GA∕T 1911-2021 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf

《GA∕T 1911-2021 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GA∕T 1911-2021 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf（10页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 -实施-发布 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检验 液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for glyphosate and aminomethyl phosphonic acid in biological samplesLC-MS GA/T GA 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 ICS 13.310 CCS A 92 GA/T I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本

2、文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本文件起草单位：贵州省公安厅物证鉴定中心、公安部物证鉴定中心、北京市公安局刑侦总队、中国刑事警察学院、广东省公安厅刑事技术中心、湖北省公安司法鉴定中心、重庆市公安局物证鉴定中心、广州市公安局刑事技术所、滨州市公安局物证检验鉴定中心、大连市刑侦支队。本文件主要起草人：王立雄、田仁奎、陈实、高明顺、张卓、兰昭荣、杨英勇、黄健、赵霞、朱昱、张亮、张银华、郭浩、孙立敏、吴洪振、王彬。GA/T 1 法庭科学 生物检材中草甘膦和氨甲基膦酸检

3、验 液相色谱-质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学生物检材（血液、尿液、胃组织、肝脏等）中草甘膦及其代谢物氨甲基膦酸的液相色谱-质谱（LC-MS）的定性定量方法。本文件适用于法庭科学生物检材（血液、尿液、胃组织、肝脏等）中草甘膦和氨甲基膦酸的定性定量分析。其他可疑样品可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 名词术语和定义 GA/T

4、 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。除另有说明外，在分析中使用的试剂均为色谱纯，试剂包括：a)甲醇；b)乙腈；c)乙酸铵；d)5%氨水：取5mL氨水（优级纯），加水溶解稀释并定容至100mL；e)5%氨水5mmol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵0.386g并移取50mL氨水，加水溶解稀释并定容至1000mL；

5、f)标准溶液：1)1.0mg/mL 单一标准物质储备溶液：根据草甘膦、氨甲基膦酸标准物质的纯度和盐型换算后，各称取适量，用水分别配制成 1.0mg/mL 草甘膦、氨甲基膦酸标准物质储备溶液，密GA/T 2 封，04保存，有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)单一标准物质工作溶液：移取 1.0mg/mL 标准物质储备溶液，用水配制成浓度为 100g/mL的单一标准工作溶液，密封，04保存，有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质储备溶液配制得到；3)混合标准物质工作溶液：分别移取 1.0mg/mL 草甘膦、氨甲基膦酸标准物质储备溶液，用水配制成浓

6、度为 100g/mL 的混合标准物质工作溶液，密封，04保存，有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的混合标准物质工作溶液均由 1.0mg/mL 单一标准物质储备溶液配制得到。5.2 材料 材料包括：a)GCB/PSA 固相萃取柱：CNWCNWBOND GCB/PSA 柱或等效固相萃取柱；注：CNWCNWBOND GCB/PSA柱是CNW公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)NH2固相萃取柱：Agela Cleanert NH2柱或等效固相萃取柱；注：Agela Cleanert NH2柱是A

7、gela公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。c)具盖离心管；d)具塞玻璃试管；e)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；b)电子天平：分度值 d0.01mg；c)铰碎机；d)移液器；e)离心机；f)振荡器；g)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 固相萃取 移取尿液 1.0mL 于具盖离心管中，加入 2mL 水稀释，得到 3mL 尿液稀释液。移取血液 1.

8、0mL 或称取铰碎的胃组织、肝脏等固体检材样品 1.0g 于具盖离心管中，加入 5mL 乙腈/水（体积比为 80:20），振荡 5min，10000r/min 以上离心 5min，取上清液转移至具塞玻璃试管，置于浓缩器上 70浓缩至约 0.5mL，加水稀释至 3mL,得到稀释液。将稀释液转移至 GCB/PSA 固相萃取柱（使用前依次用甲醇 3mL、水 3mL 进行活化），过柱流速为GA/T 3 1mL/min，用 1mL 水淋洗，收集过柱液和淋洗液并转移至 NH2固相萃取柱（使用前依次用甲醇 3mL、水 3mL 进行活化），过柱流速为 1mL/min，依次用 3mL 水、3mL 甲醇淋洗，弃去

9、淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，用 2mL5%氨水溶液洗脱，洗脱液过柱流速为 0.5mL/min1.0mL/min，洗脱液收集至具塞玻璃试管，置于浓缩器上 70浓缩至干，残留物用 0.3mL 乙腈/水（体积比为 20:80）溶解，经有机微孔过滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器检测。注：检材样品取样量、稀释体积、乙腈/水（体积比为 80:20）体积及定容体积可根据实际情况调整。7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加草甘膦、氨甲基膦酸混合标准物质工作溶液（尿液、血液添加样品的浓度为 0.1g/mL，胃组织添加样品的

10、浓度为 0.2g/g，肝脏添加样品浓度为 0.5g/g），作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 液相色谱-串联质谱仪条件 以下为参考仪器及条件，可根据不同品牌仪器和不同检材等实际情况进行调整：a)色谱柱：Asahipak NH2P-50 2D液相色谱柱（2.0mm 150mm，5m）或其他等效柱；注：Asahipak NH2P-50 2D是Shodex公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)柱温：35；c)流动相

11、A:乙腈，流动相B：5%氨水5mmol/L乙酸铵溶液；d)流速：0.25mL/min；e)洗脱：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1；表1 梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A 流动相 B 0.0 80%20%2.00 80%20%2.01 20%80%4.50 20%80%4.51 0%100%5.50 0%100%5.51 80%20%8.00 80%20%f)扫描方式：负离子扫描(ESI)；g)检测方式:多反应监测（MRM）；h)喷雾电压：-4500V；i)离子源温度：550；j)气帘气压力：30psi；k)雾化气压力：55psi；l)辅助气压力：55psi；GA/T 4 m)碰撞气：氮气；n

12、)定性、定量离子对、去簇电压和碰撞能量条件见表2。表 2 定性、定量离子对、去簇电压和碰撞能量条件 目标物 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 去簇电压 V 碰撞能量 eV 草甘膦 167.9/63.0 167.9/63.0-30-35 167.9/150.0-13 氨甲基膦酸 110.0/63.0 110.0/63.0-26 110.0/79.0-35 7.1.2.2 进样 分别吸取空白溶剂、添加样品提取液、空白样品提取液、检材样品提取液、标准物质工作溶液，按7.1.2.1仪器条件进行检测。进样顺序和进样次数应确保结果有效。7.2 定量分析 7.2.1 样品前处理 移取血液、尿液检材样品

13、1.0mL两份，或称取铰碎的胃组织、肝脏等固体检材样品1.0g两份，按7.1.1进行操作，得到检材样品提取液，供仪器检测。取与检材样品等量的相似基质空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液，供仪器检测。外标-单点校正法：取与检材样品等量的相似基质空白样品两份，添加草甘膦、氨甲基膦酸标准物质工作溶液，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。添加样品中目标物含量应在检材样品中目标物含量的（100 50）%范围内。外标-校准曲线法：取与检材样品等量的相似基质空白样品，添加草甘膦、氨甲基膦酸标准物质工作溶液(血液、尿液基质的配制浓度在0.2g/mL20g/mL范围内,

14、胃组织、肝脏基质的配制浓度在0.5g/mL20 g/mL范围内)，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供仪器检测。校准曲线应不少于6个浓度点（包括空白样品）。检材样品中目标物的含量应在校准曲线的线性范围内。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 同 7.1.2.1。7.2.2.2 进样 分别吸取检材样品提取液、空白样品提取液、添加样品提取液，按 7.1.2.1 仪器条件进样分析。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析 23 次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 7.2.3.1.1 外标-单点校正法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和

15、峰面积值，按公式（1）计算检材样品中目标物的含量。GA/T 5=AA.（1）式中：检材样品中目标物的含量；A检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；A添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值；添加样品中目标物的含量。7.2.3.1.2 外标-校准曲线法 记录检材样品提取液和添加样品提取液中目标物的保留时间和峰面积值，以添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值为纵坐标、添加样品提取液中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品提取液中目标物的峰面积值，按公式(2)计算出检材样品中目标物的含量。=y-ba.（2）式中：检材样品中目标物的含量；y 检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值

16、；a 线性方程的斜率；b 线性方程的截距。7.2.3.2 计算相对相差 记录 7.2.3.1 中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式（3）计算相对相差：12100%-RD=.（3）式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；1、2两份检材样品中目标物的含量；两份检材样品中目标物含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准物质工作溶液一致（相对误差在2.5%之内）、目标物的两对定性离子对与标准物质工作溶液一致，且离子对丰度比与浓度接近的标准物质工作溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品

17、无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 3 离子对丰度比的最大允许相对偏差范围 离子对丰度比 50%20%50%10%20%10%最大允许相对偏差 20%25%30%50%8.1.2 阴性结果评价 GA/T 6 检材样品未出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准物质工作溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2 定量结果评价 检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠，应按7.2重新提取检验。相关资料、谱图及检出限参见附录 A。GA/T 7 附录 A

18、（资料性）相关资料、谱图及检出限 A.1 草甘膦的相关资料 草甘膦，化学名：N-(膦酸甲基）甘氨酸。纯品为非挥发性白色晶体。25时在水中的溶解度为 1.2%，不溶于一般有机溶剂，其异丙胺盐完全溶解于水。不可燃、不可爆，常温贮存稳定。草甘膦的大鼠急性经口 LD50为 4320mg/kg，小鼠经口 LD50为 4640mg/kg，兔急性经皮 LD50大于 2000mg/kg，对人、畜低毒。急性毒性为级，属于低毒除草剂。草甘膦急性中毒基本由经口误服所致，生产和使用中引起全身急性中毒罕见。急性草甘膦中毒的常见临床表现有恶心、呕吐、头昏、乏力、腹痛、面色苍白，有的病例还可见血压降低、呼吸和心跳骤停等。草

19、甘膦及氨甲基膦酸的相关信息见表 A.1。表A.1 草甘膦及氨甲基膦酸的相关信息 编号 中文名称 CAS 编号 英文缩写 分子式 分子量 1 草甘膦 1071-83-6 GLY C3H8NO5P 169.07 2 氨甲基膦酸 1066-51-9 AMPA CH6NO3P 111.04 A.2 草甘膦及氨甲基膦酸的相关谱图 草甘膦及氨甲基膦酸的相关谱图见图 A.1。图 A.1 草甘膦及氨甲基膦酸 MRM 色谱图 GA/T 8 A.3 草甘膦及氨甲基膦酸的检出限 生物检材中草甘膦及氨甲基膦酸检出限见表 A.2。表 A.2 生物检材中草甘膦及氨甲基膦酸的检出限 样品 检出限 g/mL（g/g）尿液 0.05 血液 0.05 胃组织 0.1 肝脏 0.2 _