课题：多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptx

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1、刘刘伟锐伟锐河北师大附中多聚酶链式反应扩增多聚酶链式反应扩增DNADNA片段片段新闻新闻报道报道或克隆复活猛犸象或克隆复活猛犸象四万年前猛犸象四万年前猛犸象DNADNA将被提取将被提取微量微量DNA大量大量DNA扩增扩增PCRPCR技术技术新闻新闻报道报道或克隆复活猛犸象或克隆复活猛犸象四万年前猛犸象四万年前猛犸象DNADNA将被提取将被提取PCRPCR原理原理 细胞内细胞内DNA分子分子复制的过程复制的过程温故知新温故知新温故知新温故知新细胞内细胞内DNADNA分子的复制需要的基本条件分子的复制需要的基本条件模板模板DNADNA4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶解旋酶解旋

2、酶ATPATP引物引物探究新知探究新知探究新知探究新知小资料：小资料：DNADNA聚合酶只能将聚合酶只能将单个核苷酸加到单个核苷酸加到已已有的核酸片段有的核酸片段上上细胞内细胞内DNADNA分子的复制分子的复制引物引物引物的碱基序列有什么特点？与与DNADNA母链的一段碱基序列互补配对母链的一段碱基序列互补配对此时合成的子链与上图中合成的子链有什么不同？子链开始延伸的位置决定于子链开始延伸的位置决定于:引物引物与模板链结合的与模板链结合的位置位置甲甲乙乙判断判断小小资料：料：DNA聚合聚合酶能能够从引从引物的物的3端开始端开始连接脱接脱氧核苷酸氧核苷酸以下甲乙两图，哪个能正确表示以下甲乙两图，

3、哪个能正确表示DNA子链延伸的方向？子链延伸的方向？细胞内细胞内DNADNA分子的复制分子的复制引物引物1 12 23 34 45 553细胞内细胞内DNADNA分子的复制分子的复制引物引物乙乙判断判断以下甲乙两图，哪个能正确表示以下甲乙两图，哪个能正确表示DNA子链延伸的方向？子链延伸的方向？甲甲 35 35总是从子链的总是从子链的55端端向向33端端延伸延伸DNA子子链的合成方向：的合成方向：细胞内细胞内DNADNA分子的复制分子的复制引物引物35 35DNA子链合成过程中引物的特点子链合成过程中引物的特点小结小结引物引物决定子链开始延伸的位置决定子链开始延伸的位置引导引导DNA子链的合成

4、子链的合成与与DNA母母链的一段碱基序列互的一段碱基序列互补配配对细胞内细胞内DNADNA分子的复制需要的基本条件分子的复制需要的基本条件模板模板DNADNA4 4种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸DNADNA聚合酶聚合酶解旋酶解旋酶ATPATP引物引物若将细胞内DNA分子的复制需要的各种物质放置在合适的容器内进行反应，并加以控制合适的条件，你觉得实验会成功吗？PCR物质准备及物质准备及条件控制条件控制 微量离心管微量离心管PCR反反应场所所PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物微量离心管中加入微量离心管中加入这些物质是否可行这些物质是否可行？模板

5、DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制8010050左右模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制该反应装置一直处该反应装置一直处于高温状态是否可于高温状态是否可行？行？模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶解旋酶ATP引物还有需要改动的地还有需要改动的地方吗？方吗？PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制该酶可以耐受90以上的高温而不失活。由于发现于水生栖热菌（Thermus aquaticus）内，故命名为Taq DNA聚合酶。耐高温的Taq DNA聚合酶PCR物质准备及条件控制物质准备

6、及条件控制模板DNA4种脱氧核苷酸DNA聚合酶ATP引物Taq DNA聚合酶PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制模板DNA4种脱氧核苷酸ATP引物Taq DNA聚合酶2种一定的缓冲溶液PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制自动自动调控温度调控温度PCR物质准备及条件控制物质准备及条件控制实验过程中，温度需要调整几次？实验过程中，温度需要调整几次？变性、复性、延伸分别需要不同的温度变性、复性、延伸分别需要不同的温度在每次循环的时候，上一在每次循环的时候，上一轮轮的产物都可以作为下一的产物都可以作为下一轮反应的模板轮反应的模板若循环若循环30次次可以得到可以得到230个个DNA片段片段P

7、CR结果结果实验中实验中实验中实验中DNADNADNADNA含量的测定含量的测定含量的测定含量的测定可以通过测量可以通过测量可以通过测量可以通过测量DNADNADNADNA含量来评价扩增的含量来评价扩增的含量来评价扩增的含量来评价扩增的效果，效果，效果，效果，DNADNADNADNA在在在在260nm260nm260nm260nm的紫外线的紫外线的紫外线的紫外线波段有一强烈的吸波段有一强烈的吸波段有一强烈的吸波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小收峰，峰值的大小收峰，峰值的大小收峰，峰值的大小与与与与DNADNADNADNA的含量有关。的含量有关。的含量有关。的含量有关。PCR结果果3 GATCGT

8、GCATCGTGACTGGCTAACGGTGCA55CTAGCACGTAGCACTGACCGATTGCCACGT3若下若下图为猛猛犸象的部分象的部分DNA序列，要序列，要扩增增红色框内的一段色框内的一段DNA序列，序列，尝试写出写出所所设计的引物的碱基序列？的引物的碱基序列？学以学以致用致用3GATCGTGCATCGTGACTGGCTAACGGTGCA55CTAGCACGTA GCACTGACCGATTGCCACGT35GCACTGAC33GCTAACGGT5引物引物设计的原的原则：碱基序列、引物碱基序列、引物长度度若下若下图为猛猛犸象的部分象的部分DNA序列，要序列，要扩增增红色框内的一段色

9、框内的一段DNA序列，序列，尝试写出写出所所设计的引物的碱基序列？的引物的碱基序列？学以学以致用致用3GATCGTGCATCGTGACTGGCTAACGGTGCA55CTAGCACGTAGCACTGACCGATTGCCACGT35GCACTGACGCTAACGGT533GATCGTCATCGTGACTGGCTAACGGTGCA55GCACTGAC35GCACTGAC3GCTAACGGT53GCTAACGGT535GCACTGAC3DNADNA聚合酶只能特异性地复制处于聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的两个引物之间的DNADNA序列序列模板DNA4种脱氧核苷酸Taq DNA聚合酶2种引物一定的缓冲溶液8010050左右72左右若若实验未出未出现预期期结果，果，试分析可能的原因？分析可能的原因？综合综合应用应用谢谢谢谢