微生物的培养(二).ppt

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1、实验三实验三微生物的培养微生物的培养(二二)、细菌对、细菌对抗菌药物的敏感试验抗菌药物的敏感试验 医学微生物学医学微生物学实验实验实验内容：实验内容：1.1.微生物的培养微生物的培养(二二)非常规细菌的培养：非常规细菌的培养：（1 1）专性厌氧菌的培养）专性厌氧菌的培养（2 2）细菌）细菌-L-L型的培养型的培养2.2.细菌对抗菌药物的敏感试验细菌对抗菌药物的敏感试验3.3.皮肤、咽部细菌的培养皮肤、咽部细菌的培养1.1.微生物的培养微生物的培养(二二)*非常规细菌的培养：非常规细菌的培养：专性厌氧菌的培养专性厌氧菌的培养 细菌细菌-L-L型的培养型的培养（1 1）专性厌氧菌的培养）专性厌氧菌

2、的培养生物学方法生物学方法：如：如疱肉培养基疱肉培养基(培养基中的肉渣含有不饱和脂肪酸及谷培养基中的肉渣含有不饱和脂肪酸及谷 胱甘肽，能吸收培养基中的氧气，降低其氧化还原电势胱甘肽，能吸收培养基中的氧气，降低其氧化还原电势 )。物理学方法物理学方法：如：如厌氧缸法厌氧缸法(用抽气换气法抽出缸内的空气，充入氮气用抽气换气法抽出缸内的空气，充入氮气 或者二氧化碳，使缸内造成厌氧环境或者二氧化碳，使缸内造成厌氧环境)。化学方法化学方法：焦性没食子酸法焦性没食子酸法:焦性没食子酸加碱性溶液能迅速而大量的吸收氧，焦性没食子酸加碱性溶液能迅速而大量的吸收氧，生成深棕色的焦性没食子橙，是有效的化学除氧方法生

3、成深棕色的焦性没食子橙，是有效的化学除氧方法 厌氧袋法厌氧袋法：如冷触媒法：利用气体发生器产生氢及二氧化碳，产生的如冷触媒法：利用气体发生器产生氢及二氧化碳，产生的 氢在触媒作用下，与罐内的氧结合成水，将氧消耗掉，造成无氢在触媒作用下，与罐内的氧结合成水，将氧消耗掉，造成无 氧环境。产生的二氧化碳约为氧环境。产生的二氧化碳约为1010，也适宜厌氧菌生长。方法，也适宜厌氧菌生长。方法 为：先将触媒为：先将触媒(金属钯或铂金属钯或铂)及美蓝指示剂放入罐内，然后将已及美蓝指示剂放入罐内，然后将已 接种的平板置于罐内，将气体发生袋的指定角剪开，加入接种的平板置于罐内，将气体发生袋的指定角剪开，加入lO

4、mllOml 水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。水，立即放入罐内，封闭厌氧罐即可。示教：厌氧袋、厌氧罐，焦性没示教：厌氧袋、厌氧罐，焦性没食子酸法，庖肉培养基食子酸法，庖肉培养基 （2 2）细菌）细菌L L型的培养型的培养 细菌细菌L L型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，型生长缓慢，营养要求高，对渗透压敏感，普通营养基上不能生长，培养时必须用普通营养基上不能生长，培养时必须用 高渗的含高渗的含血清的培养基。菌落多呈油煎蛋状。血清的培养基。菌落多呈油煎蛋状。示教：示教：L L型菌落型菌落2.2.细菌对抗菌药物的敏感试验细菌对抗菌药物的敏感试验细菌对抗菌药物的敏感试验（简称：药敏）是体细菌对抗

5、菌药物的敏感试验（简称：药敏）是体外测定细菌对临床抗菌药物的敏感性的试验，细外测定细菌对临床抗菌药物的敏感性的试验，细菌对抗菌药物的敏感试验不属于病因诊断范畴，菌对抗菌药物的敏感试验不属于病因诊断范畴，但在分离出病原菌和鉴定后，对指导临床选择用但在分离出病原菌和鉴定后，对指导临床选择用药、及时治疗和控制耐药菌感染有重要意义。药、及时治疗和控制耐药菌感染有重要意义。不同的菌种或菌株，对同一药物的敏感性不同；不同的菌种或菌株，对同一药物的敏感性不同；同一菌种或菌株，对不同的药物的敏感性亦不同。同一菌种或菌株，对不同的药物的敏感性亦不同。药敏试验中所用的专用名词药敏试验中所用的专用名词 （1 1）敏

6、感（）敏感（sensitivesensitive）：指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌）：指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。药物治愈。（2 2）中度敏感（）中度敏感（moderate sensitivemoderate sensitive）：指通过提高某种抗菌药物的剂量或在）：指通过提高某种抗菌药物的剂量或在该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染被治愈。该药物浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染被治愈。（3 3）中介度（）中介度（intermediateintermediate）：这一范围是）：这一范围是“缓冲域缓冲域”，是由操作上的误差造，是由操作上的误差造

7、成的，不作为报告形式。如确需明确该药的敏感度，需重复试验或做稀释法成的，不作为报告形式。如确需明确该药的敏感度，需重复试验或做稀释法敏感试验。敏感试验。（4 4）耐药）耐药(resistance)(resistance)：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。：指被测菌株所引起的感染不能用该抗菌药物治愈。（5 5）最低抑菌浓度）最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)(minimal inhibitory concentration)：抗菌药物能够抑制：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。单位：细菌生长所需要的最低浓度。单位：gg/ml/ml

8、 或或 U/ml U/ml。（6 6）最低杀菌浓度）最低杀菌浓度(minimal(minimal bacteriacidlebacteriacidle concentration)concentration)：抗菌药物杀灭细：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。单位：菌所需要的最低浓度。单位：gg/ml/ml 或或 U/ml U/ml。在临床细菌实验室中，最常用的药敏试验方法是琼脂扩散法，适用于需氧及在临床细菌实验室中，最常用的药敏试验方法是琼脂扩散法，适用于需氧及兼性厌氧菌。对厌氧菌或其他个别菌株的药敏试验，可以采用试管稀释法。兼性厌氧菌。对厌氧菌或其他个别菌株的药敏试验，可以采用试管稀释法。

9、常用药敏试验纸片判断标准与相应的常用药敏试验纸片判断标准与相应的MICMIC近似值近似值抗菌药物抗菌药物纸片含药量纸片含药量 抑菌圈直径抑菌圈直径(mm)相应的相应的MIC(g/ml)耐药耐药中介度中介度中度敏中度敏感感敏感敏感耐药耐药敏感敏感青霉素青霉素10U28 29 0.2 0.1链霉素链霉素10g111214 15 15 6氯霉素氯霉素30g121317 18 2512.5庆大霉素庆大霉素10g121314 15 8 4红霉素红霉素15g131417 18 8 2四环素四环素30g141518 1916 4磺胺药磺胺药1.25/23.75g101115 168/152 2/38注：注：

10、MICMIC为一种药物的最低抑菌浓度为一种药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration)(minimal inhibitory concentration)琼脂扩散法琼脂扩散法将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于琼脂平将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别接种于琼脂平板上（密集划线法）。板上（密集划线法）。用蜡笔在平皿底面将其分为用蜡笔在平皿底面将其分为4 4个区域，分别标记抗个区域，分别标记抗生素的名称。生素的名称。用灭菌后的镊子夹取各种抗生素滤纸片，平放至用灭菌后的镊子夹取各种抗生素滤纸片，平放至培养基表面的相应位置。培养基表面的相应位置。置置3737培养培

11、养24h24h，测量滤纸片周围的抑菌圈的直径。，测量滤纸片周围的抑菌圈的直径。抑菌圈抑菌圈 3.3.空气、皮肤、咽部细菌的培养空气、皮肤、咽部细菌的培养自然界分布着大量细菌，寄生于人体的正常菌群自然界分布着大量细菌，寄生于人体的正常菌群繁多，在正常情况下不致病。通过本实验认识细繁多，在正常情况下不致病。通过本实验认识细菌在皮肤和咽部的分布，并对咽部细菌进行进一菌在皮肤和咽部的分布，并对咽部细菌进行进一步的鉴定。步的鉴定。皮肤细菌的检查：皮肤细菌的检查：取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面分成取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面分成两半，标明两半，标明A A和和B B两个区。两个区。先将手指在先

12、将手指在A A区按一下，然后再将手指用区按一下，然后再将手指用2 2的的碘酒和碘酒和7575乙醇消毒后涂抹乙醇消毒后涂抹B B区。区。将琼脂平板置将琼脂平板置3737培养培养24h24h，观察结果，观察结果咽部细菌的检查：咽部细菌的检查：用无菌棉拭子蘸取咽部分泌物，涂在血平板一用无菌棉拭子蘸取咽部分泌物，涂在血平板一端，用接种划线分离。端，用接种划线分离。将血平板置将血平板置3737培养培养24h24h。观察溶血现象并挑取。观察溶血现象并挑取不同菌落作革兰染色，镜检。不同菌落作革兰染色，镜检。实验材料：实验材料：1.1.大肠杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各大肠杆菌和金黄色葡萄球菌斜面各1 1管管/小组。小组。2.2.琼脂平板琼脂平板3 3个个/小组，血平板小组，血平板2 2个个/小组。小组。3.3.抗生素小瓶抗生素小瓶1 1套套/小组。小组。4.4.无菌棉拭子无菌棉拭子2 2个个/小组。小组。实验报告内容：实验报告内容：1.1.细菌对抗菌药物的敏感试验（本次实验）细菌对抗菌药物的敏感试验（本次实验）2.2.皮肤、咽部细菌的培养及咽部细菌的鉴皮肤、咽部细菌的培养及咽部细菌的鉴定（下次实验鉴定后写实验报告）定（下次实验鉴定后写实验报告）