以稀释倍数。2、试剂有肯定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。3、最低检出限为3. 8mg/L。