实验一ABO及Rh血型鉴定2013.3.ppt

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1、实验一实验一ABOABO血型血型鉴定和鉴定和RhRh血型鉴定血型鉴定临床检验诊断学实验室临床检验诊断学实验室实验内容实验内容一、一、5%红细胞悬液的配制红细胞悬液的配制二、二、ABO血型鉴定（试管法、纸片法）血型鉴定（试管法、纸片法）三、三、Rh血型鉴定血型鉴定?一、一、5%5%红细胞悬液的配制红细胞悬液的配制原理：原理：原理：原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，压积红细

2、胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。获出最佳结果。获出最佳结果。获出最佳结果。器材器材器材器材:小试管小试管小试管小试管（玻璃及塑料皆可）（玻璃及塑料皆可）（玻璃及塑料皆可）（玻璃及塑料皆可）、加样枪、加样枪、加样枪、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试管架、离心机、记号笔、显微镜。试管架、离心机、记号笔、显微镜。试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂试剂试剂试剂:生理盐水。生理盐水。生理盐水。生理盐水。标本标本标本标本:抗凝或非抗凝静脉血。抗凝或非抗凝静脉血。抗凝或非抗凝静脉血。抗凝或非抗凝静脉血。操作操作1 1 1 1、全血、全血、全血、全血2ml2ml2ml2ml 1000

3、g1000g1000g1000g离心离心离心离心5 5 5 5minminminmin，吸取分离上清至另一干净试，吸取分离上清至另一干净试，吸取分离上清至另一干净试，吸取分离上清至另一干净试管（备用）；管（备用）；管（备用）；管（备用）；2 2 2 2、压积加生理盐水约、压积加生理盐水约、压积加生理盐水约、压积加生理盐水约2 2 2 23ml3ml3ml3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打，充分摇匀或吸管轻轻吹打，充分摇匀或吸管轻轻吹打，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；混匀，再次离心去掉上清液；混匀，再次离心去掉上清液；混匀，再次离心去掉上清液；3 3 3 3、重复离心（、重复离心（

4、、重复离心（、重复离心（1000g1000g1000g1000g，60s60s60s60s）洗涤红细胞）洗涤红细胞）洗涤红细胞）洗涤红细胞3 3 3 3次，去掉上清液次，去掉上清液次，去掉上清液次，去掉上清液制备压积红细胞；制备压积红细胞；制备压积红细胞；制备压积红细胞；4 4 4 4、取、取、取、取1 1 1 1滴压积红细胞于滴压积红细胞于滴压积红细胞于滴压积红细胞于1 1 1 1支干净的小试管中，在其中加入支干净的小试管中，在其中加入支干净的小试管中，在其中加入支干净的小试管中，在其中加入19191919滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是滴生理盐水

5、，用小吸管轻轻吹打混匀，就是滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%5%5%5%的红细的红细的红细的红细胞悬液。胞悬液。胞悬液。胞悬液。目的：目的：目的：目的：掌握掌握ABOABO正反定型的原理、方法。正反定型的原理、方法。原理：原理：原理：原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABOABO血型。血型。正定型正定型：用已知：用已知血型特异性抗体血型特异性抗体（抗（抗-A-A、抗、抗-B-B）来测定红细胞上有无相应的抗原；来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型反定型：用已知：用已知血型试剂红细胞血型试剂红细胞测定血清中有无测定血清中有无相应的抗体。相应的抗体。

6、二、二、ABOABO鉴定鉴定器材器材器材器材:记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、显微镜。试剂试剂试剂试剂:1.ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)；2试剂红细胞：35Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本标本标本标本:抗凝或非抗凝静脉血。操作操作操作操作（试管法）（试管法）(1)(1)标记试管：标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明A、B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、Oc。(2)(2)配配5%5%悬浮红细胞：悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)

7、(3)加样：加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4 4）离心：离心：1000g离心15秒。(5)(5)结果：结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象无凝集或溶血现象。4+4+4+4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+3+3+3+红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。2+2+2+2+红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞

8、凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。l+l+l+l+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。红细胞。红细胞。红细胞。mf mf mf mf 混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（mixed fieldmixed fieldmixed fieldmixed

9、field）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准试管法结果判定试管法结果判定表表l ABOl ABO血型正反定型血型正反定型结结果果试剂血清试剂血清试剂血清试

10、剂血清+受检红细胞受检红细胞受检红细胞受检红细胞 受检血清受检血清受检血清受检血清+试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞 （正定型）（正定型）（正定型）（正定型）（反定型）（反定型）（反定型）（反定型）-A -B -A -B 受检血型受检血型受检血型受检血型 Ac Bc Oc Ac Bc Oc A A B B O O AB AB 判断标准判断标准操作：玻片法操作：玻片法操作：玻片法操作：玻片法(鉴定纸板鉴定纸板鉴定纸板鉴定纸板)l(1)(1)洁净玻片洁净玻片(鉴定纸板鉴定纸板)一张。标一张。标-A-A、-B-B，分别用滴管滴，分别用滴管滴加抗加抗-A-A、抗、抗-B-B试剂试剂1 1滴，再

11、加受检者滴，再加受检者1010红细胞悬液红细胞悬液l l滴，滴，混匀。混匀。l(2)(2)另取洁净玻片另取洁净玻片(或鉴定纸板或鉴定纸板)一张。标一张。标AcAc、BcBc、OcOc，各，各加受检血清加受检血清2 2滴，再分别滴加滴，再分别滴加AcAc、BcBc、OcOc悬红悬红1 1滴。滴。l(3)(3)室温轻转动玻片室温轻转动玻片(或鉴定纸板或鉴定纸板)，使血清与细胞充分混，使血清与细胞充分混匀，约匀，约2min2min肉眼观察凝集肉眼观察凝集(溶血溶血)反应。反应。l l玻片试验时可用低倍镜观察结果。玻片试验时可用低倍镜观察结果。玻片试验时可用低倍镜观察结果。玻片试验时可用低倍镜观察结果

12、。正定型正定型 反定型反定型注意事项注意事项1.1.试剂试剂 2.2.悬红悬红 3.3.蛋白蛋白 4.4.溶血溶血 5.5.冷抗体冷抗体 6.6.老年、儿童老年、儿童 7.7.污染污染l l目的目的目的目的 掌握掌握RhRh血型鉴定的原理、方法。血型鉴定的原理、方法。l l原理原理原理原理 RhRh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗的抗C C、抗、抗c c、抗、抗D D、抗、抗E E、抗、抗e e五种五种RhRh分型血清来检查红分型血清来检查红细胞抗原。细胞抗原。在临床输血中在临床输血中一般只做一般只做D D抗原的鉴定抗原的鉴定，被检红细胞，被

13、检红细胞和抗和抗D D血清凝集者为血清凝集者为RhRh阳性，不凝集者为阳性，不凝集者为RhRh阴性。阴性。三三 、RhRh血型鉴定血型鉴定器材器材 小试管、滴管、试管架、小试管、滴管、试管架、记号笔记号笔、鉴定纸、鉴定纸板、显微镜、离心机。板、显微镜、离心机。试剂试剂1.Rh1.Rh抗血清：常用的为抗血清：常用的为IgMIgM抗抗抗D（其他为抗C、抗c、抗E、抗e）。2.2.己知己知RhRh阳性和阴性的阳性和阴性的5 5红细胞悬液各红细胞悬液各1 1份份3.3.生理盐水。生理盐水。标本标本 静脉血静脉血。操作操作(盐水试管测试法盐水试管测试法)1.1.取单克隆抗取单克隆抗-D-D（IgMIgM

14、）-C-C、-c-c、-E-E、-e-e试剂各试剂各1 1滴到滴到5 5支试管中。支试管中。2.2.每管各加每管各加1 1滴滴3 35 5待检红细胞悬液。待检红细胞悬液。3.3.充分混匀，以充分混匀，以1000 g1000 g离心离心1515秒。秒。4.4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。肉眼观看凝集。5.5.判定结果判定结果注意事项注意事项注意事项注意事项1 1用抗用抗D D血清进行血清进行RhRh血型鉴别时，结果为阴性，不能直血型鉴别时，结果为阴性，不能直接报告接报告RhRh阴性，需进一步检测阴性，需进一步检测弱弱D D型还是部分型还是部分D D型。型。2 2RhRh血型鉴定应严格控制温度与时间，因血型鉴定应严格控制温度与时间，因RhRh抗原、抗体抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇。试管，不可用力振摇。3.Rh3.Rh血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生，不需要做血型系统的抗体多为后天免疫刺激产生，不需要做反定型。反定型。作业作业l简述导致血型鉴定出现正反简述导致血型鉴定出现正反定型不一致的常见原因。定型不一致的常见原因。