第三章显微鉴定的基本操作技能.ppt

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1、第三章第三章 显微鉴定显微鉴定的基本操作的基本操作 利用显微技术对药材进行显微分析，以确定其品种和质量的一种鉴定方法。包括：组织鉴定组织鉴定 粉末鉴定粉末鉴定 第一节 显微标本片的制作n一、组织透化剂及应用一、组织透化剂及应用n（一）定义（一）定义n（二）作用（二）作用n（三）常见的透化剂（三）常见的透化剂n二、组织封藏剂及应用二、组织封藏剂及应用n三、显微标本片的制法三、显微标本片的制法n四、粉末标本片四、粉末标本片n五、表面标本片五、表面标本片n六、切片制片法六、切片制片法n七、解离组织标本片七、解离组织标本片第二节 显微测量法n一、目镜测微尺一、目镜测微尺n二、载物台测微尺二、载物台测微

2、尺n三、两尺的关系及应用三、两尺的关系及应用n四、目微尺的标定四、目微尺的标定n五、测量方法五、测量方法一、目镜测微尺一、目镜测微尺 放在目镜筒内的一种标尺，为一个放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径直径1820mm1820mm的圆形玻璃片，中央的圆形玻璃片，中央有相互垂直的两条线，其上刻有精有相互垂直的两条线，其上刻有精确的刻度，常为确的刻度，常为5050格或格或100100格，如图格，如图（a a）n二、载物台测微尺 n 在特制的载玻片中央粘贴一刻有精细尺度的圆形玻片，通常将长1mm（或2mm）精确等分成10（或20）大格，100（或200）小格。每小格长为0.01mm即10m，用以标定目镜

3、测微尺，如图（b）三、两尺的关系及应用三、两尺的关系及应用 台微尺是台微尺是标定目微尺标定目微尺的，不能直接用来测量显的，不能直接用来测量显微镜下物体。其微镜下物体。其每小格每小格10m10m，是定值。目微尺，是定值。目微尺是测量尺。每一格的长度是变值，是随目镜和是测量尺。每一格的长度是变值，是随目镜和物镜的倍数变化而改变的，只有在放大倍数固物镜的倍数变化而改变的，只有在放大倍数固定之后才能比量出目微尺每一格的相当长度因定之后才能比量出目微尺每一格的相当长度因此，必须借助于台微尺才能比量出目微尺每格此，必须借助于台微尺才能比量出目微尺每格的相当长度。标定好的目微尺才是在标定的倍的相当长度。标定

4、好的目微尺才是在标定的倍数下测量物体的尺子。数下测量物体的尺子。四、目微尺的标定四、目微尺的标定 用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时，目微尺上每一格所代表的长度。度时，目微尺上每一格所代表的长度。1.1.将台微尺放置在载物台上、将目微尺（正面向上）放入将台微尺放置在载物台上、将目微尺（正面向上）放入目镜镜筒内目镜镜筒内 2.2.低倍物镜下，将台微尺刻度移至视野中央低倍物镜下，将台微尺刻度移至视野中央 3.3.旋转目镜，使两尺平行。旋转目镜，使两尺平行。4.4.移动台微尺，使目微尺零端与台微尺的某刻度线相重合移动台微尺，使

5、目微尺零端与台微尺的某刻度线相重合5.5.再找两尺的第二条重合刻度线，数二条重合线间两尺的再找两尺的第二条重合刻度线，数二条重合线间两尺的小格数，记录。如图（小格数，记录。如图（c c）6.6.计算出目微尺每一格在该物镜条件下相当的长度计算出目微尺每一格在该物镜条件下相当的长度（mm）。）。7.7.计算公式：计算公式：标定值标定值=两重合线间台微尺小格数两重合线间台微尺小格数X10m/X10m/两两重合线间目微尺小格数重合线间目微尺小格数 8.8.高倍物镜下标定（进入高倍物镜只调细调）高倍物镜下标定（进入高倍物镜只调细调）当测定时要用不同的放大倍数时，应分别标定。当测定时要用不同的放大倍数时，

6、应分别标定。五、测量方法五、测量方法 1.1.将需测量的目的物显微制片置显微镜载物台上将需测量的目的物显微制片置显微镜载物台上 2.2.旋转目镜，使目微尺与测量目的物平行；数小格数，记录。旋转目镜，使目微尺与测量目的物平行；数小格数，记录。3.3.计算计算 实际长度（实际长度（mm）=测得小格数测得小格数X X标定值标定值 通常是在高倍镜下测量，但欲测量较长的目的物，如纤维、通常是在高倍镜下测量，但欲测量较长的目的物，如纤维、导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与导管、非腺毛等的长度时，需在低倍镜下测量。记录最大值与最小值（最小值（mm），允许有少量数值略高或略低于规定。），允

7、许有少量数值略高或略低于规定。例：例：目镜为10*，物镜为40*时，测得淀粉粒直径占目微尺9小格，则该淀粉粒直径为3.8m*9=34.2m第三节 显微绘图法一、平描一、平描二、纤维描绘器描绘二、纤维描绘器描绘1 1、木栓层、木栓层 2 2、石细胞、石细胞 3 3、皮层、皮层 4 4、中柱鞘纤维、中柱鞘纤维 5 5、韧皮部、韧皮部 6 6、形成层、形成层 7 7、木质部、木质部 8 8、射线、射线 9 9、髓部、髓部 1010、髓部石细胞、髓部石细胞味连雅连黄连（味连）粉末图黄柏（关黄柏）粉末图扫描电镜图1.花粉粒2.草酸钙簇晶3.种脐4.气孔5.花丝非腺毛6.导管第四节 常用显微化学分析一、细

8、胞壁性质的鉴别一、细胞壁性质的鉴别二、细胞内含物性质的鉴别二、细胞内含物性质的鉴别人参显微图1-4-4 八珍丸 1.党参(a.乳汁管b.木栓石细胞)2.白术(草酸钙针晶)3.茯苓(a.多糖团块 b.菌丝)4.甘草（a.木栓细胞b.晶鞘纤维）5.当归（纺锤形韧皮薄壁细胞，示斜向交错网状纹理）6.白芍（草酸钙簇晶）7.川芎（草酸钙圆簇状结晶）8.熟地（薄壁细胞，示核状物）典型的植物细胞的构造图典型的植物细胞的构造图1.细胞壁2.叶绿体3.晶体4.细胞质5.液泡6.线粒体7.纹孔8.细胞核9.核仁10.核质11.细胞间隙细胞核质体：叶绿体、有色体、白色体叶绿体、有色体、白色体线粒体高尔基体核糖体溶酶

9、体贮藏的营养物质：淀粉、蛋白质、脂肪和脂肪油液泡：细胞液及其内含物细胞器细胞质后含物后含物生理活性物质生理活性物质：酶、维生素、植物激素、杀 菌剂等原生质体细胞后含物和生理活性物质细胞壁典型的植物细胞一、细胞壁性质的鉴别1.木质化细胞壁 间苯三酚+浓盐酸红色或紫红色。例：导管、木纤维、石细胞。甘草的导管和纤维 肉桂的纤维和石细胞2.木栓化或角质化 苏丹试液桔红色。例：蓖麻的种子、甘蔗的茎皮。女贞叶表皮角质化 3.粘液质化：钌红试剂红色；玫红酸钠醇试剂玫瑰红色。例：车前子、亚麻子的表皮细胞中。4.矿质化 硅质能溶于氟化氢，但不溶于醋酸或浓硫酸（区别于碳酸钙和草酸钙）。例：禾本科植物的茎和叶，木贼

10、茎和硅藻的细胞壁内含有大量硅质。二、细胞内含物性质的鉴别 草酸钙结晶体、碳酸钙钟乳体、淀粉粒、菊糖、油脂及类脂化合物、糊粉粒、粘液皆是一些显微镜下常见的一些有形而有鉴别意义的植物细胞内含物。淀淀粉粉粒粒的的形形状状、大大小小、脐脐点点与与层层纹纹是是否否显显著著，以以及及彼彼此此间间的的复复合合状状况况，皆皆随随种种属属而而有有所所不不同同。常常见见的的有有单单粒粒淀淀粉粉、半半复复粒粒淀淀粉粉、复复粒粒淀粉淀粉。1.淀粉粒淀粉粒鉴鉴 别别：含有直链淀粉的淀粉粒遇稀碘液显蓝紫色，支链淀粉则显紫红色。图淀粉粒1，2，3为山药的淀粉粒，三角状卵圆形或矩圆形，脐点短缝状和人字形。4，5为绞股蓝的淀粉

11、粒，4单粒不规则椭圆形，5为复粒。2.菊糖 可把观察材料放在乙醇中浸渍数天，使之结晶析出，然后以甘油装片进行显微观察。这样，就很易看到球状、半球状或扇状或由数个辐射瓣组成的菊糖结晶。3.脂肪油、挥发油、树脂 加苏丹溶液或紫草试液，均显橘红色、红色或紫红色。在大多数情况下，多呈细小结晶或无定形粒状，并密集充斥于细胞中（如：玉蜀黍种子中的糊粉粒）。由于蛋白质遇碘呈黄色，如加入碘甘油溶液，不但糊粉粒各部更加清晰，同时可进一步确证糊粉粒为蛋白质组成。糊粉粒和淀粉粒常在同一细胞中互相混杂。4.糊粉粒 .豌豆的子叶细胞 1.细胞壁 2.糊粉粒 3.淀粉粒 4.细胞间隙.小麦颍果外部的构造 1.果皮 2.种

12、皮 3.糊粉层 4.胚乳细胞.篦麻的胚乳细胞 1.糊粉粒 2.蛋白质晶体 3.基质 4.球晶体 粘液（mucilage）多含于单子叶植物及锦葵目等类植物地下部份的一些细胞中。常为一折光性较强的粘稠状液体，无特定形状。它也是植物体糖类的一种积贮形式。常与草酸钙针晶束同时并存。5.粘液 6.草酸钙结晶体 常见的草酸钙晶体有簇簇晶晶、砂砂晶晶、块块晶晶、棱棱晶晶、针针晶晶以及由针状结晶集合而成的针晶束针晶束。1.簇晶（大黄根茎）2.针晶（半夏块茎）3.方晶（甘草）4.砂晶（颠茄根）5.棱形及菱形晶体（买麻藤）碳酸钙钟乳体 碳酸钙沉积物多存在于植物表皮细胞或毛茸中。常呈钟乳状或其它不规则形状（如：穿心莲叶片细胞中的碳酸钙钟乳体）。7.碳酸钙钟乳体无花果叶内的钟乳体.切面观切面观1.表皮及皮下表皮及皮下2.栅栏组织栅栏组织3.钟乳体和细胞腔钟乳体和细胞腔.表面观表面观第五节 常见显微试剂的配置及其用途n22种试剂种试剂