第三章 高效液相色谱.ppt

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1、高效液相色谱法高效液相色谱法High Performance Liquid ChromatographyHPLC1高效液相色谱法高效液相色谱法一、一、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点二、流程及主要部件二、流程及主要部件三、固定相和流动相三、固定相和流动相四、四、主要分离类型主要分离类型五五、影响分离的因素影响分离的因素2以以液体作为流动相的色谱过程液体作为流动相的色谱过程HPLC定义定义3高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点高压高压高压高压 -150 350 x 10-150 350 x 105 5 Pa Pa高效高效高效高效 -3-3-3-3万塔板万塔板万塔板万塔板/米米米米高灵

2、敏度高灵敏度高灵敏度高灵敏度 -10-10-10-10-9-9-9-9 10 10 10 10-11-11-11-11 g g g g 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法4GCGCHPLCHPLC流动相流动相惰惰性性气气体体（无无亲亲和和性性，只只起运载作用）起运载作用）气体、沸点较低的化合物气体、沸点较低的化合物不不同同极极性性的的液液体体（有有一一定亲和作用）定亲和作用）温温 度度 较较 高高一般室温一般室温分析对象分析对象高沸点、不稳定的天高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、然产物、生物大分子、高分子化合物高分子化合物GC与

3、与HPLC比较比较5（一）分配色谱一）分配色谱 （二）吸附色谱（二）吸附色谱（三）离子交换色谱法（三）离子交换色谱法 （四）排阻色谱法（四）排阻色谱法高效液相色谱法的类型高效液相色谱法的类型6分配色谱分配色谱液液分配色谱液液分配色谱液液分配色谱液液分配色谱(LLPCLLPCLLPCLLPC)键合固定相分配色谱键合固定相分配色谱键合固定相分配色谱键合固定相分配色谱(LSPCLSPCLSPCLSPC)分配色谱法分配色谱法(Partition Chromatography)(Partition Chromatography)液体固定相通过物理液体固定相通过物理液体固定相通过物理液体固定相通过物理吸附

4、固定于载体表面吸附固定于载体表面吸附固定于载体表面吸附固定于载体表面有机分子通过化学反有机分子通过化学反有机分子通过化学反有机分子通过化学反应键合到载体表面应键合到载体表面应键合到载体表面应键合到载体表面7分配色谱分离原理不同组分在两相间分配系数不同不同组分在两相间分配系数不同8固定相固定相 -物理吸附物理吸附物理吸附物理吸附 （担体担体担体担体 +固定液）固定液）固定液）固定液）全多孔型担体全多孔型担体全多孔型担体全多孔型担体薄壳型微珠担体薄壳型微珠担体薄壳型微珠担体薄壳型微珠担体分配色谱固定相分配色谱固定相固定相固定相固定相固定相 -化学键合化学键合化学键合化学键合R-极极性性基基团团 疏

5、疏水水基基团团 离子交换基团离子交换基团9固定相的化学构造固定相的化学构造非键合相表面非键合相表面非键合相表面非键合相表面键合相表面键合相表面键合相表面键合相表面ODC CODC C1818 C C8 8 C C1 1 PhenylPhenyl -NH -NH2 2 -CN -CN10正相HPLC（normal phase HPLC）：是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。反相HPLC（reversed phase HPLC）：由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相H

6、PLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式。ODS（Octa Decyltrichloro Silane)11正相分配色谱正相分配色谱正相分配色谱正相分配色谱反相分配色谱反相分配色谱反相分配色谱反相分配色谱固定相性质固定相性质极性极性非极性非极性键合基团键合基团 极性基团极性基团疏水基团疏水基团流动相性质流动相性质非极性非极性极性极性出峰顺序出峰顺序 极性小先出极性小先出 极性大先出极性大先出12吸附色谱法吸附色谱法分离原理分离原理溶质与流动相分子在吸附剂表面上溶质与流动相分子在吸附剂表面上溶质与流动相分子在吸

7、附剂表面上溶质与流动相分子在吸附剂表面上的吸附竞争的吸附竞争的吸附竞争的吸附竞争13吸附色谱固定相吸附色谱固定相 以固体吸附剂为固定相，如硅胶、以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是氧化铝等，较常使用的是510m的硅胶吸附剂。流动相可以是各种的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂不同极性的一元或多元溶剂。14离子交换色谱离子交换色谱 固定相为离子交换树脂固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱流动相为无机酸或无机碱的水溶液。的水溶液。各种离子根据它们与树脂上的交换各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。基团的交换能力的不同而得到分离。分离

8、原理分离原理固定相固定相固定相固定相分离对象分离对象离子或可离解的化合物离子或可离解的化合物离子或可离解的化合物离子或可离解的化合物（无机离子、氨基酸、蛋白质等）（无机离子、氨基酸、蛋白质等）（无机离子、氨基酸、蛋白质等）（无机离子、氨基酸、蛋白质等）15 分离原理分离原理根据样品分子尺寸大小分离根据样品分子尺寸大小分离 大分子不能进入多孔中，不被保留，随大分子不能进入多孔中，不被保留，随 VmVm流出流出 中分子部分进入多孔中，一般保留中分子部分进入多孔中，一般保留 小分子完全进入多孔中，长时间保留。小分子完全进入多孔中，长时间保留。排阻色排阻色谱法谱法(凝胶色谱法凝胶色谱法)161.1.软

9、凝胶：软凝胶：铰链葡萄糖的多孔聚合物，铰链葡萄糖的多孔聚合物，聚丙烯酰胺凝胶。（凝胶过滤色谱）聚丙烯酰胺凝胶。（凝胶过滤色谱）2.2.半硬凝胶：半硬凝胶：聚苯乙烯珠（凝胶渗透色谱）聚苯乙烯珠（凝胶渗透色谱）3.3.高硬凝胶和玻璃：高硬凝胶和玻璃：多孔玻璃或多孔硅球，多孔玻璃或多孔硅球，经化学键合处理，不随压力及溶剂改变经化学键合处理，不随压力及溶剂改变尺寸，（高效排阻色尺寸，（高效排阻色 谱）谱）排阻色谱固定相排阻色谱固定相17高分子化合物分子量及分子量分布高分子化合物分子量及分子量分布高分子化合物分子量及分子量分布高分子化合物分子量及分子量分布 DNADNADNADNA碎片不同碱基支链分离。

10、碎片不同碱基支链分离。碎片不同碱基支链分离。碎片不同碱基支链分离。应用应用18流动液贮存提供脱气流动液贮存提供脱气输液泵输液泵进样系统进样系统分离系统分离系统检测系统检测系统控制与记录系统控制与记录系统 高效液相色谱仪高效液相色谱仪19日本岛津公司日本岛津公司20美国美国WatersWaters公司公司21（1 1 1 1）真空泵抽滤系统）真空泵抽滤系统）真空泵抽滤系统）真空泵抽滤系统（2 2 2 2）低溶性惰性气体导入替换）低溶性惰性气体导入替换）低溶性惰性气体导入替换）低溶性惰性气体导入替换（3 3 3 3）超声脱气）超声脱气）超声脱气）超声脱气（4 4 4 4）在线脱气）在线脱气）在线脱

11、气）在线脱气流动相脱气方法流动相脱气方法22输液系统输液系统高压输液泵：高压输液泵：高压输液泵是液相色谱仪的关键部高压输液泵是液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。速或压力输送到色谱系统。输液泵的稳定性直接关系到分析结输液泵的稳定性直接关系到分析结果的重复性和准确性。果的重复性和准确性。活塞泵活塞泵 注射泵注射泵 气动泵气动泵23进样系统进样系统 不使整个压力变不使整个压力变不使整个压力变不使整个压力变化的情况下将样品化的情况下将样品化的情况下将样品化的情况下将样品注入色谱柱，通常注入色谱柱，通常注入色谱柱，通常注入色谱柱，通常使

12、用所谓使用所谓使用所谓使用所谓六通阀六通阀六通阀六通阀24色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱泵泵泵泵12进进样样 不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，不使整个压力变化的情况下将样品注入色谱柱，通常使用所谓通常使用所谓六通六通阀阀阀阀进样系统进样系统25色谱柱色谱柱色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。特性、填充质量和使用条件有关。26检测器检测器 用来连续监测经色谱柱分离后的流出物用来连续监测经色谱柱分离后的流出物的组成和含量变化的装置。的组成和含

13、量变化的装置。紫外紫外-可见检测器可见检测器荧光检测器荧光检测器电化学检测器电化学检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器质谱检测器质谱检测器27v单单波波长长UVUV检检测测器器，光光源源用用HgHg灯灯，加加滤滤光光片片可可以以到到254254，280280，313313，334334，365365等等。生化中用到很多。生化中用到很多。v多波长多波长 光度计类似，光栅或棱镜分光光度计类似，光栅或棱镜分光Alg（I0/It)=b c紫外紫外-可见检测器可见检测器28荧光检测器荧光检测器许多有机化合物，特别是芳香族化合物、许多有机化合物，特别是芳香族化合物、被一定强度和波长的紫外光照射后，发射出

14、较激被一定强度和波长的紫外光照射后，发射出较激发光波长要长的荧光。但可以与发荧光物质反应发光波长要长的荧光。但可以与发荧光物质反应衍生化后检测。衍生化后检测。特点：特点：有非常高的灵敏度和良好的选择性，灵有非常高的灵敏度和良好的选择性，灵敏度要比紫外检测法高敏度要比紫外检测法高2 2 3 3个数量级，特别适合个数量级，特别适合于药物和生物化学样品的分析。于药物和生物化学样品的分析。29荧光检测器结构示意图荧光检测器结构示意图光源光源检测器检测器滤光片滤光片检测室检测室30蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收、无蒸发光散射检测器适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样

15、品的检测。电活性和不发荧光的样品的检测。31电化学检测器电化学检测器（以电导检测器为例）（以电导检测器为例）电导仪电导仪电极电极电极电极32标准样品法标准样品法谱库谱库 HPLC-FTIRHPLC-FTIR HPLC-MS HPLC-MS 定性分析定性分析定量分析定量分析峰面积峰面积峰面积峰面积浓度或质量浓度或质量浓度或质量浓度或质量33小结小结四种色谱分离模式的分离机理及应用范围四种色谱分离模式的分离机理及应用范围反相色谱的概念反相色谱的概念紫外可见检测器紫外可见检测器常用的固定相和流动相常用的固定相和流动相34高效液相色谱应用实例高效液相色谱应用实例35 柱后pH调节电导检测对有机酸具有高

16、选择性和高灵敏度对有机酸具有高选择性和高灵敏度36有有机机酸分析酸分析系统系统流流程图程图2348756 91011、2 泵 3 进样器 4 柱温箱 5 电导检测器 6 数据处理机 7 混合室 8 柱子 9 流动相 10 缓冲液37分析条件分析条件分离条件分离条件 色谱柱：色谱柱：Shim-pack SCR-102H(8mmI.D300mmL.)1个或个或2个分析柱连接个分析柱连接 保护柱保护柱 SCR-102H(6mmI.D.50mmL.)流动相流动相：5mM p-甲苯亚磺酸水溶液甲苯亚磺酸水溶液流量流量 ：0.8mL/min温度温度 ：40或或45检测检测条件条件缓冲液缓冲液：20mM B

17、is-tris 水溶液水溶液 含含 5mM p-甲苯亚磺酸和甲苯亚磺酸和100 EDTA流量流量 ：0.8mL/min检测器检测器：电导检测器电导检测器 polarity;+38样品的分析实例样品的分析实例食品食品啤酒啤酒，清酒清酒，葡萄酒葡萄酒，酱油等酱油等体液体液血清血清，尿，尿等等医药品医药品肾的透析肾的透析液，液，钙制剂等钙制剂等发发酵酵微生物培微生物培养液养液，酸奶等酸奶等环境环境工厂废水等工厂废水等39有机酸标准品的色谱图有机酸标准品的色谱图1 1一个分析柱一个分析柱 1.1.磷酸磷酸 2.2.柠檬酸柠檬酸 3 3.丙酮酸丙酮酸 4 4.苹果酸苹果酸 5 5.琥珀酸琥珀酸 6 6.

18、乳酸乳酸 7 7.甲酸甲酸 8 8.乙酸乙酸 9 9.乙酰丙酸乙酰丙酸1010.焦谷氨酸焦谷氨酸40啤酒的色谱图啤酒的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2 2.柠檬酸柠檬酸 3 3.丙酮酸丙酮酸 4 4.苹果酸苹果酸 5 5.琥珀酸琥珀酸 6 6.乳酸乳酸 7 7.甲酸甲酸 8 8.乙酸乙酸 9 9.焦谷氨酸焦谷氨酸1010.碳酸碳酸前处理前处理振荡除去碳酸气后，振荡除去碳酸气后，过滤过滤1010进样进样41清酒的色谱图清酒的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2 2.柠檬酸柠檬酸 3 3.丙酮酸丙酮酸 4 4.苹果酸苹果酸 5 5.琥珀酸琥珀酸 6 6.乳酸乳酸 7 7.乙酸乙酸 8 8.焦谷氨酸焦谷氨酸前处

19、理前处理过滤后，进样过滤后，进样1010min.42葡萄酒的色谱图葡萄酒的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2.2.柠檬酸柠檬酸 3 3.酒石酸酒石酸 4 4.苹果酸苹果酸 5 5.琥珀酸琥珀酸 6 6.乳酸乳酸 7 7.甲酸甲酸 8 8.乙酸乙酸 9 9.焦谷氨酸焦谷氨酸前处理前处理用水稀释用水稀释1010倍后过滤倍后过滤进样量进样量1010 min.43 酱油的色谱图酱油的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2.2.柠酸柠酸 3 3.丙酮酸丙酮酸 4 4.苹果酸苹果酸 5 5.琥珀酸琥珀酸 6 6.乳酸乳酸 7 7.甲酸甲酸 8 8.乙酸乙酸 9 9.乙酰丙酸乙酰丙酸1010.焦谷氨酸焦谷氨酸前处理前处理用

20、水稀释用水稀释1010倍后过滤倍后过滤进样量进样量1010 44血清的色谱图血清的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2 2.柠檬酸柠檬酸 3 3.丙酮酸丙酮酸 4 4.乳酸乳酸 5 5.甲酸甲酸 6 6.乙酸乙酸 7 7.焦谷氨酸焦谷氨酸 8 8.未知物未知物前处理前处理加高氯酸用离心法去沉淀物，加高氯酸用离心法去沉淀物，取上清液取上清液5uL5uL进样进样45尿尿样的色谱图样的色谱图 1.1.磷酸磷酸 2 2.柠檬酸柠檬酸 3 3.乳酸乳酸 4 4.甲酸甲酸 5 5.未知物未知物 6 6.焦谷氨酸焦谷氨酸 7 7 未知物未知物前处理前处理过滤后，进样过滤后，进样101046酸奶的色谱图酸奶的色谱图

21、1.1.磷酸磷酸 2.2.柠檬酸柠檬酸 3 3.琥珀酸琥珀酸 4 4.乳酸乳酸 5 5.甲酸甲酸 6 6.乙酸乙酸前处理前处理用水稀释用水稀释1010倍后过滤倍后过滤进样量进样量1010 47工厂废水的色谱图工厂废水的色谱图 1 1.甲酸甲酸 2 2.乙酸乙酸 3 3.丙酸丙酸 4 4.碳酸碳酸 5 5.丁酸丁酸 6 6.戊酸戊酸前处理前处理过滤后，进样过滤后，进样101048食品安全是所有国家的每个消费者关心的基本问题。残留农药和兽药是食品中主要的污染物世界上许多国家制定并实施食品安全法规，但是在美国、加拿大、欧盟以及日本食品安全法规更加严格的完善。在食品和农产品国际贸易中，残留农药和兽药的

22、检测中非常苛刻的。食品安全与污染物食品安全与污染物 49农产品农产品-谷物：大米等-豆类：大豆、豌豆等。-水果：橘柑，苹果，葡萄等。-蔬菜：洋白菜（甘蓝）、菠菜等-茶叶，种子，蜂蜜等。食品中残留检测食品中残留检测 审查农药残留审查农药残留 家畜及水产品家畜及水产品-牛肉，猪肉等-鸡肉、鹌鹑等-鱼类：黄尾鱼、虹鳟鱼，大马哈鱼等 -虾，对虾审查兽药残留审查兽药残留50全世界使用的农药超过700种：杀虫剂，除草剂，杀菌剂，脱叶剂，植物生长调节剂。残留：残存在农产品中的农药（降解缓慢）及其代谢物由以下原因所致：-使用更稳定的化学物质作农药。-农药的过度使用以及不合理使用。最大残留限量(MRL)：食品安

23、全的指标，通常MRL0.01-0.05mg/kg(ppm)食品中的农药残留食品中的农药残留51农药的残留（农药的残留（1）有机氯化物：有机氯化物：硫丹、荚蟥醚、克菌丹、抑菌灵、乙酯杀螨醇、溴螨酯、六六六、滴滴涕、异狄氏剂、敌菌丹、狄氏剂、六氯苯、七氯有机磷化物：有机磷化物：苯硫磷，乙硫磷，灭线磷，乙嘧硫磷，硫线磷，喹硫磷，毒死蜱，甲基毒死蜱，毒虫畏，蔬果磷，敌敌畏，乐果，二嗪磷，甲基嘧啶磷，杀螟硫磷，丰索磷，倍硫磷，稻丰散，丙硫磷，仗杀硫磷，马拉硫磷，杀扑磷，异稻瘟净，敌瘟磷，甲基立枯磷，特丁硫磷，抑草磷，苯腈磷，对硫磷，甲基对硫磷，甲拌磷52氨基甲酸酯：氨基甲酸酯：灭除威，异灭威，甲萘威，灭

24、杀威，抗蚜威，仲丁威，残杀威，恶虫威，速灭威，乙霉威，氯丙嗪，禾草丹拟除虫菊酯拟除虫菊酯氯氟氰菊酯，氟氯氰菊酯，氯氰菊酯，七氟菊酯，四溴菊酯，氰戊菊酯，氟氰戊菊酯，氟胺氰菊酯，氯菊酯含氮化合物：含氮化合物：甲氰菊酯，噻嗪酮，吡螨胺，恶霜灵，灭螨猛，三唑醇，三唑酮，氯苯嘧啶醇，氟酰胺，丙环唑，联苯三唑醇，灭锈胺，灭草灵，莠去津，双苯酸草胺，敌稗，二甲戊灵，氟乐灵，多效唑。农药的残留（农药的残留（2）53在过去几年中，相关法规已完成或修订，控制程度更加严格。在欧盟和美国已建立起完整的监测网络（参考实验室；参考材料及标准；计算机监视小组等）在样品净化，色谱分离和检测中使用改进的和新的分析技术及方法，

25、如GC/MS和LC/MS，就会产生更灵敏，更准确和更可靠的结果。公众比以前更加关注食品安全。欧盟和美国现在的形势欧盟和美国现在的形势54 灭除威，异灭威，甲萘威，灭杀威，抗蚜威，仲丁威，残杀威，恶虫威，克百威(呋喃丹),速灭威，乙霉威，氯丙嗪，禾草丹 氨基甲酸酯类农药55丁醛肟威草肟威呋喃丹CPMC残杀威（PHC，Arprocarb）苯噁威二甲杀威（MPMC）乙硫甲威灭定威甲萘威（NAC）XMC苯氧丁威（BPMC）甲硫威（Mercaptodimethur）异丙威（MIPC）乙肟威甲氧威（MTMC）氨基甲酸酯类农药结构氨基甲酸酯类农药结构56N-N-甲基甲基氨基甲酸酯的氨基甲酸酯的HPLCHPL

26、C分析方法分析方法流程图流程图 1、脱气装置 10、反应试剂输液机构 2、低压梯度装置 11、混合装置3、流动相输液机构 12、荧光检测器4、梯度混合器 13、阻尼盘管 5、自动进样器 14、反应盘管6、柱温箱 15、反应盘管7、分析柱 M1，M2：流动相8、化学反应箱 R1，R2：反应试剂液9、脱气装置57N-N-甲基氨基甲酸酯的甲基氨基甲酸酯的HPLCHPLC分析分析方法方法 N-氨基甲酸甲酯类农药的基本化学结构式它们的化合物在碱的条件下加水分解生成甲胺。这里生成的甲胺与一级胺的荧化衍生化试剂O-苯二甲醛（OPA）反应，可进行较高灵敏度的荧光检测。58氨基甲酸酯前处理过程氨基甲酸酯前处理过

27、程598成分的N-氨基甲酸甲酯类农药标准试样同时分析的色谱图 1994年6月9日官报上登载的成分的分析例 601616成分的成分的N-N-氨基甲酸甲酯类农药标准氨基甲酸甲酯类农药标准试样同时分析的色谱图试样同时分析的色谱图61甲硫威及其代谢物甲硫威及其代谢物甲硫威代谢物高灵敏度分析例（例如在橘子汁中不得含50ppb以上）甲硫威的检测限（S/N=3）为2ppb 62离子色谱离子色谱离子色谱过渡金属分析系统CN-离子分析系统63氨基酸分析系统氨基酸分析系统 64氨基酸分析系统氨基酸分析系统 NH2 R C COOH H65氨基酸衍生化方法氨基酸衍生化方法柱后衍生柱前衍生氨基酸氨基酸衍生化后的氨基酸

28、衍生化后的氨基酸试剂试剂色色谱谱柱柱检测检测器器色色谱谱柱柱检测检测器器 氨基酸氨基酸试剂试剂色色谱谱柱柱检测检测器器柱后衍生柱后衍生色色谱谱柱柱:阳离子交阳离子交换换柱柱试剂试剂:茚茚三三酮酮方法方法-UV/VIS 检测检测器器 OPA方法方法-荧荧光光检测检测器器 氨基酸衍生化氨基酸衍生化色谱柱色谱柱检察器检察器柱前衍生柱前衍生 异硫氰酸苯脂异硫氰酸苯脂（PITCPITC）Column:Revered Phase Column(ODS)Reagent:OPA(Fluorescence)FMOC(Fluorescence)Fluorescamine(Fluorescence)DANS-Cl(

29、Fluorescence)PITC(UV)柱前衍生步骤柱前衍生步骤1.200uL样品中加入100mM异硫氰酸苯酯 （乙腈溶液）100uL和1M三乙胺（乙腈溶液）100uL,室温下放置反应1小时2.反应液中加入400uL己烷3.放置，取下层溶液用一次性滤膜过滤器 （0.45um）过滤4.取滤液4uL注入69高效液相色谱高效液相色谱重点重点1.高效液相色谱法中的定性与定量分析方法；高效液相色谱法中的定性与定量分析方法；2.高效液相色谱法色谱条件的选择；高效液相色谱法色谱条件的选择；3.高效液相色谱法的分类及其分离机制；高效液相色谱法的分类及其分离机制；4.高效液相色谱仪的主要部件、功能原理和操作方法；高效液相色谱仪的主要部件、功能原理和操作方法；5.高效液相色谱的应用高效液相色谱的应用。70作业题作业题:简述气相色谱简述气相色谱简述气相色谱简述气相色谱(）和高效液相色谱（）和高效液相色谱（）和高效液相色谱（）和高效液相色谱（）的区别？的区别？的区别？的区别？71