GA∕T 1612-2019 法庭科学 生物检材中乐果等八种有机磷类农药检验 气相色谱和气相色谱-质谱法(公共安全).pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中乐果等八种有机磷类农药检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for eight organophosphorus pesticides including dimethoate in biological samplesGC and GC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。请注意本文

2、件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC1）提出并归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、山东省公安厅。本标准主要起草人：栾玉静、杜鸿雁、王瑞花、董颖、魏春明、王爱华、任昕昕、王芳琳、常靖、于忠山、高宏、宋丽娟。GA/T 1 法庭科学 生物检材中乐果等八种有机磷类农药检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷的气相色谱（GC）定量检验方法和气相色谱-质谱

3、（GC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于法庭科学生物检材中乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷的定性分析和定量分析。其他可疑样品中乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷的定性分析和定量分析可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以

4、空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物样品进行提、净化及浓缩，采用气相色谱法进行定量、气相色谱-质谱法进行定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)乙酸乙酯（色谱纯）；b)环己烷（色谱纯）；c)甲醇；d)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据标准物质的纯度，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷标

5、准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)0.1mg/mL 单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲GA/T 2 基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷标准物质溶液各1mL，分别用甲醇稀释并定容至10mL，混匀，配制成浓度为 0.1mg/mL 的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)玻璃试管。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱

6、-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；b)气相色谱仪：配有火焰光度检测器（FPD）；c)凝胶渗透色谱净化浓缩联用仪；d)电子天平；e)振荡器；f)离心机；g)移液器；h)浓缩器；i)匀浆机。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL2.0mL，或称取铰碎（或匀浆）的肝脏等固体检材样品 1.0g2.0g于具盖离心管中，加入乙酸乙酯或二氯甲烷 3.0mL6.0mL，振荡 5min，8000r/min 离心 10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 45浓缩至干，残留物用甲醇 100L 溶解，作为检材

7、样品提取液供仪器分析。如需净化，按 7.1.1.2 操作。7.1.1.2 样品净化 取 7.1.1.1 中两次提取后合并的有机相，用凝胶渗透色谱仪净化按 7.1.2.1.1 操作，浓缩至 1mL，再置于浓缩器上 45浓缩至干，残留物用甲醇 100L 溶解，作为检材样品提取液供仪器分析。7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷标准物质，作为添加样品（添加样品的浓度为 1.0g/mL（g），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品

8、提取液供仪器分析。GA/T 3 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 凝胶色谱净化浓缩联用仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整:a)净化柱：20mm 300mm，填料为 50.0 g 中性多孔的交联苯乙烯二乙烯基苯聚合物或类似物；b)流动相：环己烷/乙酸乙酯（体积比 1:1）混合溶剂；c)流速：4.7 mL/min；d)收集时间：收集 540 s900s 的洗脱液；e)在线浓缩温度和真空度：1 区：40 30.0 kPa；2 区：50 25.0 kPa；3 区：50 22.0 kPa。7.1.2.1.2 气相色谱-质谱条件 以下为

9、参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：DB-5MS柱（30m 0.25mm 0.25m）或等效色谱柱；注：DB-5MS 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱温程：100保持2min，以30/min速率升温至280，保持17min；c)进样口温度：280；d)传输线温度：260；e)载气：氦气；f)进样方式：分流进样，分流比101；g)电子轰击能量：70eV；h)离子源温度：250；i)倍增器电压：自动调谐值；j)柱流量：1mL/m

10、in；k)质量扫描范围：40amu450amu；l)扫描方式：全扫描（Scan）；m)目标物质谱特征离子碎片峰：见表1。表 1 检测目标物质谱特征离子碎片峰 名称 质谱特征离子碎片峰（EI 源）甲拌磷 m/z 75*、m/z 121、m/z 231、m/z260 乙拌磷 m/z 88*、m/z 97、m/z 186、m/z 274 马拉硫磷 m/z 125*、m/z 93、m/z 158、m/z 173 乙基对硫磷 m/z 97*、m/z109、m/z 139、m/z291 乐果 m/z 87*、m/z 93、m/z 125、m/z229 氧乐果 m/z 156*、m/z 110、m/z 21

11、3 甲基对硫磷 m/z 109*、m/z 125、m/z 263 倍硫磷 m/z 278*、m/z 109、m/z 125、m/z169 注：*为定量离子。7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。GA/T 4 7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取铰碎（或匀浆）的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g两份，按7.1.1进行操作。另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加乐果、氧乐果、马拉硫磷、对硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、倍硫磷和乙拌磷（添加样品中目标物含量应为检材样品中

12、目标物含量的(10050)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱-质谱条件 按7.1.2.1.2规定的条件分析。7.2.2.1.2 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)检测器：FPD；b)色谱柱：DB-5柱（30m 0.25mm 0.25m）或等效色谱柱；注：DB-5 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效

13、产品。c)色谱柱温程：120保持1min，以8/min速率升温至260，再以30/min速率升温至280，保持3min；d)进样口温度：260；e)检测器温度：300；f)载气：氮气；g)进样方式：分流进样；h)分流比：101；i)柱流量：1.0mL/min。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析23次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于6次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值（用定量离子的峰面积进行计算），按公式（1）计算含量：添样添样

14、添样VMAVMAW=.(1)式中：W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值；GA/T 5 M添添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；V样检材样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A添添加样品提取液中目标物峰面积平均值；M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%10021=XXXRD.(2)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量

15、数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。相关谱图参见附录 A 中图 A.1图 A.8。表 1 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50%20%50%10%20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%8

16、.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。GC-MS 分析，八种有机磷类农药检出限参见附录 A 中表 A.1。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠，应按7.2重新提取检验。有机磷类农药中毒诊断参考资料参见附录 B。GA/T 6 A A 附 录 A（资料性附录）有机磷类农药相关谱图及检出限 A.1 有机磷类农药相关谱图 有机磷相关谱图见图 A.1图 A.8。102030

17、405060708090100110120130140150160170180190200210220230240250260 m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)75121972601628476523110715312918659169141203214SPOOSS 图 A.1 甲拌磷质谱图（m/z 75，121，231，260）30405060708090100110120130140150160170180190200210220230240250260270m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)886097

18、471251421531862743575109201212229245160SPOOSS 图 A.2 乙拌磷质谱图（m/z 88，97，186，274）25.050.075.0100.0125.0150.0175.0200.0225.0250.0275.0m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)291259317315847143637931256211111284238184SPOOOOSOO 图 A.3 马拉硫磷质谱图（m/z 125，93，158，173）GA/T 7 25.050.075.0100.0125.0150.0175.0200.0225.

19、0250.0275.0m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)971092912913912581441556318626147167218274246ONOOPOSO 图 A.4 乙基对硫磷质谱图（m/z 97，109，139，291）102030405060708090100110120130140150160170180190200210220230 m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)8793125475815427930229143157109172198SPOOSNHO 图 A.5 乐果质谱图（m/z 87

20、，93，125，229）102030405060708090100110120130140150160170180190200210m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)15611079126581412815954721318363128170203SPOOONHO 图 A.6 氧乐果质谱图（m/z 156，110，213）GA/T 8 25.050.075.0100.0125.0150.0175.0200.0225.0250.0m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)1091252637993476328151392

21、01246155233OPNOOOOS 图 A.7 甲基对硫磷质谱图（m/z 109，125，263）25.050.075.0100.0125.0150.0175.0200.0225.0250.0275.0m/z0.000.250.500.751.00Inten.(x10,000)278125109169931537947166326324523118428216200OOSPSO 图 A.8 倍硫磷质谱图（m/z 278，109，125，169）A.2 生物检材中八种有机磷类检出限 生物检材中八种有机磷类检出限见表 A.1。表 A.1 生物样品中八种有机磷的检出限 目标物 甲拌磷 乙拌磷 马

22、拉硫磷 乙基对硫磷 乐果 氧乐果 甲基对硫磷 倍硫磷 检出限 g/mL 0.5 0.5 0.5 0.5 1.0 0.5 0.5 1.0 GA/T 9 附 录 B（资料性附录）有机磷中毒诊断参考资料 B.1 中毒症状 B.1.1 基本症状 在有机磷中毒中，瞳孔缩小是有机磷农药中毒的重要体征。中毒者口腔及呼吸道会有较多带“蒜臭”味的分泌物，严重者出现肺水肿，表现为呼吸困难，不能平卧；烦躁不安，发绀；咳嗽、咯白色或血性泡沫痰；心率减慢、心音弱，两肺布满哮鸣音及湿性罗音；甚至可发生呼吸衰竭、脑水肿、急性肾功能衰竭、急性心力衰竭。由于有机磷农药对胃肠黏膜有刺激和平滑肌蠕动增加的作用，经口中毒者还可以有恶

23、心、呕吐、腹痛、腹泻等消化系统症状。中、重度中毒者可有小肌束颤动，能发展到四肢及躯干肌束，严重者发生肌无力，甚至呼吸肌麻痹。在中枢神经系统症状方面，主要为头晕、乏力，重症者神志恍惚，甚至呈现昏迷，阵发性惊厥状态，严重者发生脑水肿或中枢性呼吸衰竭直至死亡。B.1.2 急性中毒症状 急性中毒发病时间与毒物品种、剂量和侵入途径密切相关。经皮肤吸收中毒，一般在接触26d内发病，口服毒在10min至2h内出现症状。一旦中毒症状出现后，病情迅速发展。急性中毒可分为三级：轻度中毒：有头晕、头痛、恶心、呕吐、多汗、胸闷、视力模糊、无力、瞳孔缩小；中度中毒：除上述症状外，还有肌纤维颤动、瞳孔明显缩小、轻度呼吸困

24、难、流涎、腹痛、腹泻、步态蹒跚，意识模糊；重度中毒：除上述症状外，并出现昏迷、肺水肿、呼吸麻痹、脑水肿。在急性中毒症状缓解后和迟发性神经病发病前，一般在急性中毒后24h96h突然发生死亡，称“中间型综合征”。其发病机制与胆碱酯酶受到长期抑制，影响神经-肌肉接头处突触后的功能。死亡前可先有颈、上肢和呼吸肌麻痹、上肢和呼吸肌麻痹。累及颅神经者，出现睑下垂、眼外展障碍和面瘫。B.2 中毒死亡机理 有机磷农药的急性中毒症状大多与胆碱酯酶活性被抑制有关，可归纳毒蕈碱样症状、烟碱样症状、中枢神经系统症状，其中：毒蕈碱样症状：这组症状出现最早，主要是副交感神经末梢兴奋所致，类似毒蕈碱作用，表现为平滑肌痉挛和

25、腺体分泌增加。临床表现先有恶心、呕吐、腹痛、多汗、尚有流泪、流涕、流涎、腹泻、尿频、大小便失禁、心跳减慢和瞳孔缩小；烟碱样症状：乙酰胆碱在横纹肌神经肌肉接头处过度蓄积和刺激，使面、眼睑、舌、四肢和全身横纹肌发生肌纤维颤动，甚至全身肌肉强直性痉挛。患者常有全身紧束和压迫感，而后发生肌力减退和瘫痪；中枢神经系统症状：中枢神经系统受乙酰胆碱刺激后有头晕、头痛、疲乏、共济失调、烦躁不安、诡妄、抽搐和昏迷。GA/T 10 B.3 有机磷农药成人中毒致死量 有机磷农药成人中毒致死量见表B.1。表B.1 有机磷农药成人中毒致死量 农药名称 成人口服致死量 g 甲基对硫磷 0.31.0 乙基对硫磷 0.10.3 甲拌磷 0.1 乐果 2.0 马拉硫磷 60