GA∕T 1631-2019 法庭科学 血液、尿液中米氮平和氟西汀检验 气相色谱和气相色谱-质谱法(公共安全).pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 血液、尿液中米氮平和氟西汀 检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for mirtazepine and fluoxetine in blood and urine samplesGC and GC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别

2、这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本标准起草单位：北京市公安局刑事侦查总队。本标准起草人：乔静、张瑛、覃仕扬、张文芳、杨继峰、杨士云、刘永涛、杨继锋、张文芳。GA/T 1 法庭科学 血液、尿液中米氮平和氟西汀检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学血液、尿液中米氮平和氟西汀的气相色谱（GC）定量检验方法和气相色谱-质谱（GC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于法庭科学血液、尿液中米氮平和氟西汀的定性分析和定量分析。其他可疑样品中米氮平和氟西汀的定性分析和定量分析可参照使用。2 规范性引

3、用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对血液及尿液进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱法定量、气相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法或内标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符

4、合 GB/T 6682 中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)乙腈；b)正己烷；c)无水硫酸钠；d)1mol/mL 氢氧化钠溶液：称量 4.0g 氢氧化钠，用水溶解，并稀释至 100mL；e)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据米氮平和氟西汀标准物质的纯度及盐型换算后，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 灭多威和灭多威肟标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)0.1mg/mL 混合标准工作溶液（100.0g/mL）：移取 1.0mg/mL 米氮平和氟西汀标准物质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10

5、mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到；GA/T 2 3)1.0mg/mL 内标溶液：根据内标普罗地芬（SKF525A）标准物质的纯度，用甲醇配制 1.0mg/mL SKF525A内标物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；4)0.1mg/mL 内标工作溶液：移取 1.0mg/mL 的内标 SKF525A标准溶液 1.0mL，用甲醇定容至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的内标溶液均由 0.1mg/mL 内标溶液用甲醇稀

6、释得到。注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；b)气相色谱仪：配有火焰离子化检测器（FID）；c)振荡器；d)电子天平；e)离心机；f)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液、尿液检材样品 1.0mL2.0mL 于具盖离心管中（若采用内标法，则加入内标 SKF525A溶液，使内标浓度为 1.0g/mL，混匀），用 0.1mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 11，加入正己烷/乙腈（体积比

7、98:2）混合溶剂 10mL，振荡 5min，8000r/min 离心 5min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠（15g）脱水，收集滤液置于浓缩器上 80浓缩至干，残留物用正己烷/乙腈（体积比 98:2）混合溶剂 0.2mL 溶解，作为检材样品提取液供 GC-MS 分析。7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加米氮平和氟西汀标准品，作为添加样品（添加样品的浓度为 1.0g/mL），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。若采用内标法，不做添加样

8、品，空白样品（不加内标）与检材平行操作，供 GC-MS 分析。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件（气相色谱-质谱）以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：DB-5MS毛细色谱柱（30m 0.25mm 0.25 m）或等效色谱柱；GA/T 3 注：DB-5MS 柱是 Aglient 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱温程：150保持1min，以10/min速率升温至280，保持15min；c)进样口温度：280；d)传输线温度：260；

9、e)载气：氦气；f)进样方式：分流进样，分流比101；g)电子轰击能量：70eV；h)离子源温度：250；i)倍增器电压：自动调谐值；j)柱流量：1mL/min；k)质量扫描范围：40amu450amu；l)扫描方式：全扫描（Scan）。7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液（若采用内标法，分别吸取检材、空白和内标工作溶液及标准工作溶液），按7.1.2.1的分析条件进样分析。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 准确量取血液或尿液样品1.0mL2.0mL两份（若采用内标法，则加入内标SKF525A溶液，使内标浓度为1g/mL，混匀），按7.1.1进行操作。另取

10、等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加米氮平和氟西汀标准物质作为添加样品（添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(10050)%，若采用内标法，则添加样品中还需加入内标SKF525A溶液，使内标浓度为1 g/mL，混匀），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)检测器：FID；b)色谱柱：DB-5毛细色谱柱（30m 0.25mm 0.25m）或等效色谱柱；注：DB-5 柱是 Aglien

11、t 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。c)色谱柱温程：160保持1min，以10/min速率升温至280，保持20min；d)进样口温度：280；e)检测器温度：280；f)载气：氮气；g)进样方式：分流进样；h)分流比：101；i)柱流量：1mL/min。GA/T 4 7.2.2.1.2 气相色谱-质谱条件 按7.1.2.1规定的条件分析。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液（若采用内标法，还需进样内标工作溶液），按7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析

12、23次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于6次。7.2.2.3 计算 7.2.2.3.1 计算含量 7.2.2.3.1.1 外标-单点法 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：添样添样添样VMAVMAW=.(1)式中：W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M添添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；V样检材样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A添添加样品提取液中目标物峰面积平均值；M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添添加样品的定容体积，单

13、位为毫升（mL）。7.2.3.1.2 内标-单点法 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物及内标物峰面积值，按公式（2）计算校正因子，按公式（3）计算含量：MAfMA=标内内标.(2)式中：f 校正因子；M标 添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；A内 添加样品中内标物峰面积平均值；M内 添加样品中内标物添加量，单位为微克（g）；A标 添加样品中目标物峰面积平均值。样内内样MAMAfW=.(3)式中：W检材样品中目标物含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL)；f 校正因子；A样 检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M内 检材样品中内标物添加量，单位为微克（g）；GA/T

14、5 A内 检材样品提取液中内标物峰面积平均值；M样 检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；7.2.2.3.2 计算相对相差 记录 2 份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（4）计算相对相差：%10021=XXXRD.(4)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征

15、离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 10 15 20%50%8.1.2 阴性结果评价 外标法阴性评价，检材样品中未出现与目标物（衍生后标准物质或衍生后对照品）一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。内标法阴性评价，检材样品中未出现与目标物一致的色谱峰，且检材样品中出现与内标物（衍生后内标物质）一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出

16、目标物。米氮平、氟西汀检出限、回收率、工作曲线和相关谱图参见附录 A。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。GA/T 6 A A 附 录 A（资料性附录）米氮平、氟西汀回收率、工作曲线和相关谱图 A.1 米氮平和氟西汀在样品中的回收率见表 A.1。表 A.1 米氮平和氟西汀的回收率（2mL 检材分别添加 1g 标准品）目标物 定量离子 血液中回收率 RSD 尿液中回收率 RSD 米氮平 195 101.2%4.08%104.3%2.74%氟西汀 44 74.9%

17、4.29%68.1%3.92%注：n 表示样品平行操作份数。A.2 米氮平、氟西汀工作曲线及检出限见表 A.2。表 A.2 米氮平、氟西汀的工作曲线及检出限（S/N=10）目标物 标准溶液工作曲线 标准溶液检出限 ng/mL 血液添加方法工作曲线 血液添加方法检出限 ng/mL 米氮平 Y=6035.9X-1410.6 r2=0.9992 50 Y=13806X-16206 r2=0.9997 30 氟西汀 Y=-28802.4X+85755.9 r2=0.9980 30 Y=163698.9X-41549.7 r2=0.9985 100 A.3 GC-MS 分析，米氮平检出限为 30ng/m

18、L，氟西汀检出限为 100ng/mL。A.4 米氮平质谱图见图 A.1。501001502002503003504004500255075100%195432087111116726572139234303361436411387326图A.1 米氮平质谱图（特征离子：195（基峰），208，265）GA/T 7 A.5 氟西汀质谱图见图 A.2。501001502002503003504004500255075100%445991148309183251232205277368393419343446 图 A.2 氟西汀质谱图（特征离子：44（基峰），104，309）A.6 内标SKF525A质谱图见图A.3。501001502002503003504004500255075100%86995816544209131281338239309258368 393427 图A.3 内标SKF525A质谱图（特征离子：86（基峰），99，165）A.7 米氮平、氟西汀化学结构见图A.4。氟西汀（Fluoxetine）米氮平（Mirtazapine）图A.4 氟西汀、米氮平化学结构图 _