EXP-血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.ppt
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1、蛋白质名称蛋白质名称PI泳动脉泳动脉(cm2V-1S-1)血清蛋白浓度血清蛋白浓度(10-2g.mL-1)分子量分子量(Mr)占总蛋白占总蛋白含量含量(%)清蛋白清蛋白4.64-5.910-54.06900056.701-球蛋白球蛋白5.06-5.110-50.312000003.742-球蛋白球蛋白5.06-4.110-50.483000007.65-球蛋白球蛋白5.12-2.810-50.819000-15000011.53-球蛋白球蛋白6.35-7.30-1.010-50.71156000-30000020.30纤维蛋白元纤维蛋白元5.40-3.110-5表 中国正常成人血清蛋白质组成H
2、OWTO获得获得血清?血清?实验实验实验实验7 7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 1目的目的学习醋酸纤维薄膜电泳的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作操作;了解了解电泳电泳技术的一般原理技术的一般原理。2原理原理血清中含有多种蛋白质,它们之中有的和某些糖类结血清中含有多种蛋白质,它们之中有的和某些糖类结合,形成糖蛋白。由于各种蛋白所具有的解离基团不同,合,形成糖蛋白。由于各种蛋白所具有的解离基团不同,因而在同一因而在同一pH溶液中,所带净电荷不同,因此在电场中溶液中,所带净电荷不同,因此在电场中移动速度不同,故可利用移动速度不同
3、,故可利用电泳电泳的方法将它们分离。的方法将它们分离。(celluloseacetatemembraneelectrophoresis)带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快带负荷电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快任何一种物质的质点,任何一种物质的质点,由于其本身在溶液中的解由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其他带离或由于其表面对其他带电质点的吸附,会在电质点的吸附,会在电场电场中向一定的电极移动中向一定的电极移动有此一问?有此一问?Why选择pH8.6的巴比妥电极缓冲液?请你预测!本表中各蛋白组分的电泳图谱?蛋白质名称蛋白质名称PI清蛋白清蛋白4.641-球蛋白球蛋白5.062-球
4、蛋白球蛋白5.06-球蛋白球蛋白5.12-球蛋白球蛋白6.35-7.30pH选择多少呢?有什么规律让俺记住?v 一一般般在在碱碱性性溶溶液液中中(即即溶溶液液pHpH值值大大于于等等电电点点pIpI),分分子带负电荷,在电场中向正极移动。子带负电荷,在电场中向正极移动。v在酸性溶液中,分子带正电荷,在电场中向负极移动。在酸性溶液中,分子带正电荷,在电场中向负极移动。v移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。移动的速度取决于带电的多少和分子的大小。泳动度v不同质点在同一电场中的泳动速度不同,常用泳动度不同质点在同一电场中的泳动速度不同,常用泳动度/迁移率来迁移率来表示。泳动度指表示。泳动度指带电
5、质点在单位电场强度下的泳动速度带电质点在单位电场强度下的泳动速度v v d/t dlv u =(cm2.V-1.S-1)v E V/l Vt 影响泳动度因素影响泳动度因素l带电质点的性质v溶液的粘度v电场强度v溶液pH值v溶液离子强度v固体支持物电渗现象一般质点所带净电荷越多,质点D越小,越接近球形,则在电场中泳动速度越快反之则越慢采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法,称为采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法,称为醋酸纤维薄膜电泳。醋酸纤维薄膜电泳。醋酸纤维薄膜由醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡制成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度仅沫样的结构,厚度仅120um,有,有强渗
6、透性强渗透性,对分子移动,对分子移动无阻力无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附快速、样品用量少,应用范围广,分离清晰,没有吸附现象等优点。现象等优点。是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而成是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而成它它溶溶于于丙丙酮酮等等有有机机溶溶液液中中,即即可可涂涂布布成成均均一一细细密密的的微微孔孔薄薄膜膜,厚厚度度约约0.1-0.15mm0.1-0.15mm为为宜宜。太太厚厚吸吸水水性性差差,分分离离效效果果不不好好;太太薄薄则则膜片缺少应有的机械强度则易碎膜
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- 关 键 词:
- EXP 血清 蛋白 醋酸纤维 薄膜 电泳
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