第三章 酶2.ppt

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1、第五节第五节 酶活力及其测定酶活力及其测定一、一、酶活力酶活力及其测定及其测定 酶活力：是指酶催化一定化学反应酶活力：是指酶催化一定化学反应的能力。的能力。1、酶活力与酶反应速度、酶活力与酶反应速度 以单位时间内底物的消耗量或产以单位时间内底物的消耗量或产物的生成量衡量。物的生成量衡量。二二.活力单位活力单位(U)与比活与比活力力 酶单位（酶单位（U）：）：在在一定条件一定条件下、下、一定时间一定时间内、将内、将一定量一定量的的 底物转化为产物所需的酶量。底物转化为产物所需的酶量。如：如：每小时催化每小时催化1克底物克底物 每小时催化每小时催化1ml某浓度溶液某浓度溶液 每分钟催化每分钟催化1

2、ug底物底物一定时间一定时间一定量底物一定量底物一一定定条条件件下下（1）国际单位（）国际单位（IU）在在标准条件标准条件下（下（25 ，最适，最适pH和最和最适底物浓度）适底物浓度）一分钟一分钟内催化内催化1微摩尔微摩尔底底物物转化为产物所需的酶量。转化为产物所需的酶量。1 IU=1 mol/min 酶活力单位标准化酶活力单位标准化（2）Kat（一种新的酶活力国际单位）（一种新的酶活力国际单位）在在标准条件标准条件下（下（25 ，最适，最适pH和最适和最适底物浓度）底物浓度）每秒钟每秒钟催化催化1摩尔摩尔底物底物转化为转化为产物所需的酶量。产物所需的酶量。1 Kat=1 mol/s =601

3、06 IU酶活力单位标准化酶活力单位标准化比活性比活性(specific activity)单位质量酶产品中的酶活力称比活力。单位质量酶产品中的酶活力称比活力。u/mg酶蛋白酶蛋白 u/ml酶蛋白酶蛋白酶产品质量评价中常使用，酶产品质量评价中常使用，一定程度上代表酶的纯度。一定程度上代表酶的纯度。三、转换数三、转换数（turnover number，Kcat）一定条件下：一定条件下：w每秒钟、每个酶分子每秒钟、每个酶分子转换的底物分子数转换的底物分子数w或或每微摩尔酶分子每微摩尔酶分子转换底物的微摩尔数转换底物的微摩尔数w一秒内一秒内1摩尔的酶可催化几摩尔的底物摩尔的酶可催化几摩尔的底物 表示

4、酶催化中心的活性。表示酶催化中心的活性。酶活力测定实例酶活力测定实例确定反应条件确定反应条件 20、pH=7，底物浓度底物浓度 6g/l（过量）过量）加入加入2mg固体脂肪酶固体脂肪酶确定活力单位确定活力单位 每小时催化每小时催化1克底物克底物 1U=1g/h 测反应初速度测反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线，作产物甘油随时间增加的曲线，量出反应初速度值量出反应初速度值，换算为脂肪的消耗速度。如换算为脂肪的消耗速度。如 8g/h换算活力换算活力 8g/h/1g/h=8U计算比活力计算比活力 8U/2mg酶蛋白酶蛋白=4U/mg酶蛋白酶蛋白脂肪脂肪脂肪脂肪脂肪酶脂肪酶甘油甘油甘油甘油 +脂肪

5、酸脂肪酸脂肪酸脂肪酸第六节第六节 影响酶促反速度的因素影响酶促反速度的因素影响酶促反应速度的因素主要包括酶的浓度、底物的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。酶促反应动力学遵循化学反应动力学一般规律，但又有其特点。一、一、S对酶作用的影响对酶作用的影响一级反应：一级反应：v =kc反应速率与反应物浓度的一次方成正比反应速率与反应物浓度的一次方成正比零级反应：零级反应：v=kv 与反应物浓度无关与反应物浓度无关 v一级反应混合级反应零级反应S底物浓度对酶催化反应初速率的影响底物浓度对酶催化反应初速率的影响底物浓度对酶催化反应初速率的影响底物浓度对酶催化反应初速率的影响E+S ES P+Ek1k1k

6、2k2k3k3 k4三个假设：三个假设：（1）E与与S形成形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而复合物的反应是快速平衡反应，而 ES分解为分解为E及及P的反应为慢反应，反应速度取决于的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即慢反应即 Vk3ES。（2）S的总浓度远远大于的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初的总浓度，因此在反应的初始阶段，始阶段，S的浓度可认为不变即的浓度可认为不变即SSt。（3）P0 忽略忽略 这步反应这步反应 为了说明酶促反应速度与底物浓度关系，米氏方程被提出。为了说明酶促反应速度与底物浓度关系，米氏方程被提出。其推导过程：其推导过程：2、米氏方程推导米氏方程推导稳态时稳态

7、时ES浓度不变浓度不变 反应速度反应速度 V=k3ES ES的生成速度的生成速度=消耗速度消耗速度 k1ES=k2ES+k3ES E的质量平衡方程的质量平衡方程 Ef=Et-ESE+S ES P+Ek1k1k2k2k3k3()()()Vmax=k3ESmax=k3Et （IV）酶促反应的动力学方程式酶促反应的动力学方程式a.当当S很小时很小时V=VS/Km 一级一级一级一级反应反应米氏曲线米氏曲线米氏曲线米氏曲线V=VSKm+Sb.当当S很大时很大时V=VS/S=V 0 级反应级反应混合混合级级（1）Km的意义的意义2、米氏常数、米氏常数Km的意义的意义(2)Km是酶的特性常数：是酶的特性常数

8、：与与pH、温度、离子强度、酶温度、离子强度、酶及及底物种类底物种类有关，有关，与与酶浓度无关酶浓度无关，可以鉴定酶，可以鉴定酶。酶酶底物底物Km(mmolKm(mmol/L)/L)脲酶脲酶尿素尿素25溶菌酶溶菌酶6-N-乙酰葡萄糖胺乙酰葡萄糖胺0.006葡萄糖葡萄糖-6-磷酸磷酸脱氢酶脱氢酶6-磷酸磷酸-葡萄糖葡萄糖0.058胰凝乳蛋白酶胰凝乳蛋白酶苯甲苯甲酰酪氨酰胺酰酪氨酰胺2.5甲甲酰酪氨酰胺酰酪氨酰胺12.0乙乙酰酪氨酰胺酰酪氨酰胺32.0(3)Km可用来表示酶对底物的亲和力的大小，可用来表示酶对底物的亲和力的大小，鉴定酶的最适底物。鉴定酶的最适底物。(4)Km越越小小，亲和力越，亲和

9、力越强。强。SS很小时，很小时，反应速度就能达到很大。反应速度就能达到很大。性能优，代谢中性能优，代谢中这类酶更为重要这类酶更为重要(4)当当Km已知时，可求任何底物浓度下已知时，可求任何底物浓度下酶活性中心被底物饱和的分数酶活性中心被底物饱和的分数（5）判断可逆反应进行的方向）判断可逆反应进行的方向催化可逆反应的酶，对正反应和逆反应两项底物的催化可逆反应的酶，对正反应和逆反应两项底物的Km往往不同，往往不同，测定测定Km的差别和细胞内正逆反应底物浓度，可推测两项反应效的差别和细胞内正逆反应底物浓度，可推测两项反应效率，率，Km小的底物所示的反应方向，应是该酶催化的方向小的底物所示的反应方向，

10、应是该酶催化的方向（6）.了解了解 Km及其底物在细胞内的浓度，及其底物在细胞内的浓度，可以判断在细胞内酶活性是否受底物抑制。可以判断在细胞内酶活性是否受底物抑制。（7）.判断代谢中的限速步骤判断代谢中的限速步骤（8）.判断抑制剂类型判断抑制剂类型（9）.药用酶的筛选应用药用酶的筛选应用3、Vmax的意义Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。Lineweaver-Burk双倒数作图法双倒数作图法4、Km和和Vmax的测定的测定在底物过量、系统不含抑制剂等条件下在底物过量、系统不含抑制剂等条件下酶促反应速度与酶浓度成正比。酶促反应速度与酶浓度成正比。w最适最适pH时的酶活力最大

11、时的酶活力最大最适最适pH因酶而异，多数酶在因酶而异，多数酶在7.0左右左右是酶的特性常数之一是酶的特性常数之一胃蛋胃蛋白酶白酶木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶胆碱酯酶胆碱酯酶胰蛋白酶胰蛋白酶相对酶活力过氧化氢酶过氧化氢酶胃蛋白酶胃蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶精氨酸酶精氨酸酶延胡索酸酶延胡索酸酶RNA酶酶上图反映出温度如何影响酶活力？上图反映出温度如何影响酶活力？产产物物累累积积量量相相相相对对对对酶酶酶酶活活活活 最适温度w动物酶 3540w植物酶 4050w微生物 大部分 4050w个别高温菌 90以上温度越高，活化分子越多，温度越高，活化分子越多，反应速度快；反应速度快；但是，酶变性时间越短，但是，酶变性

12、时间越短，反应速度下降也迅速。反应速度下降也迅速。最适温度：最适温度：反应速率达到最大时的温度反应速率达到最大时的温度 不是酶的特征物理常数不是酶的特征物理常数 能提高酶活性的物质能提高酶活性的物质酶的激活剂酶的激活剂 w失活作用：失活作用：使酶使酶Pr变性而引起酶活力丧失变性而引起酶活力丧失w抑制作用：抑制作用：使酶活力下降但不引起变性使酶活力下降但不引起变性w抑制剂：抑制剂：能引起抑制作用的物质能引起抑制作用的物质 作用于酶的必需基团作用于酶的必需基团/活性中心基团活性中心基团 使其化学性质改变使其化学性质改变 酶活力降低或丧失酶活力降低或丧失引起酶活性降低的因素：引起酶活性降低的因素：失

13、活作用（失活作用（inactivation）变性剂，改变酶的天然构象变性剂，改变酶的天然构象 去激活作用去激活作用(deactivation)酶的激活剂被去除酶的激活剂被去除 抑制作用（抑制作用（inhibition）抑制剂抑制剂 依据：依据：能否用透析、超滤等物理方法能否用透析、超滤等物理方法 除去抑制剂，使酶复活。除去抑制剂，使酶复活。不可逆抑制与可逆抑制不可逆抑制与可逆抑制抑制作用的分类抑制作用的分类1.不可逆抑制作用不可逆抑制作用：抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连。抑制剂与酶必需基团以牢固的共价键相连。不可逆抑制剂分为：专一性和非专一性两种不可逆抑制剂分为：专一性和非专一性两种 很

14、多为剧毒物质很多为剧毒物质 重金属、有机磷、有机汞、有机砷、重金属、有机磷、有机汞、有机砷、氰化物、青霉素，毒鼠强等。氰化物、青霉素，毒鼠强等。不不可可逆逆抑抑制制剂剂 （1）非专一性不可逆抑制剂非专一性不可逆抑制剂 重金属离子重金属离子 Ag+、Cu2+、Hg2+、Pb2+、Fe3+高浓度时可使酶蛋白变性失活；高浓度时可使酶蛋白变性失活；低浓度时对酶活性产生抑制。低浓度时对酶活性产生抑制。通过加入通过加入EDTA解除解除 几种导致酶不可逆抑制的物质几种导致酶不可逆抑制的物质 H2N-CH-COOH CH2 SHH2N-CH-COOH CH2 S-CH2COOHICH2COOHHI烷化剂烷化剂

15、（多为卤素化合物多为卤素化合物）+碘乙酸碘乙酸有机磷化合物有机磷化合物（敌百虫、沙林）（敌百虫、沙林）胆碱胆碱酯酶酯酶OHPOC2H5OC2H5S有机磷农药部分如何紧急救治？如何紧急救治？排毒排毒洗胃、喝鸡蛋清或牛奶洗胃、喝鸡蛋清或牛奶导泄、利尿导泄、利尿 血液透析血液透析（清除游离状态毒物）（清除游离状态毒物）解毒药：解磷定解毒药：解磷定有机汞、有机砷化合物有机汞、有机砷化合物与酶分子中与酶分子中-SH作用；作用；可通过加入过量巯基化合物解除。可通过加入过量巯基化合物解除。氰化物、硫化物和氰化物、硫化物和CO 与酶与酶中金属离子形成稳定的络合物中金属离子形成稳定的络合物 如氰化物与含铁卟啉细

16、胞色素氧化酶结合如氰化物与含铁卟啉细胞色素氧化酶结合2.可逆抑制作用：可逆抑制作用：抑制作用可通过透析等方法除去。抑制作用可通过透析等方法除去。原因：非共价键结合原因：非共价键结合可可逆逆抑抑制制竞争性抑制竞争性抑制非竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制反竞争性抑制竞争性（竞争性（Competitive)抑制抑制（2）丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。（1）对氨基苯磺酰胺对二氢叶酸合成酶的竞争性抑制利用竞争性抑制是药物设计主要思路利用竞争性抑制是药物设计主要思路叶酸类似物：氨基喋呤。陆甲喋呤竞叶酸类似物：氨基喋呤。陆甲喋呤竞争性抑制二氢叶酸还原酶。争性抑制二氢叶酸还原酶。竞争性抑制的米氏方程

17、竞争性抑制的米氏方程V下降下降发生抑制发生抑制Km增大增大亲和力下降亲和力下降Vmax不变不变S 增大，增大，I结合机率减小结合机率减小竞争性竞争性：I与与S与酶活性中心结合与酶活性中心结合机会均等机会均等Km 变大，变大，Vmax不变不变抑制物抑制物截距截距非竞争性抑制的米氏方程非竞争性抑制的米氏方程V下降下降发生抑制发生抑制Km不变不变亲和力不受影响亲和力不受影响Vmax减小减小部分酶始终失活部分酶始终失活Km不变，不变，Vmax变小变小 反竞争性（反竞争性（Uncompetitive）抑制）抑制SvKm、Vmax都变小都变小 调节酶调节酶 通过改变酶活性调节代谢反应速度通过改变酶活性调节

18、代谢反应速度第七节第七节 调节酶调节酶一、变构酶一、变构酶变构变构：蛋白质在实现生物功能时，蛋白质在实现生物功能时，构象发生变化、活力改变的现象。构象发生变化、活力改变的现象。变构酶变构酶：具有变构现象的酶具有变构现象的酶变构剂变构剂：能使酶分子发生变构作用的物质能使酶分子发生变构作用的物质变构激活剂变构激活剂变构抑制剂变构抑制剂 1、变构酶的特点、变构酶的特点（1）多亚基寡聚酶）多亚基寡聚酶有活性中心、有活性中心、变构调节中心变构调节中心变构调控效应变构调控效应（allosteric reglation）（2）一般位于代谢路径的第一步反应一般位于代谢路径的第一步反应（3）变构酶动力学：）变构

19、酶动力学：S形曲线（正协同）形曲线（正协同）不服从米氏方程不服从米氏方程 变构酶经加热或用化学试剂等处理，变构酶经加热或用化学试剂等处理，可引起别构酶解离，失去调节活性，可引起别构酶解离，失去调节活性，称为称为脱敏作用脱敏作用 脱敏后表现为米氏酶动力学双曲线脱敏后表现为米氏酶动力学双曲线（4）协同效应）协同效应 底物、效应物、产物（配体底物、效应物、产物（配体/基）基）第一个配体与酶的结合改变了酶的第一个配体与酶的结合改变了酶的构象，从而影响第二个配体与酶的构象，从而影响第二个配体与酶的结合结合二、同工酶二、同工酶（isoenzyme）1、定义：、定义：是指催化相同的化学反应，但蛋白质是指催化

20、相同的化学反应，但蛋白质分子结构、理化性质和免疫性能等方分子结构、理化性质和免疫性能等方面都存在明显差异的一组酶。面都存在明显差异的一组酶。2、特点、特点 （1）都是寡聚酶）都是寡聚酶 （2）不同的亚基组成）不同的亚基组成 （3）不同亚基的活性中心非常相似）不同亚基的活性中心非常相似 （4）组织分布部位不同）组织分布部位不同 （5）所催化的反应有侧重点）所催化的反应有侧重点如如：三、共价修饰调节酶三、共价修饰调节酶通过其它酶对其多肽链上的某些基团通过其它酶对其多肽链上的某些基团 进行可逆的共价修饰进行可逆的共价修饰使酶处于使酶处于活性活性/非活性非活性的互变状态的互变状态调节酶活性。调节酶活性

21、。酶酶 酶酶-P 蛋白激酶蛋白激酶，磷酸化，磷酸化磷酸酶磷酸酶，脱磷酸化，脱磷酸化酶的酶的活性形式：活性形式：可能是磷酸化也可能是脱磷酸化可能是磷酸化也可能是脱磷酸化由由核苷三磷酸（核苷三磷酸（ATP）提供磷酸基）提供磷酸基蛋蛋白白质质的的磷磷酸酸化化R酶的磷酸化修饰的意义突出表现在以下几个方面：酶的磷酸化修饰的意义突出表现在以下几个方面：1.磷酸化和去磷酸化分别由蛋白激酶和磷酸化酶催磷酸化和去磷酸化分别由蛋白激酶和磷酸化酶催化，只要稍微改变两种酶的活性，就能显著改变化，只要稍微改变两种酶的活性，就能显著改变被修饰酶的活性，调节效果非常明显被修饰酶的活性，调节效果非常明显2.酶促共价修饰反应在

22、体内可连锁进行，逐级进行酶促共价修饰反应在体内可连锁进行，逐级进行磷酸化或去磷酸化作用，呈现级联放大效应。磷酸化或去磷酸化作用，呈现级联放大效应。3.磷酸化修饰只需要磷酸化修饰只需要ATP提供磷酸基团，其耗能远提供磷酸基团，其耗能远小于合成酶蛋白，调节方式经济有效。小于合成酶蛋白，调节方式经济有效。4.磷酸化修饰常与变构调节相协作，更增强了调节磷酸化修饰常与变构调节相协作，更增强了调节因子的作用。因子的作用。1.酶保持催化活性，必须酶保持催化活性，必须A.酶分子完整无缺酶分子完整无缺 B.有酶分子上所有化学基团存在有酶分子上所有化学基团存在C.有金属离子参加有金属离子参加 D.有辅酶参加有辅酶

23、参加E.有有活性中心及其必需基团活性中心及其必需基团2.酶催化作用所必需的基团是指酶催化作用所必需的基团是指A.维持酶一级结构所必需的基团维持酶一级结构所必需的基团 B.位于活性中心内或以外的，维持酶活性所必需的基团位于活性中心内或以外的，维持酶活性所必需的基团C.酶的亚基结合所必需的基团酶的亚基结合所必需的基团D.维持分子构象所必需的基团维持分子构象所必需的基团E.构成全酶分子所必需的基团构成全酶分子所必需的基团3.与酶的高效率催化有关的重要因素中，哪项最重要与酶的高效率催化有关的重要因素中，哪项最重要A.酶活性中心与底物酶活性中心与底物“邻近邻近”与与“定向定向”B.酶使底物分子中敏感键产

24、生酶使底物分子中敏感键产生“张力张力”或或“变形变形”C.酶与底物形成不稳定的、共价的中间产物酶与底物形成不稳定的、共价的中间产物D.酶活性中心的某些基团对底物进行酶活性中心的某些基团对底物进行“酸碱催化酸碱催化”E.酶活性中心多为低介电区酶活性中心多为低介电区4.其他因素不变，改变底物的浓度时其他因素不变，改变底物的浓度时A.反应初速度成比例改变反应初速度成比例改变 B.反应速度成比例下降反应速度成比例下降C.反应速度成比例增加反应速度成比例增加 D.反应速度先慢后快反应速度先慢后快E.反应速度不变反应速度不变5.在酶浓度不变的条件下，以反应速度在酶浓度不变的条件下，以反应速度V对作用物对作

25、用物S作作图，其图像为图，其图像为A.直线直线 B.S形形曲线曲线C.矩形双曲线矩形双曲线 D.抛物线抛物线E.钟罩形曲线钟罩形曲线6.底物浓度达到饱和后，再增加底物浓度底物浓度达到饱和后，再增加底物浓度A.反应速度随底物增加而加快反应速度随底物增加而加快B.随着底物浓度增加酶逐渐失活随着底物浓度增加酶逐渐失活C.酶的结合部位全部被作用物占据，反应速度不再增加酶的结合部位全部被作用物占据，反应速度不再增加D.增加抑制剂反应速度反而加快增加抑制剂反应速度反而加快E.形成酶形成酶-底物复合物增加底物复合物增加7.酶的酶的Km是是A.饱和底物浓度时的反应速度饱和底物浓度时的反应速度 B.最大反应速度

26、时的底物浓度最大反应速度时的底物浓度C.饱和底物浓度饱和底物浓度50%时的反应速度时的反应速度D.50%最大反应速度时的底物浓度最大反应速度时的底物浓度E.降低反应速度一半时的底物浓度降低反应速度一半时的底物浓度8.酶的酶的Km值值大小与大小与A.酶的性质有关酶的性质有关 B.酶浓度有关酶浓度有关C.酶作用温度有关酶作用温度有关D.酶作用时间有关酶作用时间有关E.酶的最适酶的最适pH有关有关9.己糖激酶以葡萄糖为底物时，己糖激酶以葡萄糖为底物时，km=1/2S,其反应速度其反应速度v是是Vmax的的A.67%B.50%C.33%D.15%E.9%10.酶促反应速度酶促反应速度V达到最大反应速度

27、达到最大反应速度Vmax的的80%时，底物浓度时，底物浓度SA.1 Km B.2 Km C.3 Km D.4 Km E.5 Km 11.为了防止酶失活，最好将酶制剂存放于为了防止酶失活，最好将酶制剂存放于A.0-4避光避光B.80C.室温曝光室温曝光D.室温避光室温避光E.最适温度最适温度12.各种酶都具有最适各种酶都具有最适pH,其特点是其特点是A.最适最适pH一般为该酶的等电点一般为该酶的等电点B.最适最适pH时酶的时酶的活性中心的可解离基团都处于最适反应状态活性中心的可解离基团都处于最适反应状态C.大多数酶活性的最适大多数酶活性的最适pH曲线为抛物线型曲线为抛物线型D.最适最适pH时酶的

28、活性通常较低时酶的活性通常较低E.在在生理条件下同一细胞酶的最适生理条件下同一细胞酶的最适pH均均相同相同13.对可逆抑制剂的描述，哪项是正确的对可逆抑制剂的描述，哪项是正确的A.使酶使酶变性失活的抑制剂变性失活的抑制剂 B.抑制剂与酶是共价键相结合抑制剂与酶是共价键相结合C.抑制剂与酶是非共价键相结合抑制剂与酶是非共价键相结合D.抑制剂与酶结合后用透析等物理方法不能解除抑制抑制剂与酶结合后用透析等物理方法不能解除抑制E.可逆性抑制指竞争性抑制可逆性抑制指竞争性抑制 14.纯化酶制剂时，酶纯度的主要指标纯化酶制剂时，酶纯度的主要指标A.蛋白质浓度蛋白质浓度 B.酶量酶量C.酶的总活性酶的总活性

29、 D.酶的比活性酶的比活性 E.最底的最底的Km15.有机磷化合物对酶的抑制作用是有机磷化合物对酶的抑制作用是A.与与 NH2结合结合B.与与 SH结合结合C.与与 苯环结合苯环结合D.与与 OH结合结合E.与与CONH2结合结合16.已知已知1mL酶溶液中含蛋白质量为酶溶液中含蛋白质量为0.625mg，每，每mL酶溶液所含酶溶液所含单位为单位为250，该酶的比活性应是，该酶的比活性应是A.200u/mg酶蛋白酶蛋白B.300u/mg酶蛋白酶蛋白C.400u/mg酶蛋白酶蛋白D.500u/mg酶蛋白酶蛋白E.600u/mg酶蛋白酶蛋白名词解释名词解释别构酶别构酶 非竞争性抑制非竞争性抑制 必需

30、基团必需基团 活性中心活性中心 激活剂激活剂米氏常数米氏常数 竞争性抑制竞争性抑制 问答题问答题1.试述不可逆抑制作用和可逆抑制作用的主要区别？试述不可逆抑制作用和可逆抑制作用的主要区别？2.为什么用反应初速度表示酶活力？为什么用反应初速度表示酶活力？3.酶与一般催化剂相比有何异同？酶与一般催化剂相比有何异同？单项选择题单项选择题1.下列关于下列关于Ribozyme（核酶）的叙述那些正确核酶）的叙述那些正确A.本质是蛋白质本质是蛋白质 B.本质是核糖核酸本质是核糖核酸C.即核酸酶即核酸酶 D.最早发现的一种酶最早发现的一种酶 E.其辅酶是辅酶其辅酶是辅酶A2.下列关于酶的概念那些正确下列关于酶

31、的概念那些正确A.所有蛋白质都有酶活性所有蛋白质都有酶活性 B.其底物都是有机化合物其底物都是有机化合物C.其催化活性都需要特异的辅助因子其催化活性都需要特异的辅助因子D.对底物都有绝对专一性对底物都有绝对专一性 E.酶不一定都是蛋白质酶不一定都是蛋白质3.乳酸脱氢酶经透析后，催化能力显著降低，其原因是乳酸脱氢酶经透析后，催化能力显著降低，其原因是A.酶蛋白变性酶蛋白变性 B.失去辅酶失去辅酶C.酶含量较少酶含量较少 D.环境环境pH值发生变化值发生变化 E.以上都不是以上都不是4.酶原之所以没有活性是因为酶原之所以没有活性是因为A.酶蛋白肽链合成不完全酶蛋白肽链合成不完全 B.缺乏辅酶或辅基

32、缺乏辅酶或辅基C.活性中心未形成或未暴露活性中心未形成或未暴露D.酶原是已经变性的蛋白质酶原是已经变性的蛋白质 E.酶原是普通的蛋白质酶原是普通的蛋白质 5.下列关于酶的辅酶下列关于酶的辅酶A.是与酶蛋白紧密结合的金属离子是与酶蛋白紧密结合的金属离子B.是分子结构中不含维生素的小分子有机化合物是分子结构中不含维生素的小分子有机化合物C.在催化反应中不与酶的活性中心结合在催化反应中不与酶的活性中心结合D.在反应中作为辅助因子传递质子、电子或其他在反应中作为辅助因子传递质子、电子或其他E.与酶蛋白共价结合成多酶体系与酶蛋白共价结合成多酶体系6.酶的特异性是酶的特异性是A.酶与辅酶特异结合酶与辅酶特

33、异结合 B.酶对其催化的底物有特异的选择性酶对其催化的底物有特异的选择性C.酶在细胞中的定位是特异的酶在细胞中的定位是特异的D.酶催化反应的机制各不相同酶催化反应的机制各不相同 E.在酶的在酶的分类中各属不同的类分类中各属不同的类别别填空题填空题1.酶可以催化六大反应是酶可以催化六大反应是、。本章小结本章小结一、酶一、酶1.酶的概念2.酶催化作用的特点共性特性：条件温和、高效率、专一性、易变敏感性二、酶的化学本质及结构功能特点二、酶的化学本质及结构功能特点I.酶：单纯酶 结合酶：全酶=酶蛋白+辅因子II.酶的辅因子p维生素和辅酶l维生素是机体维持正常生命活动所必不可少的一类小分子有机物质。l维

34、生素一般习惯分为脂溶性和水溶性两大类。l辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物。参与的酶促反应主要为氧化-还原反应或基团转移反应。l大多数辅酶的前体主要是水溶性B族维生素。许多维生素的生理功能与辅酶的作用密切相关。III.酶结构与功能特点(1)活性中心：结合部位、催化部位、调控部位(2)必须基团(3)酶原和酶原的激活(4)同功酶三、酶的分类及命名三、酶的分类及命名按照酶催化的化学反应类型分为6大类：氧、转、水、裂、异、合。四、酶作用的机制四、酶作用的机制1.酶催化作用的本质：降低反应活化能2.酶催化作用的中间产（络合）物学说 E +S =E-S P +E3.酶与底物结合形成中间络合物的方式：

35、锁钥假说、诱导契合假说4.使酶具有高效催化的因素l临近定向效应l“张力”和“形变”l酸碱催化l共价催化五、酶促反应的速度及其影响因素五、酶促反应的速度及其影响因素1.底物浓度对酶促反应速度的影响p米氏方程l米氏常数Km的意义:米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。米氏常数的单位为mol/L。lKm值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低;Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。2.抑制剂对酶反应的影响p抑制作用的类型：l不可逆抑制作用l可逆抑制作用a.竞争性抑制b.非竞争性抑制c.反竞争性抑制3.激活剂对酶反应的影响：提高酶活力4.酶浓度对酶反应的影响:在一

36、定条件下酶促反应的速度和酶浓度成正比。5.温度对酶反应的影响:最适温度6.pH对酶反应的影响：最适pH7.酶的别构（变构）效应p别构酶的特点：l一般是寡聚酶l具有别构效应l反应速度和底物浓度关系不符合米曼方程双曲线六、酶的分离纯化与酶活力测定六、酶的分离纯化与酶活力测定1.酶的分离纯化基本原则：提取过程中避免酶变性而失去活性基本操作程序：a.选材b.抽提c.分离d.纯化酶的制剂形式与保存2.酶活力的测定I.概念p酶活力：又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学反应速度来表示。II.酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物(P)的生成（增加）

37、量或底物（S）的消耗（减少）量。即测定时确定三种量：加入一定量的酶；一定时间间隔；物质的增减量。III.测定酶活力常有以下几种方法l初速度法l平均速度法l动态连续测定法l快速反应追踪法p测酶活所用的反应条件应该是最适条件p酶活力测定方法：u反应计时u反应量的测定：根据被测定物质的物理化学性质通过定量 分析法测定。常用的方法有：光谱分析法、化学法和放射性化学法。3.酶活力的表示方法及计算p酶活力单位的基本定义为：规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。a.国际单位：“U”和“Kat”b.习惯单位p比活力：酶的比活力是每单位（一般是mg）蛋白质中的酶活力单位数（如：酶单位/mg蛋白）。p回收率=某纯化操作后的总活力/某纯化操作前的总活力