气相色谱法在2010版《中国药典》中的应用.ppt

《气相色谱法在2010版《中国药典》中的应用.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《气相色谱法在2010版《中国药典》中的应用.ppt（83页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、气相色谱法（气相色谱法（GC）在）在2010版版中国药典中国药典中的应用中的应用孙仁爽孙仁爽单位：通化师范学院单位：通化师范学院电话：电话：13624355398QQ：804590217检测器检测器进样器进样器色谱柱色谱柱GAS气源气源柱温箱柱温箱数据处理数据处理一、气相色谱仪的配置一、气相色谱仪的配置气源的配置配FID检测器需购买N2、H2和Air三种气体。提供气体两种方式：钢瓶钢瓶（需提前准备好）和气体发生器气体发生器（购买仪器的时候从厂家订购）。钢瓶纯度高，但氢气钢瓶易泄露发生危险，可购买氢气报警器或放室外小房子。发生器气体纯度稍低，安全性高。通化购买不到高纯气体，一般到长春购买。标配为

2、氮气用钢瓶，氢气和空气用发生器。目前有氮氢空一体机，FID和TCD可满足要求，ECD达不到要求。气体净化装置：脱氧管、脱水管、脱烃管脱氧管、脱水管、脱烃管。进样系统：包括样品引入装置样品引入装置和气化室气化室（进样口）。样品引入装置：10uL微量注射器、自动进样器和顶空进样器（做溶剂残留、树脂残留需配置）。进样口：标配为前进样口为填充柱进样口、后进样口为分流不分流进样口。柱子的选择（填充柱和毛细管柱）根据标准要求购买，购买的时候明确柱子型号最好，毛细管柱主要为聚硅氧烷类聚硅氧烷类和聚乙二醇聚乙二醇类。开发新方法时，首选非极性固定相非极性固定相，柱效高，对氧不敏感、最高使用温度高、柱寿命长优点。

3、检测器标配为I（大多数有机化合物）/TCD（微量水分测定）和CD（有机氯农残）。氮磷检测器氮磷检测器（有机磷农药残留方法已被05药典附录收载，但具体品种的检验尚未开展）工作站：厂家自带工作站，可要求厂家安装。N2000。通化师范学院有气相、顶空、分流、农残检测器，药典标准要求的气相条件已完全具备，可以委托做样和开发方法。仪器标准配置气源：氮气钢瓶、氢气发生器和空气发生器。净化装置：无ECD可不配。进样口：填充柱进样口和分流/不分流进样口样品引入装置：手动进样器（10uL）和顶空进样器柱子：根据标准要求。检测器：FID和ECD（农残）工作站：厂家工作站或N2000需要购买仪器的情况无气相色谱仪：

4、一般为委托检验。建议：根据样品和药典、局颁标准和企业标准按标配配齐，节省成本。现有标准无法满足标准要求如有GC，未配置分流不分流进样口和顶空、ECD，建议：对仪器进行升级。任务重，GC不够用。建议：买同型号（可替换）或不同型号（方法学验证）均可。二、合格的二、合格的GC操作者应具备的知识操作者应具备的知识1.保管好安装光盘和说明书，熟悉配件。2.使用纯度合乎要求的气体，防止检测器和柱子被污染。购买要告诉气体生产厂家要五个9气体或高纯气体。填充柱以FID为检测器也可以用四个9气体。气体剩下0.2Mpa就不要再用，如果有管路泄露或气体用尽，钢瓶易被污染，灌装前需净化处理，需要几百元费用，而一瓶气体

5、一般价值几百元，因此定期用肥皂水做泄露检查。3.使用性能可靠的二级减压阀（氧气表）。气体发生器不需要，一般需药厂自己准备好，避免工程师调试的时候无法安装，要求高，一般在外地购买，氧气表右边的表显示钢瓶气体压力，左边表显示减压输出后气体压力。4.定期更换气体净化器填料（气源与仪器之间，配ECD检测器最好配置）变色硅胶变红时需要活化，140加热2h。分子筛等吸附有机物的净化器就不好用肉眼判断了，须定期更换。空气压缩机有机杂质高一些，最好3个月更换一次，马福炉400600加热4-6h。5.会测定气体的流速和计算分流比气体的流速单位一般用mL/min表示，一般用皂膜流量计测定。氢气的流速30-40之间

6、，空气的流速一般在300-400之间，载气的流速根据样品和色谱柱的种类决定，测完氢气、空气、尾吹气的流速减掉载气流速。隔膜吹扫（用途）一般是1。尾吹气（用途）是20-30之间。分流出口流量根据需要测定。分流比=（分流出口流量+柱流量）/柱流量。氮气：氢气：空气=1:1:10FID灵敏度最高。6.进样口的维护能更换进样口隔垫、清洗进样口衬管（玻璃毛）、衬管上端的O形硅橡胶密封圈、清洗分流平板。每每6-12个月或当指示个月或当指示型捕集阱颜色改变时型捕集阱颜色改变时更换时间取决于捕集更换时间取决于捕集阱的容量与气体纯度阱的容量与气体纯度每每1-2年校准一年校准一次次每每3个月个月当发现注射器中有明

7、显的清当发现注射器中有明显的清洗不掉的污染物洗不掉的污染物,或推杆难或推杆难以抽动以抽动,或当推杆粘连时或当推杆粘连时,或进样口隔垫穿刺出现异常或进样口隔垫穿刺出现异常,或当针头被堵塞时或当针头被堵塞时每每60针样品针样品裂口裂口,进样口衬管内进样口衬管内有碎屑有碎屑,保留时间偏保留时间偏移移,柱压降低等等柱压降低等等每月每月与衬管一起更换与衬管一起更换,或视磨损情况更换或视磨损情况更换每周每周经常检查经常检查,当衬当衬管内有可见的管内有可见的污染物或色谱污染物或色谱性能下降时更性能下降时更换换每月每月经常检查经常检查,当有划痕当有划痕,腐蚀或非挥发性组分腐蚀或非挥发性组分造成堵塞造成堵塞,污

8、染时更换污染时更换每次更换色谱柱每次更换色谱柱,进样口进样口/检测器检测器部件时更换部件时更换GC消耗品更换时间表消耗品更换时间表7.及时清洗注射器，取样的时候会排气泡，注射速度越快越好，且每次注射的过程重现性要好，取样之前用溶剂洗3次（每次抽满2/3），样品溶液洗3次，然后取样。8.会更换柱子（插入进样口和检测器的深度，用换下的隔垫插到柱子上。换下的柱子堵上盲堵，第一次没有方向，一般让牌子从正面看到，用过一次就有方向）。柱子安装进样口端使色谱柱穿过垫圈伸出4-6mm，把隔垫向上滑到柱螺帽将柱插入进样口，把柱上的螺帽和垫圈向上滑到进样口底部，用手拧紧柱螺帽至柱固定，调节色谱柱的位置，使柱上隔垫

9、正好在柱螺帽底部扳手拧紧1/4-1/2圈。检测器一端：将柱螺母和垫圈插入到检测器接头底部，接头用手拧紧，再将柱子下拉1mm，扳手拧紧-1/4圈，检漏。（液相柱区别）（液相柱区别）切割柱子、切割铜管，及时更换毛细管柱密封垫。安装完色谱柱做泄露检查，尤其是连检测器的一端。准备一份色谱柱测试标样，做柱效测定，看色谱柱是否合格以及确定问题是否在色谱柱。柱子牌子信息：长度、内径、固定液厚度、温度范围。柱子的老化（40-50/10/min升至最高使用温度2-3h，不连接检测器，不用氢气作为老化载气。何时老化？新柱子和长时间未用的柱子或色谱峰异常）。老化目的除去填充物中残留挥发性成分，并使固定液再一次均匀牢

10、固地分布在载体表面上。9.检测器的维护点火线圈的更换、喷嘴的清洗、注意不要烫伤。开机先开载气，检测到柱子流量后再升温，否则将破坏柱子和检测器。FID检测器温度达到150度才能点火，判断是否已经点着火。关机是先关氢气和空气，再降温度，最后关载气（保护检测器和柱子）。热导检测器注意通电之前，确保载气通过了检测器，否则，铼钨丝易被烧断。关机先关检测器电源，然后关载气。注意铼钨丝易被氧化。电子捕获注意放射性危害，不允许自己拆卸，厂家工程师或专业人员，ECD出口排到室外。10.会数据处理内标法（内标校正因子法和内标工作曲线法）可消除进样量不准确误差，GC进样量一般为1uL，液相是10uL、20uL，GC

11、更易出现进样误差，自动进样器准确度可满足要求，手动进样最好用内标法定量。需要内标物。广藿香注意结果要求：mg/g、每片含、标示百分含量对照品溶液得标准曲线AR/AS=aCR+b，将Ai/As代入曲线计算。得标准曲线：工作站、计算器、EXCEL外标法（外标一点法和工作曲线法）面积归一化法粗略考察，需全部出峰且都被检测到，溶剂峰去掉，不易用于微量杂质的检查，一般用于同系物的含量测定。硬脂酸镁中硬脂酸含量、大豆油（供注射用）标准溶液加入法（顶空进样）顶空中供试品和对照品处于不相同基质中，如有不同，加入法为准配置适当浓度对照品溶液（0.5mg/ml），取一定量（2mL）加入到供试品溶液（8mL）中，对

12、照品加入前后各进样2uL。Ax=40，Ais=60。三、三、15版药典的总体构想版药典的总体构想将凡例、附录（制剂通则、通用分析方法、指导原则）、药用辅料整合成公共部分，称为总则。药品正文保留一部、二部、三部。一部分为上下两卷，上卷收载药材、饮片、植物油脂与提取物；下卷收载成方制剂。将应用广泛、成熟的相关测定方法，以附录形式收入中药一部。如黄芩苷、芍药苷升格为附录。二部为化学药三部为生物制品解决系列品种多标准并列问题。合并同类项，建立系列品种的通用标准，统一鉴别、检查、含量测定如六味地黄系列、藿香正气系列。15版药典原则上不再收载新方法，主要加强10版新收载方法的推广。如一测多评、特征图谱和指

13、纹图谱、DNA分子鉴定、薄层生物自显影技术等。重视引导、推广、支持国产检验仪器的发展和应用，开展了国产仪器验证工作（与国外对比试验，进行重复性、检测限等检测限等）。检测限(与灵敏度区别)和定量限的计算。如进一个浓度0.1ug/mL的对照品溶液，得到该组分的信噪比为60:1，检测限为3倍信噪比，定量限为10倍信噪比。按照药典勘误改正药典。四、执行药典之配套及参考图书四、执行药典之配套及参考图书中国药典英文版中国药典注释90版有，10版即将出版。临床用药须知中国药典中药材粉末显微鉴别图鉴中国药典中药薄层色谱图集中国药典中药材及原植物彩色图鉴中药饮片炮制规范，15年全国中药饮片炮制规范五、五、GC法

14、在法在2010版版中国药典中国药典中的应用中的应用凡例：药典凡例第十条关于溶剂残留。正文一部中药材与饮片：冰片中龙脑含量、农药残留农药残留（甘草、黄芪）植物油脂和提取物：三七三醇皂苷的树脂残留、灯盏花素溶剂残留溶剂残留、满山红油特征图谱特征图谱、薄荷素油指纹图谱指纹图谱中成药：西瓜霜润喉片冰片、小儿感冒口服液百秋李醇冰片（合成龙脑）本品含龙脑不得少于55.0%满山红油特征图谱从中药指纹图谱中选取若干专属性强的色谱峰组成特征指纹图谱，用于中药的专属性鉴别。薄荷素油指纹图谱斜率灵敏度：斜率灵敏度：平直的色谱基线其斜率为0，当出现色谱峰时斜率会快速增大，当斜率大于或等于设定值，积分仪就认为是出峰了，

15、便开始积分。当斜率由正变负，即为色谱峰的最大值即峰高。峰出完后，斜率的绝对值变小，低于设定值时，积分仪认为峰结束，停止积分。峰宽：峰宽：设定采集数据速率的。峰宽设定越小，采集速率越快。对于很窄的峰，采集速率应足够快，否则会使峰形畸变，甚至丢失；对于很宽的峰，采集速率可慢一些。否则信号的微小波动也作为峰处理，将峰分裂为几个峰。最小峰高：最小峰高：符合斜率标准，信号大于最小峰高时开始积分。阀值越大，色谱峰开始积分点推后，结束点越提前。最小峰面积：最小峰面积：当积分结束后，某一色谱峰是否参与最后的计算，取决于最小峰面积的设定值。前三个决定积分的准确性。三者要相互配合。如基线噪声大而色谱峰也都较大时，

16、斜率的设置难以有效除去噪声，将峰宽或最小峰高设大一些。对很小的色谱峰积分时，将最小峰高设小一些，峰宽设大一些，色谱峰一般比基线噪声的宽度大。程序升温分析时，高温下基线会出现不同程度的漂移，将斜率设大一些，避免误将基线漂移作为峰来处理。最小峰面积积分后计算时才使用，对于归一化法要注意最小峰面积的设定。中药色谱指纹图谱相似度评价系统本软件系统包括两个应用版本：研究版（2004A）和检验版（2004B）。研究版主要用于科学研究工作，具有生成对照图谱功能。检验版侧重于色谱指纹图谱的检验工作，功能简化，不具有生成对照图谱的功能。本系统支持三种格式文件的导入：AIA(即*.cdf)文件，文本文件（*.tx

17、t）和Scp(*.Scp)格式文件的导入。建议采用建议采用通用的通用的AIA（*.cdf）格式文件导入。注意）格式文件导入。注意AIA（*.cdf）文件中应包含样本图谱的峰面积信息，在色谱工作站导出文件中应包含样本图谱的峰面积信息，在色谱工作站导出AIA（*.cdf）文件前应现进行积分。否则导出的）文件前应现进行积分。否则导出的AIA（*.cdf）文件可能因不包含峰面积信息而无法导入。）文件可能因不包含峰面积信息而无法导入。文件导入设参照图谱自动匹配对照图谱生成相似度评价打印报告如需要开发指纹图谱的新方法和进行相似度评价可以免费代做。二部乙醇中挥发性杂质的检查(药典勘误)、明胶空心胶囊中氯乙醇

18、和环氧乙烷的检查、吐温类、聚乙二醇类的杂质检查、纤维素类甲氧基、乙氧基和羟丙氧基、丙二醇中有关物质的检查、溶剂残留检查。明胶空心胶囊（肠溶明胶空心胶囊）的限量检查氯乙醇为空心胶囊用环氧乙烷消毒过程衍生的有机物质，为亲肝性毒物，沸点128-130。C=2ug/mLV=1mLS=2.0g附录制剂通则制剂通则：流浸膏、药酒、酊剂的乙醇、药酒和口服酊剂的甲醇检查。通用检测方法：通用检测方法：乙醇量检查法甲醇量检查法水分测定法第四法-气相色谱法（一部）溶剂残留检查法农药残留检查法桉油精含量测定方法甲氧基、乙氧基和羟丙氧基测定法附录IXM乙醇量测定法（蒸馏法与GC法不一致，以后者为准）以正丙醇为内标物(在

19、不含内标物的供试品溶液中，内标物的位置不得出现杂质峰)，FID测定各种制剂（药酒、酊剂、流浸膏剂）在20时乙醇的含量（%）（mL/mL）。如藿香正气水检查乙醇量应为40-50%（附录IXM）标准溶液的制备标准溶液的制备量取恒温至20无水乙醇4、5、6mL，置100mL量瓶中，分别精密加入恒温至20正丙醇5mL，加水定容。进样得校正因子。(CR=4%、5%、6%，CS=5%)供试品溶液的制备供试品溶液的制备量取恒温至20的供试品（约相当于乙醇5mL，如藿香正气水含40-50%，10mL）置100mL量瓶中，分别精密加入恒温至20正丙醇5mL，加水定容，进样测含量。（CS=5%)注意：毛细管柱法稀

20、释100倍后进样。计算过程一样。系统适应性实验毛细管法（INNOWAX，0.53mm，气液色谱）上述3份标准溶液各进样3次，9个校正因子RSD2.0%，塔板数正丙醇8000，Rs2.0(出现峰形变差可提高柱温老化柱子)填充柱法（GDX，2m，气固色谱）塔板数正丙醇700（如不满足，改变进样口、柱、检测器温度）规定:重复性（内标）-80%、100%、120%，至少做2次，校正因子RSD2.0%。(外标)-同一溶液进5次。各品种项下规定的色谱条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度

21、等，均可适当改变，以适应系统适应性试验的要求。补充为满足系统适用性要求，有时需要调整流动相组分的比例。以组分比例较低者(小于或等于50%)相对改变量不超过30%且绝对改变量不超过10%为限，如30%相对改变量的数值超过10%时，则改变量以10%为限。二元流动相系统50：50 50%的最大相对改变量为15%，已超过了绝对改变量允许的范围，比例调节的范围是10%，即40：60至60：40。2：98 2%的最大相对改变量为0.6%，比例调节的范围是1.4：98.6至2.6：97.4三元流动相系统（60：35：5）可每次调节比例较低的两个组分。对于35%的组分，其最大相对改变量为10.5%，已超过了绝

22、对改变量允许的范围，故该组分比例调节的范围是10%，即25%-45%，则流动相系统比例的调节范围是50：45：5至70：25：5 对于5%的组分,其最大相对改变量为1.5%,该组分比例调节的范围是1.5%，即3.5%-6.5%，则流动相系统比例的调节是58.5：35：6.5至 61.5：35：3.5 结果判断测2份供试品溶液，RDS2.0%，否则应重新测定。根据测定结果的平均值判断是否符合规定，不符合应复测。附录IN甲醇量测定法（酒剂、口服酊剂）藿香正气水检查其它-应符合酊剂下有关的各项规定（附录IN）柱子同乙醇量测定法毛细管柱用顶空进样，外标法计算含量。填充柱用手动进样，内标法计算含量，内标

23、物相应位置出现杂质峰，改用外标法。计算注意最后浓度的换算供试品溶液的制备：取内标1mL置10mL容量瓶中，加供试品溶液定容。结果判断：两次测定结果RSD10%,否则应重新测定。根据测定结果的平均值判断是否符合规定，除另有规定外，甲醇量0.05%。附录IXH水分测定法第四法气相色谱法以纯化水为对照，无水乙醇为溶剂，热导热导检测器（检测器（TCD），），测定贵重药材及其制剂中的含水量。色谱柱：高分子多孔小球填充柱。（可改用毛细管柱，系统适应性实验须满足要求）对照品溶液的制备对照品溶液的制备取纯化水约0.2g，置25mL量瓶中加无水乙醇无水乙醇定容。供试品溶液的制备供试品溶液的制备取供试品适量（含水

24、量约0.2g），置锥形瓶中加无水乙醇无水乙醇50mL，密塞（防空气中水分进入），超声，倾取上清液。测定测定取无水乙醇、对照溶液和供试品溶液各1-5微升。先计算先计算K值值外标法计算供试品水分，扣除无水乙醇的含水量。外标法计算供试品水分，扣除无水乙醇的含水量。高分子多孔微球（GDX）属于气固色谱。用于分离水及含羟基（醇）化合物和永久性气体如H2、O2、N2等。GDX由苯乙烯和二乙烯基苯共聚而成，属于非极性固定相，分析醇、醛、水和其它短链极性化合物，可得到对称的色谱峰。它对含OH化合物的亲和力很弱，可使水在有机化合物出峰之前出峰，而所得水峰对称，适合有机溶剂中痕量、微量水的测定。永久性气体在气液色

25、谱中不能分离，在固定液中溶解度极小，分配系数几乎相同而固体吸附剂对永久性气体有好的吸附能力。附录IXQ农药残留量测定法（痕量）用GC法测定药材（甘草、黄芪）、饮片、制剂中有机氯、有机磷、拟除虫菊酯类农药。难点痕量痕量分析，要求极高的检测灵敏度。中药样品种类各异，基体成分复杂基体成分复杂高、中等含水量的样品（提取加无水NaSO4）根和鳞茎类：甘草、贝母叶绿素含量低：豆蔻、陈皮叶绿素含量高：大青叶、薄荷含糖量高的样品：枸杞、麦冬（提取加水）含脂肪高的样品：酸枣仁对试验操作、仪器操作技术要求高要求高硬件条件和检测成本较高成本较高毒性强，检测风险大风险大农药的分类按照用途：杀虫剂、杀螨剂、杀菌剂、除草

26、剂、植物生长调节剂等。按照结构特点矿物类农药-无机化合物：有机氯、有机磷有机氯、有机磷、氨基甲酸酯类化学合成农药-有机化合物：拟除虫菊酯类拟除虫菊酯类生物类农药-天然有机物（有机氮类）、抗生素（杂环类）、生物类农药（有机金属类）世界上正使用的农药超过750种，对人类健康造成巨大威胁-农残分析日益受到重视。农残分析的一般程序样品收集：采样具科学性、代表性前处理：预处理预处理（粉碎）-提取提取（超声提取，不单独采用非极性溶剂，常与极性溶剂合用或用极性溶剂如70%丙酮、乙酸乙酯、石油醚-丙酮）-净化净化（磺化法、液液分配法、低温冷冻法、柱层析法）-浓缩浓缩（真空旋转蒸发法、氮吹仪、自然挥发法）仪器分

27、析：GC-ECD、NPD、FPD(70%以上)GC/MS-EI、CIHPLC-UV、DAD、FLD（氨基甲酸酯类）一、有机磷农药残留量测定法六六六（4种）、DDT（4种）、五氯硝基苯有机氯农药是农药中使用量最大，使用历史最长的一类农药，性质稳定，残效期长（达3050年），易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒。2000版中国药典开始收载有机氯农药。仪器：GC、手动进样器、ECD、载气为高纯氮（安脱氧管）、旋转蒸发仪（负压液体沸点降低）、柱子：SE-54（弱极性）、DB-1701（中等极性）毛细管柱，均为不分流进样（0.75min）和程序升温，二者进样口和柱温不同。试剂：农残级试剂或分析纯重蒸馏。注意

28、：只有分流进样灵敏度达不到要求才采用不分流进样。分流不分流采用的是同一个进样口。时间设置90-120s，保证全部组分进入色谱柱，选择一个待测组分的峰面积为指标，该面积代表100%进入了色谱柱。然后逐步缩短不分流时间如70、50、30s分别进样分析，计算与第一次的峰面积比值只到小于0.95.95%-99%为最佳吹扫时间。对照品储备液：分别制成4-5ug/mL。混合对照品储备液：稀释20倍。混合对照品溶液：石油醚（60-90）制成0、1、5、10、50、100、250ug/L。7个浓度均做，最后用与样品面积最接近那个浓度按外标法计算含量。总BHC、总DDT低于千万分之二，PCNB低于千万分之一70

29、%丙酮超声提取，二氯甲烷、丙酮/水液液萃取，浓硫酸进行磺化处理，利用脂肪、蜡质等杂质与浓硫酸磺化生成极性大的物质与农药分离。对易分解或发生反应的有机磷、氨基甲酸酯类农药不可使用。注意加入硫酸后量取的上清液要用水洗，除尽硫酸，减少对仪器和柱子的破坏。加氯化钠后应充分搅拌使其溶解，使二氯甲烷、丙酮/水溶液彻底分层，不加氯化钠三者不分层。无水硫酸钠目的是除去水分，不可以用太多，一般为5-6g，否则会影响回收率。补足重量为部分取样法，完全取样法一般为回收溶剂定容。近干一般为剩下一滴，不要全干，避免农药损失。氮吹仪浓缩农药损失率低，但溶剂处理量小。实验用器皿应严格清洗，不能残存卤素离子。操作应避光，光线

30、使许多农药降解。二、有机磷农药残留量测定法有机磷农药具有毒性，其残留严重危及人体健康。2010中国药典一部收载12种有机磷农药测定方法。色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱(30m0.25mm0.25m)DB-17MS(或HP-5)，氮氮磷检测器磷检测器（NPD）。进样口温度230；检测器温度300，不分流进样不分流进样。程序升温程序升温：初始120，每分钟10升至220，每分钟5升至240，保持2分钟，每分钟20升至270，保持0.5分钟。理论板数按敌敌畏峰计算不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。对照品储备液制备对照品储备液制备称取对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺

31、磷、久效磷、二嗪农、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成约100ug/mL的溶液。混合对照品储备液的制备混合对照品储备液的制备量取上述各对照品储备液1ml，置20ml棕色量瓶中,加乙酸乙酯定容。混合对照品溶液的制备混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用乙酸乙酯制成每1mL含0.1g、0.5g、1g、2g、5g的溶液，即得。供试品溶液制备取供试品约5g，加无水硫酸钠5g，加入乙酸乙酯乙酸乙酯50100ml，冰浴超声冰浴超声处理3分钟，放置，取上层液滤过。取滤液于40以下以下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取

32、1ml，置活性炭小柱活性炭小柱（乙酸乙酯5ml预洗），置真空样品处理器上，用正己烷正己烷-乙酸乙酯乙酸乙酯（1：1）混合液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干近干，加入乙酸乙酯1ml使溶解。测定及结果计算进1uL对照品溶液和供试品溶液，分别进样3次，取平均值，外标法计算12种有机磷含量。5.11000100%玻璃仪器不能用含磷含磷洗涤剂洗涤，应用洗液浸泡洗涤，使用前用丙酮荡洗并挥干溶剂。无水硫酸钠脱水，剧烈振摇后如有固体硫酸钠存在，说明所加无水硫酸钠已够。国际上多用乙腈作为有机磷农药的提取试剂及分配净化试剂，但其毒性较大，用乙酸乙酯。一般提取3次。冷冻法使药材中蜡质等沉淀析出，而农药留

33、在溶液中，超声时候加冰块，温度高有机磷损失。活性炭对植物色素有很强的吸附作用。拟除虫菊酯类农药残留量测定与DDT同属轴突毒剂，中毒症状相似。菊酯类毒理作用迅速，危害人体健康。10版收载三种。三类农药都是神经毒剂，阻断神经传导，不直接杀死神经细胞。色谱条件与系统适用性试验弹性石英毛细管柱（30m*0.32mm*0.25um)SE-54(或DB-5），63Ni-ECD电子捕获检测器电子捕获检测器。进样口温度270，检测器温度330。分流比20：1；5：1（或根据仪器设置选择最佳的分流比）。程序升温。对照品贮备液的制备称取氯氰菊酯、氰氯氰菊酯、氰戊菊酯及溴氰菊酯戊菊酯及溴氰菊酯农药对照品适量，用石油

34、醚（6090）分别制成约2025ug/ml的溶液。混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液1ml，置10ml量瓶中，用石油醚稀释至刻度。混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品贮备液，用石油醚稀释制成每1L分别含0ug、4ug、8ug、40ug、200ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取供试品于60干燥4小时，粉碎成细粉，取约12g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加石油醚（石油醚（6090）-丙酮丙酮（4：1）混合溶液30ml，超声超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液。滤液加入适量无水硫酸钠无水硫酸钠脱水后，于4045减压浓缩至近干，用少量石油醚反复操作至

35、丙酮除净，残渣加适量石油醚溶解，置混合小柱混合小柱从下至上依次为无水硫酸钠2g、弗罗里硅土4g（祛除色素祛除色素）、微晶纤维素1g、氧化铝1g（除糖苷类除糖苷类）、无水硫酸钠2g上，用石油醚-乙醚（4：1）混合溶液90ml洗脱，收集洗脱液，于4045减压浓缩至近干，再用石油醚34ml重复操作至乙醚除净，用石油醚溶解转移至5ml量瓶中，并定容。1.81000100%测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1ul，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中3种拟除虫菊酯农药残留量。残留溶剂测定法药典凡例第十条：对于生产过程中引入的有机溶剂，应在后续的生产环节予以有效

36、去除。除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行该项检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项检查的各品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的限度规定。药物中的残留溶剂指在原料药或辅料的生产中，以及制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。2010版中国药典参考了国际协调大会（ICH）颁布的残留溶剂研究指导原则，所监测的四类有机溶剂和限量值见限度标准一览表。中国药典的限量要求与日本药典、美国药典（USP467）欧洲药典（EP）中的规定基本相同。仪器：GC、顶空进样装置供试品中残留溶剂种类

37、的确定进甲烷气体做为色谱的死时间t0称取丁酮，溶剂稀释作为内标溶液。称取供试品，用内标溶液稀释成0.1-0.5g/mL的供试品溶液。采用推荐的程序升温法，在SPB-1和HP-INNOWAX测定，时间窗为5%。供试品溶液的制备顶空进样：供试品常以水为溶剂，对于非水性药物，用N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜。溶液直接进样对照品溶液的制备制备同上，浓度应注意：限度检查-根据残留溶剂的限度确定对照品溶液浓度；含量测定-根据样品中实际残留量，A对照品2倍供试品A色谱峰测定法消旋卡多曲原料药有机残留检验方法改进实验方案公司现行方法：氯仿和二氯甲烷由于使用的检测器和色谱条件不同，分别检测，对实际操作造成麻烦

38、。氯仿用HP-5毛细管色谱柱，FID检测器检测器，进样口温度200，检测器温度300；程序升温：35保持8分钟，以每分钟100的升温速度升温至230，保持8分钟。二氯甲烷采用固定液为二甲基聚烷氧烷的石英毛细管柱，电子捕获检测器电子捕获检测器，程序升温，在45保持5分钟，再以每分钟10的速率升至180，保持3分钟，检测器温度250，进样口温度200。新方法的基本思路：由于FID检测器对卤素的灵敏度较差，对氯仿实际检测过程中色谱图峰型较差，常常拖尾，且二氯甲烷检测需要换条件检测，检测过程较繁琐。采用ECD检测器，有较好的灵敏度，可以保证很好的峰型，因此，基于上述缺点，本方法改进的目的是配制氯仿和二

39、氯甲烷混合的对照品溶液和供试品溶液，放顶空瓶进样，以外标法计算。选择合适的色谱条件一次进样将氯仿和二氯甲烷分开，分离度大于1.5，节约时间，节省溶剂。方法学验证检验项目（参考2010版药典附录194药品质量标准分析方法验证指导原则）：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围、耐用性等杂质测定项要求。顶空进样法顶空进样法为顶空装置与气相色谱仪联用的仪器。它利用被测样品（气-液和气-固）加热平衡后，取其挥发气体部分进入气相色谱仪。它专用于分析易挥发的微量成分，如对甲醇、乙醇等易挥发的残留溶剂类，带有易挥发成分的中草药类等均可用它进行定量分析。顶空进样分为溶液顶空和固体顶空。静态顶空、动态顶空。顶空进样过程示意图顶空注意事项平行样应该放两个顶空瓶中，分别进样。一个顶空瓶只允许进样一次。用标准溶液加入法操作时候，对照品加入到供试品前需要把供试品拿跟加入对照品溶液体积相同的溶剂稀释一下。否则会改变相比。计算的时候注意稀释倍数的转换。参数主要包括GC参数和顶空参数（平衡温度、平衡时间、管线温度）。管线温度一般稍高于平衡温度，防止在管线中冷凝。