非环核苷的设计合成及体内外抗肿瘤活性评价.docx

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1、单位代码10476学号1703183087分类号R914.5硕士学位论文非环核苷的设计，合成及体内外抗肿瘤活性评价专业学位领域：药物化学专业学位类别：理学硕士申请人：李恭欣指导教师：郝二军 副教授郭海明 教授二二年五月DESIGN, SYNTHESIS AND ANTITUMOR EVALUATION OF ACYCLIC NUCLEOSIDES IN VITRO AND IN VIVOA Dissertation Submitted tothe Graduate School of Henan Normal Universityin Partial Fulfillment of the Re

2、quirementsfor the Degree of Master of ScienceByLi Gong-XinSupervisor: Associate Prof. Er-Jun HaoProf. Guo Hai-MingMay, 2020摘 要恶性肿瘤严重威胁人类的生命和健康，是人类死亡的主要病因之一，因而抗肿瘤药物的研发一直是药物开发中的重要方向之一。人工合成的核苷类化合物与天然核苷化合物在结构上相似，在进入人体后可以抑制病毒或肿瘤细胞复制，实现抗病毒或抗肿瘤的目的，所以，人们对于核苷类抗肿瘤和抗病毒药物的研发越来越重视。非环核苷类化合物是核苷类化合物中独特的一类化合物，具有独特的理

3、化性质，已成为核苷药物研发的重点。目前非环核苷化合物是已上市的抗病毒药物中重要的一类，例如阿昔洛韦是就是临床上比较常用的广谱抗病毒药物，可用于治疗多种疱疹病毒引发的疾病。但是关于非环核苷类化合物的抗肿瘤活性研究却比较少。为了研究非环核苷类化合物的抗肿瘤活性，我们课题组在之前研究的基础上，通过Aza-Michael加成反应，烯丙基胺化反应等反应合成了80个嘌呤2位，6位，8位，9位以及1位带有不同取代基以及11个具有不同构型的手性非环核苷类化合物，使用MTT法对这些化合物进行初步的抗肿瘤活性研究，分析总结构效关系。实验结果表明化合物9b在体外对结肠癌细胞系的两种细胞HCT-116和SW480表现

4、出最强的抑制增殖的能力，IC50分别为0.89 M和1.15 M，对照药物5-氟尿嘧啶（5-FU）对两种细胞的IC50分别为10.81 M和9.70 M，并且S-构型的手性非环核苷类化合物化合物比R-构型的表现出更强大抗肿瘤活性。我们又对化合物9b进行一系列的体内外抗肿瘤评价研究。流式细胞术分析结果表明，化合物9b主要是通过诱导细胞凋亡来抑制肿瘤增殖的；Western Blot实验结果表明化合物9b至少是通过促进Bax，P53，Cleaved-PARP这3种凋亡相关蛋白表达以及对Bcl-xl蛋白的抑制诱导细胞凋亡的；线粒体膜电位（MMP）分析表明，MMP的耗散可能参与了化合物9b诱导的细胞凋亡

5、；细胞集落实验表明化合物9b可以抑制细胞集落的形成；裸鼠移植瘤实验表明化合物9b在SW480细胞移植的裸鼠模型中显示出同对照药物5-FU同等效力的疗效并且毒性相较于对照药物5-FU小。对裸鼠的肿瘤进行HE染色分析表明，给予化合物9b后，小鼠体内肿瘤发生明显坏死。通过对非环核苷的体内外抗肿瘤活性评价研究，发现化合物9b可以作为未来抗癌药物发现的有希望的抗癌先导化合物，为开发出更优异的非环核苷类抗肿瘤药物提供了一定的研究基础，另外，本论文的研究丰富了非环核苷化合物库，为开发出具有自主知识产权的核苷类抗肿瘤药物奠定了基础。本文的另一项工作是在研究手性非环核苷类化合物的合成中，我们利用原位固定策略，制

6、备了吸附在石墨烯上的杂化材料多组分手性催化剂，将其应用于脱氢氨基酸衍生物氢化时，表现出良好不对称诱导作用，达到了99%以上转化率，最高ee值为96%；反应结束后，简单过滤即可再循环利用。本方法对于开发基于非共价相互作用不对称反应的其他多相杂化手性催化剂提供了很好的借鉴关键词：非环核苷，合成，抗肿瘤活性评价，构效关系，不对称均相催化111ABSTRACTHuman life and health are threatened by the malignant tumors seriously, being one of the main causes of human death. Theref

7、ore, the development of antitumor drugs has always been one of the important directions in drug development. The synthetic nucleoside compounds are similar in structure to natural nucleoside compounds. After entering the human body, they can inhibit the replication of viruses or tumor cells and achi

8、eve the purpose of antiviral or anti-tumor. So people pay more and more attention to the development of nucleoside antitumor and antiviral drugs. Acyclic nucleoside compounds are a unique class of nucleoside compounds. Because of their unique physical and chemical properties, they have become the fo

9、cus of nucleoside drug development. At present, acyclic nucleoside compounds are an important class of antiviral drugs on the market. For example, acyclovir is a widely used clinically broad-spectrum antiviral drug, which can be used to treat a variety of diseases caused by herpes virus. However, th

10、ere are relatively few anti-tumor activity of acyclic nucleoside compounds, and research in this area is relatively lacking.In order to study the anti-tumor activity of acyclic nucleoside compounds, Our research group synthesized 80 acyclic nucleoside compounds with different substituents at the 2,

11、6, 8, 9 and 1 position of purines and 11 chiral acyclic nucleoside compounds with different configurations through reactions such as Aza-Michael addition reaction and allyl amination reaction based on previous research. The MTT assay was used to conduct preliminary antitumor activity studies of thes

12、e compounds, analyze and summarize the structure-activity relationship. The experimental results showed that compound 9b showed the strongest ability to inhibit proliferation of two colon cancer cell lines HCT-116 and SW480 in vitro, with IC50 of 0.89 M and 1.15 M, and the control drug 5-fluorouraci

13、l (5-FU) The IC50 of the two cells were 10.81 M and 9.70 M, respectively, respectively. And the chiral acyclic nucleoside compounds in the S-configuration exhibited stronger antitumor activity than the R-configuration. Next, we performed a series of evaluation studies on compound 9b in vivo and in v

14、itro antitumor. Flow cytometry analysis showed that compound 9b inhibited tumor proliferation mainly by inducing apoptosis. Western Blot experiments showed that compound 9b at least promoted the expression of three apoptosis-related proteins, Bax, P53, and Cleaved-PARP, and inhibited of Bcl-xl prote

15、in induced apoptosis. Mitochondrial membrane potential (MMP) analysis showed that dissipation of MMP may be involved in apoptosis induced by compound 9b. Cell colony experiments showed that compound 9b can inhibit the formation of cell colonies. Nude mouse xenograft experiments show that compound 9b

16、 has the same efficacy as the control drug 5-FU in a nude mouse model of SW480 cell transplantation and is less toxic than the control drug 5-FU. H & E staining analysis of nude mices tumors showed that after administration of compound 9b, tumors in the mice had apparent necrosis.Through the evaluat

17、ion of acyclic nucleoside in vivo and in vitro antitumor activity, it was found that compound 9b can be used as a promising antitumor lead compound for future antitumor drugs.It provides a certain research basis for the development of more excellent acyclic nucleoside antitumor drugs. In addition, t

18、his study enriched the library of acyclic nucleoside compounds and laid the foundation for the development of nucleoside antitumor drugs with independent intellectual property rights.Another work in this paper is to study the synthesis of chiral acyclic nucleoside compounds, and found that a multi-c

19、omponent chiral catalyst for hybrid materials adsorbed on graphene was prepared by in situ immobilization strategy and used to remove hydrogenated amino acids Derivatives. After hydrogenation, they show good asymmetric induction, reaching a conversion rate of over 99%, with a maximum ee of 96%; afte

20、r the reaction is completed, they can be recovered by simple filtration. This method provides a good reference for the development of other heterogeneous hybrid chiral catalysts based on asymmetric reactions with non-covalent interactions.KEY WORDS : acyclic nucleoside, synthesis, evaluation of anti

21、tumor activity, structure-activity relationship, asymmetric homogeneous catalysis第一章 课题背景与研究意义目 录摘 要IABSTRACTIII目 录1第一章 课题背景与研究意义31.1核苷类化合物的简介31.2核苷类化合物的研究进展41.2.1核苷类化合物抗病毒活性的研究进展41.2.2 核苷类化合物抗肿瘤活性的研究进展61.3 非环核苷类化合物的简介81.4 非环核苷类化合物的研究进展101.4.1非环核苷类化合物抗病毒活性的研究进展101.4.2非环核苷类化合物抗肿瘤活性的研究进展111.5 课题的设计与提出

22、14第二章 非环核苷化合物的设计与合成162.1引言162.2 实验仪器与试剂162.2.1 实验仪器162.2.2 实验试剂172.3 实验方法182.3.1非环侧链不同取代基取代的非环核苷的合成182.3.2手性非环核苷的合成222.3.3原料的合成232.4结果与讨论262.5产物的表征30第三章 非环核苷类化合物的抗肿瘤研究593.1引言593.2实验仪器与试剂593.2.1实验仪器593.2.2 实验试剂603.3 实验方法613.3.1细胞复苏613.3.2 细胞传代613.3.3 MTT法测试非环核苷类化合物对肿瘤细胞的细胞活性613.3.4 细胞周期测试613.3.5 细胞凋亡

23、测试623.3.6 Western Blot 实验623.3.7 线粒体膜电位（MMP）测定623.3.8使用Q-VD-OPh研究凋亡机制633.3.9 集落形成实验633.3.10 裸鼠移植瘤实验633.4 实验结果与分析633.4.1 MTT法测试非环核苷类化合物对肿瘤细胞的细胞活性633.4.2 细胞周期测试743.4.3 细胞凋亡测试753.4.4 Western Blot 实验763.4.5 线粒体膜电位（MMP）测定763.4.6使用Q-VD-OPh研究凋亡机制773.4.7 集落形成实验783.4.8 裸鼠移植瘤实验79第四章 石墨烯吸附多组分手性催化剂在不对称氢化中的应用814

24、.1 前言814.2 实验部分824.2.1 S1的合成824.2.2 S2的合成834.2.3 S3的合成834.2.4 吸附在石墨烯上的杂化材料S4graphene的合成844.2.5吸附在石墨烯上的杂化材料S4graphene氢化催化反应844.3结果与讨论854.3.1对比实验854.3.2 S4graphene重复使用874.3.3 产物的表征884.3.4 结论91第五章 结论与展望93参考文献95附录 非环核苷类化合物核磁和高效液相图谱103致谢202攻读学位期间发表的学术论文目录205独 创 性 声 明207关于论文使用授权的说明207第一章 课题背景与研究意义1.1核苷类化合

25、物的简介核苷是由含氮碱基与糖基连接缩合而成。其中，碱基主要为嘌呤碱基或者嘧啶碱基，糖基的种类则比较多，对于天然核苷而言，常见的糖基为五碳糖，包括核糖和脱氧核糖。五碳糖和碱基连接后形成核糖核苷与脱氧核糖核苷，也就是在我们生命活动中起到举足轻重的作用的RNA和DNA，是基因的物质基础。构成RNA的是核糖核苷，它的组成碱基主要包括腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、尿嘧啶（U）；构成DNA的是脱氧核糖核苷，它的组成碱基主要包括腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）、胸腺嘧啶（T）（如图1-1）。图1-1由于人工合成的各种核苷类化合物的结构和天然核苷相似，在进入人体后可以参与并影响DNA和RN

26、A的复制，转录以及蛋白质的合成，起到以假乱真的效果，因而许多核苷类化合物可以通过抑制病毒DNA或RNA的复制，肿瘤细胞的增殖从而达到抗病毒或者抗肿瘤的目的。现在已经发现了多种核苷类似物，它们的发现扩大了抗病毒和抗癌药物的广谱性，改变了母体化合物的药理和药代动力学性质1。就其结构而言，核苷可被认为由三个关键元素构成：（i）羟甲基（ii）杂环碱基部分以及（iii）呋喃环，目前来说，通过对这三个关键元素的结构修饰已被报道了很多，并且其中许多已被成功地开发为药物治疗剂2。1.2核苷类化合物的研究进展1.2.1核苷类化合物抗病毒活性的研究进展2000年，McGuigan等人通过钯催化末端炔烃与5-碘-2

27、-脱氧尿苷的偶联，然后用碘化铜处理，由此获得所需的5-炔基-2脱氧尿苷类似物3。如图1-3所示，并评估了它们在体外抑制水痘-带状疱疹病毒（VZV）复制的能力，如表1-1所示，使用抗疱疹药物阿昔洛韦以及本文作者先前报道的化合物1作为对照，其结果表明，在侧链中引入一个氧原子后，5p抗病毒活性最好，为0.75和0.5 M。但是与化合物1（EC50分别0.008和0.015 M）相比，化合物（5n-5q）的抗水痘-带状疱疹病毒的活性降低（约100倍），并且在乙二醇和环醚衍生物5r-5v中，活性似乎已完全消失。不过化合物1相比，醚类类似物的ClogP值有相对较大的降低，提高了化合物的水溶性，使这些化合物

28、的药效便于发挥。图1-3表1-1CompoundEC50 (M)aVZV YSEC50(M) aVZV OKAEC50(M) aTK-VZVe 07/1EC50(M) aTK-VZVe YS/RMCCb(M)CC50c(M)ClogPd5n221750502002001.055o8.15.950502002001.055p0.750.550502002001.055q9.37.950502002001.055r200200200200200200-0.485s12097200200200200-0.485t404040404040-1.415u200200200200200200-1.945v

29、200200200200200200-1.5910.0080.015505050503.52Aciclovir1.02.974125200200-2.30a EC50: 有效浓度为50，需要减少50的病毒斑形成。b MCC: 最低细胞毒性浓度，需要改变显微镜下可检测的细胞形态。c CC50: 细胞抑制浓度为50，需要抑制HEL细胞生长50。d ClogP: 正辛醇/水的分配系数。e TK-:胸苷激酶缺陷。2010年，Blake R. Peterson设计并合成了腺苷的疏水类似物6-甲基-9-D-呋喃核糖基嘌呤的生物甾体脱氮类似物（如图1-4所示），并评估了其抗病毒活性4。其中，化合物7与6-甲

30、基-9-D-呋喃呋喃糖基嘌呤（B）和结核菌素（C）相比，在细胞培养试验中表现出对PV（HeLa细胞中的针对PV的IC50为11 nM）和DENV2（Vero细胞中针对DENV的IC50为62 nM）的强效活性，并具有改善的细胞毒性。对B和7的假定的三磷酸代谢产物的研究表明，这些化合物（9、10）不抑制病毒聚合酶，不充当RNA链终止剂，并且不是致死性诱变剂，而是PV RdRP的强力底物。这些结果表明抗病毒的作用机制涉及对RNA-RNA相互作用，RNA-蛋白质相互作用或宿主细胞内源性靶标干扰的下游影响。图1-41.2.2 核苷类化合物抗肿瘤活性的研究进展2011年，Caroline Decomba

31、t为了鉴定5-氟尿嘧啶（5-FU）的新有效前药并开发，使用2-氟-2-脱氧葡萄糖（FDG）作为潜在药物载体的原始靶向方法，合成了八种原始5-FU衍生物5。其中5-FU通过嘧啶环的N1位置通过直接偶联或通过各种间隔基连接到FDG结构的C1位置。通过各种测试，最终化合物6w-6y（如图1-5所示）在体外药物释放曲线遵循伪一级动力学，在所有介质中发现均发现了5-FU。如表1-2所示，作者通过荧光测定法针对两种人类实体癌细胞系MCF-7（乳腺癌）和PA-1（卵巢癌）以及人体健康的细胞系人类成纤维细胞原代培养物进行体外抗增殖活性的初步评价，其结果表明作者所合成的化合物生物学活性与其有效释放5-FU的能力

32、之间具有很强的相关性。图1-5表1-2Compounds5-FU6w6x6yFibroblast(IC50) (M)1176.40.71565.00.1MCF-7(IC50) (M)1541122348.10.8PA-1(IC50) (M)513262412013年，Lech Celewicz等人为了开发出具有抗肿瘤特性的新型AddFU氨基磷酸酯前药，通过将3-叠氮基2-3-二脱氧基5-氟尿苷（AddFU）与4-氯苯基二三唑基磷酸酯进行磷酸化，然后与适当的胺反应，合成了一系列新型的4-氯苯基N-烷基氨基磷酸酯6，如图1-6所示。然后使用磺基罗丹明B（SRB）对合成的4-氯苯基N-烷基氨基磷酸酯

33、进行抗肿瘤活性测试，所使用的细胞为宫颈癌（Hela），口腔癌（KB）和乳腺癌（MCF-7）这三种细胞。最终，在所研究的人类细胞中，化合物21表现出最好的抗肿瘤活性。图1-6表1-3CompoundCytotoxicity(IC50, M)aSDbLogPcHelaKBMCF-7208.340.848.640.764.420.951.68211.640.101.640.181.880.742.052243.850.2240.530.0723.950.132.602325.851.6926.850.1227.250.182.56249.980.748.590.6610.380.402.32254.

34、210.183.810.125.410.181.842696.170.5999.290.9733.100.092.652732.890.1038.700.1741.790.083.162835.490.2346.610.3122.410.232.922938.400.3110038.401.541.87FUra6.230.464.840.156.530.82-0.59FdU6.500.248.691.1812.191.34-1.72 AddFU11.060.268.110.3310.320.15-0.38Cytarabine(standard)3.540.164.070.083.820.25-

35、2.32a IC50: 抑制50%细胞生长所需的化合物浓度。b SD (标准差)三个独立实验。c log P（分配系数的对数）,使用“logPKnowwin”方法计算1.3 非环核苷类化合物的简介在近些年来，人们对于核苷类化合物的糖基的修饰改造最多，并且一些在糖中修饰的化合物已被开发为抗病毒药物7。在糖基的修饰和改造过程中，将糖环开环或者通过一些化学反应例如烷基化反应8-10、Aza-Michael加成反应11-15、各类开环反应16-20、Misunobu21-23反应等反应在原糖环位置引入其他的含羟基的非环侧链所得到的化合物被称为非环核苷类化合物。在过去的几十年中，抗病毒药物在治疗多种病毒

36、感染中起着至关重要的作用，包括单纯疱疹病毒（HSV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和巨细胞病毒（CMV）感染。而在这些药物中最突出的是核苷衍生物, 核苷衍生物由于能够抑制病毒DNA聚合酶和逆转录酶（RTs）而成为有效的抗病毒药物，RTs在各种病毒生命周期中起着关键作用。非环核苷磷酸酯（ANPs）已成为抗病毒核苷衍生物的一类关键化合物24。目前，一些非环核苷类化合物被证明有很好的抗病毒活性，已经被批准作为临床用药，用于治疗各种病毒引起的疾病，如图1-2所示，我们列举了其中几种具有代表性的药物。图1-2在上述药物中，阿昔洛韦（ACV）是临床上比较常用的

37、一种广谱抗病毒药，是第一种能够有效对抗单纯疱疹病毒（HSV）1型和2型感染的药物，它可以干扰病毒DNA多聚酶，对病毒复制有抑制、灭活作用，目前来说临床上常用它治疗病毒性疾病，比如皮肤疱疹、口腔疱疹、生殖器疱疹、眼疱疹等单纯疱疹病毒感染，带状疱疹，免疫缺陷性水痘等25-28；更昔洛韦（DHPG）属于抗病毒药物，是一种2-脱氧鸟嘌呤核苷酸的类似物，可抑制疱疹病毒的复制，美国Syntex公司研发的用于治疗和预防巨细胞病毒（CMV）和单纯疱疹病毒（HSV）所致的感染29, 30；缬更昔洛韦（Valganciclovir）属于更昔洛韦的前药，主要用于治疗获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者的巨细胞病毒（

38、CMV）视网膜炎;预防高危实体器官移植患者的CMV感染，作用机制与更昔洛韦相似，但是它的毒性相对于更昔洛韦却显著降低，而且口服利用度是更昔洛韦的10倍，生物利用度也有了显著提高31, 32；喷昔洛韦（PCV）是英国SKB公司开发出来的新型抗疱疹病毒药物，主要用于治疗口唇或面部单纯疱疹、生殖器疱疹等疾病33。虽然喷昔洛韦对疱疹病毒有很强的抑制作用，但是它却有着口服利用度低的缺点，而泛昔洛韦（FCV）正是英国SKB公司为了克服这一缺点而研发的，它是喷昔洛韦的前药，在体内可以迅速转化为喷昔洛韦，后经过美国FDA批准，在临床上用于治疗疱疹病毒引起的疾34；阿德福韦（PMEA）为腺嘌呤核苷类似物，它可以

39、与腺苷酸竞争性的参病毒DNA链的合成，使DNA链合成终止，从而抑制病毒的复制，有较强的抗HIV,HBV,及疱疹病毒的作用。但是PMEA进入人体内后生物利用度较低，而且在大剂量使用时有一定的肾毒性，副作用较为明显，有待进一步开发35-37；PMEDAP的结构与PMEA相似，只是在PMEA的嘌呤环的2位多了一个氨基。PMEDAP具有比PMEA更为广谱的抗病毒活性且抗病毒活性强度也大于PMEA，但是，PMEDAP的缺点也很明显，那就是它的毒副作用较大，限制了它在临床上的应用35, 38-44；阿德福韦酯（ADV）是PMEA的酯化前药，是美国Gilead Science公司为了提高阿德福韦在体内的生物

40、利用度而开发出来的。最初开发ADV是用于治疗艾滋病的，但是由于其服用剂量大，对肾脏的毒性较大，后来被用来治疗乙型肝炎病毒，所用剂量小，对肾脏危害小，最终被美国FDA批准用于治疗慢性乙肝的药物9, 45；西多福韦（S-HPMPC）是新型的胞嘧啶核苷膦酰基甲醚衍生物，由美国Gilead 公司开发，对缺乏TK的单纯疱疹病毒（HSV）和水痘带状疱疹病毒（VZV）株有效，并且毒副作用较小46-48，目前主要用于治疗艾滋病患者的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎。1.4 非环核苷类化合物的研究进展经过文献调查，我们发现对于非环核苷类化合物抗肿瘤方面的研究的文献比较少，其中大部分是关于其抗病毒方面的研究，下面我们

41、将对非环核苷类化合物的相关研究进展进行简要介绍，主要分为其抗病毒方面和抗肿瘤两个方面。1.4.1非环核苷类化合物抗病毒活性的研究进展2005年，Morris J. Robins等人合成了抗病毒呋喃和吡咯并嘧啶核苷的非环类似物，并对它们的抗病毒活性进行评估，总结它们的构效关系49。作者发现某些长链类似物显示出对VZV和HCMV的活性。并且作者并没有发现这些化合物针对其他DNA和RNA病毒复制或针对肿瘤细胞增殖的显着活性。在这些化合物中，3f和3g在HEL细胞培养物中显示出较弱的抗水痘带状疱疹病毒（VZV）和抗人巨细胞病毒（HCMV）活性的活性（EC50：10-41 M），而4h和4i以及6l和6

42、m结果较好，EC50分别在1.8-16 M以及2.6-8.5 M之间。如图1-7，表1-4所示。图1-7表1-4CompoundEC50a(M)VZVHCMV(OKA)(HEL)(07/1)(HEL)(AD169)(HEL)(Davis)(HEL)3f111631103g41104004004h6.45.85.11.84i161016166l58.545.26m2.67.145.22016年，Karl Y. Hostetler等合成了化合物D（ODE-Bn-PMEG）和化合物E（ODE-Ph-PMEG）50，对它们的抗病毒活性进行检测，评估了它们对HPV-11，HPV-16，HPV-18，HI

43、V-1和HSV-2这几种病毒在细胞内DNA复制的影响以及在人包皮成纤维细胞(HFF)中细胞摄取和活化的特性。其中化合物D的抗病毒活性较好如图1-8所示。并且对化合物D拆分出两种它的磷手性对映异构体（3-fast和3-slow），对两个磷手性对映异构体也进行了抗病毒活性测试，结果表明它们的抗病毒活性与外消旋体没有显著性差异（t检验，P 0.05）。化合物D可以抑制HPV-11，HPV-16和HPV-18起源的质粒DNA在HEK-293和C33A细胞中的扩增，可以作为宫颈和其他肛门生殖器等高危HPV感染的治疗方法。图1-81.4.2非环核苷类化合物抗肿瘤活性的研究进展2003年，Silvana R

44、aic-Malic课题组合成了一系列的含有2-氟-，2-碘-和6-氟嘌呤部分的新型非环核苷类似物51，主要通过Baltz-Schiemann反应在嘌呤的2位引入氟，通过重氮化/卤化的方法获得碘化的产物，通过用氟化钾亲和取代季铵盐作为中间体，获得了6-氟嘌呤核苷类似物等这些关键步骤来合成嘌呤类的化合物。之后，作者对这些合成的嘌呤类的非环核苷类似物进行生物活性评价。选取的细胞主要有恶性肿瘤细胞如小鼠白血病细胞（L1210）、黑色素瘤细胞（HBL）、乳腺癌细胞（FM3A）、结肠癌细胞（HT29和SW620）、宫颈癌细胞（HeLa）、人T淋巴癌细胞（Molt4 / C8， CEM）、胰腺癌细胞（Mia

45、PaCa2）和喉癌细胞（Hep2）以及二倍体成纤维细胞（WI38）。在所合成的化合物中，嘌呤的2位为氨基，6位为硫的衍生物9l和9m的活性最好，如图1-9， 表1-5所示。化合物9l显著的抑制结肠癌细胞（SW620），IC50为0.16 0.1 M，而具有乙酰氧基乙氧基甲基侧链的化合物9m可以特异性的抑制结肠癌细胞（SW620），宫颈癌细胞（HeLa），喉癌细胞（Hep2），人T淋巴癌细胞（Molt4 / C8），人T淋巴癌细胞（CEM），小鼠白血病细胞（L1210），乳腺癌细胞（FM3A）这些细胞而对正常细胞二倍体成纤维细胞（WI38）没有抑制作用。作者还对这些化合物进行了抗病毒活性评价，遗憾的是对于所测试的一些病毒例如HIV-1（IIIB），HIV-2（ROD），HSV-1，HSV-2，牛痘等病毒在亚毒性浓度下均表现出无抗病毒活性。而9l和9m在抗肿瘤活性上的差异也表明这类化合物具有的独特的机制差异是它们抑制癌细胞增殖的基础，这也暗示这些化合物有通过进一步研究使其成为抗肿瘤药物的可能。图1-9表1-5Tumor cellCompoundTumor cellCompound9l9m9l9mL1210(IC50) (M)