GA∕T 1621-2019 法庭科学 生物检材中噻嗪酮检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法(公共安全).pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中噻嗪酮检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for buprofezin in biological samplesGC-MS and LC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由全国刑事技术标准

2、化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC179/SCI）归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、重庆市公安局、广州市公安局、司法部司法鉴定科学技术研究所。本标准主要起草人：杜鸿雁、董颖、张蕾萍、于忠山、何毅、王芳琳、王俊伟、邢若葵、刘伟、沈敏。GA/T 1 法庭科学 生物检材中噻嗪酮检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱方法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中噻嗪酮的气相色谱-质谱（GC-MS）和液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于法庭科学生物检材中噻嗪酮的定性分析和定量分析。其他可疑样品中噻嗪酮的定性分析和定量分析可参照使用。

3、2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱-质谱

4、实验用水应符合GB/T 6682 中规定的三级水，液相色谱-质谱实验用水应符合GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)甲醇（色谱纯）；b)乙酸乙酯；c)乙腈（色谱纯）；d)丙酮；e)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据噻嗪酮标准物质的纯度，称取适量，用甲醇配制 1.0mg/mL噻嗪酮标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 12 个月。或采用市售标准溶液；2)10.0g/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的噻嗪酮标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释至10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的标准工作溶液，密封

5、，置于冰箱中冷藏保存。有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 10g/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。GA/T 2 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)固相萃取柱：C18中性混合柱，使用前用甲醇、水活化；d)一次性注射器；e)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；b)液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；c)电子天平；d)离心机；e)振荡器；f)移液器；g)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品

6、提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材1.0mL3.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g3.0g于具盖离心管中，加入乙酸乙酯6.0mL8.0mL，振荡10min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上60浓缩至干，残留物用甲醇溶解（供GC-MS分析时，用100 L溶解；供LC-MS分析时，用500L溶解，并用有机系微孔滤膜过滤），作为检材样品提取液，供仪器分析。如需净化，残留液按7.1.1.3操作。7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g于具

7、盖离心管中，用4倍体积水稀释，振荡10min，8000r/min离心25min，取上清液转移至已活化好的C18中性混合柱，控制上清液过柱流速为0.5mL/min，依次用1mL水、1mL甲醇/水(体积比5:95)淋洗2次，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用1mL乙酸乙酯洗脱2次，收集洗脱液并置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇溶解（供GC-MS分析时，用100 L溶解；供LC-MS分析时，用500L溶解，并用有机系微孔滤膜过滤），作为检材样品提取液，供仪器分析。如需净化，残留液按7.1.1.3操作。7.1.1.3 样品净化（中性氧化铝柱净化法）净化过程包括：GA/T

8、3 a)装柱：取一次性塑料吸管，将顶部剪开，在底部塞上少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠 2g3g、中性氧化铝 2g5g、无水硫酸钠 2g3g；b)净化：2mL 甲醇过柱（预洗柱子），弃去洗液，将样品提取液转移至净化柱上，用 2mL 乙酸乙酯洗脱两次，收集洗脱液并置于浓缩器上 45浓缩至干，残留物用甲醇溶解（供 GC-MS 分析时，用 100 L 溶解；供 LC-MS 分析时，用 500 L 溶解，并用有机系微孔滤膜过滤），作为检材样品提取液，供仪器分析。7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加噻嗪酮添

9、加样品（GC-MS添加样品的浓度为0.5g/mL(g)，LC-MS添加样品的浓度为0.1ng/mL(g)），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：DB-5MS毛细色谱柱（30m 0.25mm 0.25m）或等效色谱柱；注：DB-5MS 柱是 Agelient 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱

10、温程：100保持2min，以30/min速率升至280，保持17min；c)柱流速：1mL/min；d)进样口温度：280；e)传输线温度：230 f)离子源温度：210；g)载气：高纯氮；h)进样方式：分流进样，分流比：10:1；i)采用全扫描（SCAN）模式检测，质量扫描范围40amu550amu。7.1.2.1.2 液相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：Shim-pack XR-ODSIII柱（75mm 2.0mm,1.6m）或等效色谱柱；注：Shim-pack XR-ODSIII柱是岛津公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便

11、本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)流动相：A：水，B：甲醇；c)洗脱方式：梯度洗脱，洗脱程序见表1；d)流速:0.4mL/min；e)进样体积：5L;f)检测方式：正离子扫描(ESI+)；g)扫描方式：多反应监测(MRM);h)离子源电压：5500V;i)离子源温度：650；j)离子源气1：50psi；k)离子源气2：45psi；GA/T 4 l)MS参考条件（检测离子对、去簇电压、碰撞能、碰撞室出口电压）见表2。表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 50%50%0.5 50%50%1.5 10%90%2.5 10%9

12、0%5 50%50%表2 MS质谱条件 名称 定量离子对 定性离子对 去簇电压(DP)V 碰撞能(CE)eV 噻嗪酮 306.29106.0 306.2957.1 36 37 306.29106.0 36 37 306.2960.0 36 81 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g5.0g两份，按7.1.1进行操作。另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加噻嗪酮标准物质作为添加样品（添加样品

13、中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(100 50)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1 规定的条件分析。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按7.1.2.1的分析条件每个样品进样分析23次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于6次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：GA/T 5 添样添样添样VMAVMAW=.(1)式中：W 检材样品

14、中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样 检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M添 添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；V样 检材样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A添 添加样品提取液中目标物峰面积平均值；M样 检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添 添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%10021=XXXRD.(2)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。

15、8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 气相色谱-质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 3 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 10 15 20%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标

16、物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。GC-MS 方法检出限参见附录 A。8.1.2 液相色谱-质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度GA/T 6 比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表4规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 4 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标

17、准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。LC-MS 方法检出限参见附录 A。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。GA/T 7 附 录 A（资料性附录）噻嗪酮相关谱图 A.1 噻嗪酮的相关谱图见图A.1、图A.2。图A.1 噻嗪酮的气相色谱-质谱图 图A.2 噻嗪酮的液相色谱-质谱图 A.2 GC-MS分析，检出限为500ng/mL（g），LC-MS分析，检出限为2.0ng/mL（g）。_