1原核微生物的形态和构造.ppt
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1、 第一章 原核微生物的结构与功能原核细胞原核细胞第一节 细菌 本节提要:本节提要:|细菌的形态和染色细菌的形态和染色|细菌细胞的一般结构细菌细胞的一般结构|细菌细胞的特殊结构细菌细胞的特殊结构|细菌的繁殖和培养细菌的繁殖和培养一、细菌的形态和染色(一一一一)细菌的正常形态细菌的正常形态:细菌的形态和染色球菌球菌杆菌杆菌螺旋菌螺旋菌细菌的形态和染色1.球菌(coccus)单球菌单球菌双球菌双球菌八叠球菌八叠球菌四联球菌四联球菌链球菌链球菌葡萄球菌葡萄球菌2.2.杆菌(bacillus)(bacillus)细菌的形态和染色梭状芽孢杆菌梭状芽孢杆菌短杆菌短杆菌长杆菌长杆菌3.3.螺旋菌螺旋菌(spi
2、rillaspirilla):):螺旋状的细菌。螺旋不螺旋状的细菌。螺旋不满一圈称为满一圈称为弧菌弧菌(vibriovibrio),满满26环称为环称为螺旋螺旋菌菌(spirllumspirllum),旋转周数在旋转周数在6环以上的称为环以上的称为螺螺旋体旋体(spirochaetaspirochaeta)。细菌的形态和染色螺旋菌螺旋菌弧菌弧菌螺旋体螺旋体4.4.细菌的特殊形态:细菌的特殊形态:细菌的形态和染色柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细菌、贝日阿托氏菌菌、贝日阿托氏菌(丝状丝状)、具有子实、具有子实体的粘细菌等是特殊形态的细菌。体的粘细菌等是特殊形态的细菌
3、。(二二)细菌的异常形态:细菌的异常形态:.畸形:畸形:理化刺激理化刺激 细菌的形态和染色结核杆菌的异常形态结核杆菌的异常形态:结核杆菌的正常形态结核杆菌的正常形态:.衰退型:衰退型:菌细胞衰老、养分缺乏菌细胞衰老、养分缺乏细菌的形态和染色(三三)细菌的大小:细菌的大小:细菌的形态和染色(1)测量:测量:测微尺测微尺(2)长度单位:长度单位:微米微米(m)(3)表示:表示:球菌:直径球菌:直径 杆菌:杆菌:宽宽长长 螺菌:螺菌:宽、长、宽、长、螺距螺距(四四)染色染色细菌的形态和染色细菌的形态和染色细菌染色法细菌染色法死菌死菌活菌活菌:用美蓝或用美蓝或TTC(氯化三苯基四氮唑氯化三苯基四氮唑)
4、等等正染色正染色负染色负染色:荚膜染色法等荚膜染色法等简单染色法简单染色法鉴别染色法鉴别染色法革兰氏染色法革兰氏染色法抗酸染色法抗酸染色法芽孢染色法芽孢染色法姬姆萨姬姆萨(Giemsa)染色法染色法最常用染色法最常用染色法单染法单染法复染法复染法负染法负染法革兰氏染色革兰氏染色细菌的形态和染色用一种染料进行染色,较未染色的样本易于观察。用一种染料进行染色,较未染色的样本易于观察。单染色:单染色:细菌的形态和染色 背景着色,菌体背景着色,菌体不着色,多用于荚膜不着色,多用于荚膜的观察。的观察。二种以上染料进行染色,有鉴定价值。二种以上染料进行染色,有鉴定价值。如革兰氏染色、抗酸染色等。如革兰氏染
5、色、抗酸染色等。复染法:复染法:负染法:负染法:细菌的鉴别染色法细菌的鉴别染色法革兰氏染色法革兰氏染色法C.GramC.Gram 丹麦医生丹麦医生步骤:步骤:涂片固定;涂片固定;结晶紫初染结晶紫初染1min;碘液媒染碘液媒染1min;95%乙醇脱色乙醇脱色0.5min;番红复染番红复染1min。结果结果:阳性菌阳性菌紫色紫色;阴性菌阴性菌红色红色。细菌的形态和染色细菌的形态和染色一紫二碘三脱色四复染一紫二碘三脱色四复染紫为阳紫为阳,红为阴红为阴抗酸染色法抗酸染色法步骤:步骤:涂片固定;涂片固定;酸性复红初染;酸性复红初染;3%醋酸酒精脱色醋酸酒精脱色 美蓝复染。美蓝复染。结果结果:抗酸菌抗酸菌
6、红色红色;非抗酸菌非抗酸菌蓝色蓝色。细菌的形态和染色 二、细菌细胞的基本结构细菌细胞的基本结构细菌细胞的结构:细菌细胞的结构:细菌细胞的基本结构包括:细菌细胞的基本结构包括:细胞壁、细胞质膜、细胞壁、细胞质膜、间体、细胞质、核糖体、气间体、细胞质、核糖体、气泡、细胞核、质粒和储藏物。泡、细胞核、质粒和储藏物。特殊结构包括:特殊结构包括:荚膜、鞭毛、菌毛、荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢和伴孢晶体。芽孢和伴孢晶体。细菌细胞的基本结构1.概念:细胞壁概念:细胞壁是位于胞外紧贴是位于胞外紧贴胞膜的一层无色胞膜的一层无色透明,坚韧而有透明,坚韧而有弹性的结构。弹性的结构。(一一)细胞壁(细胞壁(cell wal
7、l):细菌细胞的基本结构分离:超声波、机械破碎、溶菌消化、分离:超声波、机械破碎、溶菌消化、差速离心差速离心观察:质壁分离、电子显微镜观察:质壁分离、电子显微镜2.细胞壁的分离与观察细胞壁的分离与观察细菌细胞的基本结构重点提示:重点提示:细胞壁的基本骨架细胞壁的基本骨架肽聚糖肽聚糖革兰氏阳性菌的细胞壁革兰氏阳性菌的细胞壁 革兰氏阴性菌的细胞壁革兰氏阴性菌的细胞壁革兰氏染色的机理革兰氏染色的机理 溶菌酶与青霉素的作用溶菌酶与青霉素的作用3.细胞壁的化学组成与结构细胞壁的化学组成与结构细菌细胞的基本结构概念:肽聚糖是由概念:肽聚糖是由 N乙酰胞壁酸乙酰胞壁酸(NAM)和和N乙酰葡糖胺乙酰葡糖胺(N
8、AG)以及以及少数氨基酸短肽链组成的少数氨基酸短肽链组成的亚单位聚合而成的大分子亚单位聚合而成的大分子复合体复合体(1 1)细胞壁的基本骨架)细胞壁的基本骨架肽聚糖肽聚糖G和和M以以b b-1,4-糖苷键连接糖苷键连接肽聚糖单体肽聚糖单体细菌细胞的基本结构由由NAG、NAM、肽尾肽尾、肽桥构成肽桥构成肽聚糖网格状结构肽聚糖网格状结构:细菌细胞的基本结构肽聚糖的特点肽聚糖的特点:1)为原核生物所特有为原核生物所特有(古细菌例外古细菌例外)2)D-Glu,D-Ala,M-DAP在自然界蛋在自然界蛋白质中不存在白质中不存在3)个别菌中个别菌中DAP可为可为Lys代替代替4)个别菌中两肽尾可直接由肽键
9、连接个别菌中两肽尾可直接由肽键连接细菌细胞的基本结构肽聚糖分子中的四种主要肽桥类型肽聚糖分子中的四种主要肽桥类型藤黄微球菌藤黄微球菌(溶壁微球菌溶壁微球菌)E.coliC.poinsettiae第第I种和第种和第IV种肽桥的比较种肽桥的比较细菌细胞的基本结构(2)革兰氏阳性菌的细胞壁)革兰氏阳性菌的细胞壁:占占3070%,不同不同菌种中肽聚糖菌种中肽聚糖(肽肽链链)组分不同组分不同,具重具重要分类意义。要分类意义。肽聚糖肽聚糖:由肽聚糖和磷壁酸组成由肽聚糖和磷壁酸组成磷壁酸磷壁酸(teichoic acid):细菌细胞的基本结构 占占40%。G+菌菌所特有所特有,其主链由其主链由数十个磷酸甘油
10、或数十个磷酸甘油或磷酸核糖醇组成磷酸核糖醇组成,有的还有由有的还有由DAla和还原糖组成的侧和还原糖组成的侧链。链。磷壁酸的分类磷壁酸的分类:细菌细胞的基本结构(1)按与壁的连接方式分按与壁的连接方式分:壁磷壁酸壁磷壁酸:与肽聚糖分子与肽聚糖分子共共 价结合价结合,并延伸到并延伸到肽肽 聚糖分子表面聚糖分子表面,带带 有负电荷。有负电荷。膜磷壁酸膜磷壁酸:与原生质膜的与原生质膜的脂脂 类共价结合。类共价结合。(2)(2)根据主链组成不同根据主链组成不同根据主链组成不同根据主链组成不同:细菌细胞的基本结构甘油型甘油型核糖醇型核糖醇型 一般一种一般一种菌含一种磷菌含一种磷壁酸。壁酸。磷壁酸的功能:
11、磷壁酸的功能:细菌细胞的基本结构使细胞壁形成负电荷环境使细胞壁形成负电荷环境,以利于吸附镁离子以利于吸附镁离子,维持酶活。维持酶活。贮藏磷元素贮藏磷元素增强致病菌对宿主的的粘连、避免被白细胞吞噬及抗补体增强致病菌对宿主的的粘连、避免被白细胞吞噬及抗补体作用作用赋予革兰氏阳性细菌以特异的表面抗原赋予革兰氏阳性细菌以特异的表面抗原可作为噬菌体的特异性吸附受体可作为噬菌体的特异性吸附受体能调节细胞内自溶素的活力,借以防止细胞因自溶死亡能调节细胞内自溶素的活力,借以防止细胞因自溶死亡(3)革兰氏阴性菌的细胞壁)革兰氏阴性菌的细胞壁细菌细胞的基本结构 革兰氏阴性革兰氏阴性菌的细胞壁结构菌的细胞壁结构较复
12、杂较复杂,分内壁分内壁层和外壁层。层和外壁层。内壁层内壁层:细菌细胞的基本结构 紧贴胞膜紧贴胞膜,仅由仅由12层肽聚层肽聚糖分子构成糖分子构成,占占细胞壁干重细胞壁干重5 10%,无磷壁酸。无磷壁酸。细菌细胞的基本结构脂多糖脂多糖 蛋白质层蛋白质层:脂蛋白脂蛋白、基质蛋白基质蛋白、外壁蛋白外壁蛋白;磷脂磷脂外壁层外壁层:位于肽聚糖层的位于肽聚糖层的外部。包括外部。包括:细菌细胞的基本结构埋嵌在外壁层中埋嵌在外壁层中,如孔蛋白如孔蛋白,三聚体构三聚体构成的疏水孔道贯穿外成的疏水孔道贯穿外壁层壁层,使小于使小于800-900D的分子可通过的分子可通过,起分子筛作用。起分子筛作用。基质蛋白:基质蛋白
13、:细菌细胞的基本结构 为特异性载体为特异性载体,可将可将Vit B12这类较这类较大分子送入细胞内大分子送入细胞内外壁蛋白:外壁蛋白:细菌细胞的基本结构与肽聚糖层共与肽聚糖层共价结合价结合,并埋置在外并埋置在外壁层壁层,使外壁层牢固使外壁层牢固的与内壁层连接。的与内壁层连接。脂蛋白:脂蛋白:细菌细胞的基本结构脂质脂质A:两个葡糖胺连接多两个葡糖胺连接多 个脂肪酸个脂肪酸,为内毒素为内毒素 的中心。的中心。核心多糖核心多糖:与脂质与脂质A相连相连,由由 糖及其衍生物组成。糖及其衍生物组成。O-侧链侧链:短多糖链短多糖链,其顺序其顺序有有 菌种特异性菌种特异性,具有诊断具有诊断 细菌学意义。细菌学
14、意义。脂多糖脂多糖(LPS,lipopolysaccharideLPS,lipopolysaccharide):细菌细胞的基本结构1.G-菌致病物质菌致病物质内毒素的物质基础。内毒素的物质基础。2.与磷壁酸相似,吸附二价阳离子以提与磷壁酸相似,吸附二价阳离子以提 高高这些离子在细胞表面的浓度这些离子在细胞表面的浓度。3.由于由于LPS的多样性,决定的多样性,决定G菌表面抗菌表面抗 原决定簇的多样性。原决定簇的多样性。4.噬菌体吸附位点。噬菌体吸附位点。5.控制某些物质进出细胞的选择性屏障控制某些物质进出细胞的选择性屏障脂多糖脂多糖(LPS)的功能:的功能:细菌细胞的基本结构(4)革兰氏染色的原
15、理革兰氏染色的原理 G G菌:细胞壁厚,肽聚糖网菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性屏障,当状分子形成一种透性屏障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫障缩小,故保留结晶紫-碘复碘复合物在细胞膜上。呈紫色。合物在细胞膜上。呈紫色。G菌:肽聚糖层薄,交联松散菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高其脂含量高,乙醇将脂溶解,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫缝隙加大,结晶紫-碘复合物碘复合物溶出细胞壁,沙黄复染后呈红溶出细胞壁,沙黄复染后呈红色。色。细菌细胞的基本结构G+和和G-细胞壁细胞壁的对比的对比4.4.溶
16、菌酶与青霉素的作用溶菌酶与青霉素的作用细菌细胞的基本结构溶菌酶溶菌酶(lysozyme):作用于作用于NAMNAM的的G1和和NAGNAG的的C1-C4之间的糖苷键,之间的糖苷键,所以又称乙酰胞壁质酶。所以又称乙酰胞壁质酶。对对G-菌,在菌,在EDTA存存在下,受溶菌酶作用。在下,受溶菌酶作用。溶菌酶处理后的菌细溶菌酶处理后的菌细胞应保存在弱高渗胞应保存在弱高渗(0.1 0.2 M)蔗糖液中。蔗糖液中。溶菌酶的作用过程溶菌酶的作用过程细菌细胞的基本结构青霉素青霉素(penicillium):细菌细胞的基本结构 作用于肽聚糖肽作用于肽聚糖肽桥的联结,即抑制桥的联结,即抑制肽聚糖的合成,故肽聚糖的
17、合成,故仅对生长着的菌有仅对生长着的菌有效,主要是效,主要是G+菌。菌。青霉素作用位点青霉素作用位点 在溶霉菌或青霉素作用下产生在溶霉菌或青霉素作用下产生细胞壁缺陷或无细胞壁的细菌。细胞壁缺陷或无细胞壁的细菌。细菌细胞的基本结构缺壁细菌缺壁细菌实验室或宿实验室或宿主体内形成主体内形成在自然界长期进化中形成在自然界长期进化中形成-支原体支原体缺壁突变缺壁突变-L型细菌型细菌人工去壁人工去壁基本去尽基本去尽-原生质体原生质体G+部分去尽部分去尽-球状体球状体G-细菌除去细胞壁细菌除去细胞壁剩下由细胞膜包裹的剩下由细胞膜包裹的部分。多为部分。多为G+菌。菌。细菌细胞的基本结构a.原生质体原生质体(p
18、rotoplast):原生质体的特点:原生质体的特点:细菌细胞的基本结构1)无细胞壁,为圆球形无细胞壁,为圆球形2)对环境敏感:渗透压,震荡,离心,易溶菌对环境敏感:渗透压,震荡,离心,易溶菌3)有鞭毛,而不能运动有鞭毛,而不能运动4)不被噬菌体感染(因为没有吸附位点)不被噬菌体感染(因为没有吸附位点)5)生物学特性依旧生物学特性依旧原生质体的应用:原生质体的应用:基础研究,作为新的子实体基础研究,作为新的子实体,培育新种培育新种,固定化。固定化。细菌细胞的基本结构b.球状体球状体(spheroplast):还保留有部分细胞壁的菌体细还保留有部分细胞壁的菌体细胞胞,多见于多见于G菌。菌。细菌细
19、胞的基本结构特点:特点:除具原生质体特点外除具原生质体特点外a)a)可有一定抗性,可培养可有一定抗性,可培养b)b)可重新合成细胞壁可重新合成细胞壁c.L型细菌型细菌(L-form of bacteria):自发突变形成的细胞壁缺陷自发突变形成的细胞壁缺陷(部分部分或全部或全部),),具多形性。可以生长繁殖具多形性。可以生长繁殖,在在培养基上形成油煎蛋菌落。有些可重培养基上形成油煎蛋菌落。有些可重新合成细胞壁。新合成细胞壁。严格的说严格的说,L,L型细菌专指那些在实验室型细菌专指那些在实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株传性稳定的细胞壁
20、缺陷菌株细菌细胞的基本结构d.支原体支原体(Mycoplasma):自然进化长期进自然进化长期进化而成化而成,细胞膜细胞膜有甾醇有甾醇,耐机械耐机械压力压力5.细胞壁的功能细胞壁的功能:1)保护细胞保护细胞,维持菌形维持菌形2)具有抗原性致病性对噬菌体的敏感性具有抗原性致病性对噬菌体的敏感性3)与胞膜一起完成细胞内外物质交换与胞膜一起完成细胞内外物质交换4)为正常细胞分裂所必需为正常细胞分裂所必需 5)鞭毛运动的支点鞭毛运动的支点细菌细胞的基本结构6.周质空间周质空间(periplasmic space;periplasm)(1)概念概念:位于细胞壁与细胞膜之位于细胞壁与细胞膜之间的狭窄空隙间
21、的狭窄空隙细菌细胞的基本结构(2)周质空间的特点周质空间的特点:a.充满松散的网状肽聚糖充满松散的网状肽聚糖b.含水解酶类含水解酶类c.含与营养吸收有关的蛋白质含与营养吸收有关的蛋白质细菌细胞的基本结构(3)提取周质蛋白的方法提取周质蛋白的方法原理:突然改变渗透压并使细胞发生物原理:突然改变渗透压并使细胞发生物理性裂解理性裂解步骤:将细菌放在用步骤:将细菌放在用Tris缓冲液配制含缓冲液配制含EDTA的的20%蔗糖溶液中保温,使其发生质蔗糖溶液中保温,使其发生质壁分离,接着快速地用壁分离,接着快速地用4oC的的0.005 mol/L MgCl2溶液稀释并降温,使细胞外膜突然破溶液稀释并降温,使
22、细胞外膜突然破裂并释放出周质蛋白裂并释放出周质蛋白表表3-2非常重要非常重要渗透休克法或冷休克法渗透休克法或冷休克法GG+和和GG-细菌某些特性的比较细菌某些特性的比较7.古生菌的细胞壁古生菌的细胞壁蛋白质细胞壁蛋白质细胞壁 少数甲烷菌少数甲烷菌假肽聚糖细胞壁假肽聚糖细胞壁 甲烷杆菌菌甲烷杆菌菌独特多糖细胞壁独特多糖细胞壁 甲烷八叠球菌属甲烷八叠球菌属硫酸化多糖细胞壁硫酸化多糖细胞壁 盐球菌属盐球菌属糖蛋白细胞壁糖蛋白细胞壁 盐杆菌属盐杆菌属N-乙酰葡糖胺和乙酰葡糖胺和N-乙酰塔罗胺糖醛酸以乙酰塔罗胺糖醛酸以1,3糖苷键形成;肽尾由糖苷键形成;肽尾由L-Glu、L-Ala和和L-Lys组成,肽
23、桥由组成,肽桥由L-Glu组成组成G+,多含半乳糖胺、葡糖醛酸、葡萄糖和乙酸,无磷酸和硫酸多含半乳糖胺、葡糖醛酸、葡萄糖和乙酸,无磷酸和硫酸含葡萄糖、甘露糖、半乳糖和它们的氨基糖及糖醛酸和乙酸含葡萄糖、甘露糖、半乳糖和它们的氨基糖及糖醛酸和乙酸CV糖蛋白组成,包括葡萄糖、葡糖胺、甘露糖、核糖和阿拉伯糖;糖蛋白组成,包括葡萄糖、葡糖胺、甘露糖、核糖和阿拉伯糖;蛋白部分由酸性氨基酸组成如蛋白部分由酸性氨基酸组成如Asp,可平衡可平衡Na+不同蛋白质或同种蛋白的许多亚基组成不同蛋白质或同种蛋白的许多亚基组成(二)细胞膜(二)细胞膜(cell membrane)(cell membrane)细菌细胞的
24、基本结构1.1.概念概念:细胞膜是细胞膜是紧贴细胞壁内紧贴细胞壁内侧包围细胞质侧包围细胞质的一层柔软,的一层柔软,富有弹性的半富有弹性的半透明薄膜。透明薄膜。2.2.观察分离方法观察分离方法细菌细胞的基本结构(1)(1)质壁分离质壁分离(2)(2)选择性染色选择性染色(3)(3)电镜技术电镜技术(4)(4)溶菌酶处理溶菌酶处理3.细胞膜的细胞膜的化学组成化学组成4.细胞膜的细胞膜的结构结构细菌细胞的基本结构1972年年Singer和和Nicolson提提出的细胞膜液态出的细胞膜液态镶嵌模型。镶嵌模型。5.细胞膜的功能:细胞膜的功能:(1)(1)细胞内外物质交换细胞内外物质交换和运送和运送(2)
25、维持细胞内正常渗透压的屏障维持细胞内正常渗透压的屏障(3)在原核微生物中在原核微生物中,参与生物氧化和参与生物氧化和 能量产生能量产生(3)与细胞壁及荚膜的合成有关与细胞壁及荚膜的合成有关(4)是鞭毛着生的位点是鞭毛着生的位点细菌细胞的基本结构6.内膜系统:膜内陷并延伸到细胞质内,在内膜系统:膜内陷并延伸到细胞质内,在繁殖和代谢多种过程中起作用繁殖和代谢多种过程中起作用细菌细胞的基本结构间体间体(mesosome):细胞膜内褶形成的一细胞膜内褶形成的一种管状、层状或串状种管状、层状或串状物,一般位于细胞分物,一般位于细胞分裂的部位或附近。多裂的部位或附近。多见于见于G+菌菌间体的功能:间体的功
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- 微生物 形态 构造
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