SN∕T 5227.5-2019 出口食品中牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法)(出入境检验检疫).pdf
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1、以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5227.52019出口食品中牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法)Rapid detection of bovine derived ingredient in food for exportRecombinase-aid amplification(RAA)method2019-12-27 发布2020-07-01 实施ICS 67.050C 53中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准SN/T 5227.52019I前 言SN/T 52272019出口食品中动物源性成分快速检测 重
2、组酶介导链替换核酸扩增法(RAA法)分为 11 个部分:第 1 部分:出口食品中鸡源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 2 部分:出口食品中猪源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 3 部分:出口食品中羊源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 4 部分:出口食品中鸭源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 5 部分:出口食品中牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 6 部分:出口食品中水牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 7 部分:出口食品中马
3、源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 8 部分:出口食品中驴源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 9 部分:出口食品中狐狸源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 10 部分:出口食品中貂源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法);第 11 部分:出口食品中大鼠源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法)。本部分为 SN/T 52272019 的第 5 部分。本部分按照 GB/T 1.12009 的规则进行编写。本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。本部分起草单位:中华人民共和国郑州海关
4、、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京海关、山东省食品药品检验研究院、中华人民共和国杭州海关、中华人民共和国拱北海关、中华人民共和国大连海关、中华人民共和国厦门海关、中华人民共和国成都海关、中华人民共和国福州海关。本部分主要起草人:苗丽、韩建勋、汪琳、霍胜楠、王娉、吴姗、罗宝正、郑秋月、孔繁德、林华、徐淑菲、郑晶。以正式出版文本为准以正式出版文本为准1SN/T 5227.52019出口食品中牛源性成分快速检测 重组酶介导链替换核酸扩增法(RAA 法)1 范围本部分规定了出口食品中牛源性成分(黄牛、牦牛)的 RAA 检测方法。本部分适用于出口食品中牛源性成分(黄牛、牦牛)的定性检测。此标准
5、所规定方法的最低检出限(LOD)为 0.1%(W/W)。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 274032008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测3 术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1 牛 Bovine偶蹄目,反刍亚目,牛科,牛亚科,牛属,牛属下有 6 个种,分别为大额牛(印度野牛),牦牛,瓜哇野牛(白臀野牛),柬埔寨野牛(高棉牛),原牛,野牛(白肢野牛)。
6、3.1.2 实时荧光 RAA Real-time RAA一种重组酶介导链替换的恒温核酸快速扩增技术(简称 RAA 技术)。利用从细菌或真菌中获得的重组酶,在恒温下(一般为 3742),该重组酶可与引物紧密结合,形成酶和引物的聚合体,在单链 DNA 结合蛋白的帮助下,打开模板 DNA 的双链结构,当引物在模板 DNA 上搜索到与之完全匹配的互补序列时,在 DNA 聚合酶的作用下,形成新的 DNA 互补链,扩增产物以指数级增长。利用荧光探针的标记,随着 RAA 反应的进行,RAA 产物与荧光信号的增长呈现对应关系。3.1.3 Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定阈
7、值时所经历的循环数。3.1.4 T 值 Time threshold每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所需要的时间。以正式出版文本为准2SN/T 5227.520193.2缩略语下例缩略语适用于本文件。3.2.1RAA:recombinase-aid amplification,重组酶介导扩增。3.2.2DNA:deoxyribonuleic acid,脱氧核糖核酸。3.2.3CTAB:cetyltrithylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵。3.2.4Tris:tris(Hydroxymethyl)aminomethane,三羟甲基氨基甲烷。3.2.5EDTA:ethy
8、lene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。3.2.6dNTPs:deoxyribonuleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。3.2.7SSB:single stranded DNA binding protein,单链 DNA 结合蛋白。3.2.8SC-recA:Streptomyces coelicolor recombinase,天蓝色链霉菌重组酶。3.2.9BS-recA:Bacillus subtilis recombinase,枯草芽孢杆菌重组酶。3.2.10Bsu:Bacillus subtilis,枯草芽孢杆菌。3.2.11Tri
9、cine:N-tris Hydroxymethyl methylglycine,N-三羟甲基甲基氨基酸。4 方法提要以提取的 DNA 为模板,采用牛的特异性检测引物和探针进行实时荧光 RAA 扩增,根据实时荧光RAA 的增幅情况,实现对食品和饲料中牛成分的检测鉴定。5 试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合 GB/T 6682 的要求。所有试剂均用无 DNA 酶污染的容器分装。表 1 检测用引物和探针物种名称引物/探针序列(5 3)扩增片段长度靶基因牛F:ATTTCGGTTCCCTCCTGGGAATCTGCCTAATC173bp线粒体细胞色素b 基因(Cytb)R:
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