NY∕T 3622-2020 马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定技术规程(农业).pdf

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1、ICS 65.020.20 B 05 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3622一2020马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定技术规程Technical code of practice for evaluation of potato resistance to Potato virus Y 2020-07-27发布2020-11-01实施静中华人民共和国农业农村部发布J常/年目1昌)卜/乱、/俯L柳月啦!G/T 1.12009 吉普11-的1则起草。J毡k印本标111由农业农村部种植业管理电器时二归平息1/本标准起草单位中国农业科学院蔬菜花卉韧情本标准主要起草人.杨于红、li振)11、谢丙炎

2、、泼饿、李彦、徐东辉。NY/T 3622-2020 I NY/T 3622-2020 马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定技术规程范围本标准规定了马铃薯抗马铃郭Y病毒病(Potarovirus Y.PVY)鉴定方法与评价标准。本标准适用于马铃薯CSoLanum阳berosumL.)品种和l材料对马铃薯Y病毒病抗性的室1;1;)鉴定及评价。2 规范性引用文件下列文件对于本文儿是不注日期的引用文GB/T 36816 NY/T 1858.6 SN/T 1840 3 A液为0.03中，摇匀。B液为0.034.2 感病对照品种从下列感f商品种中选择dy)。4.3 PVY繁殖寄主朔的版本适用于本文件。性病、男爵或夏

3、坡地(Shcpo-以黄苗愉烟(Nicoana tabcum cv.H uang miaoyu)、珊西烟(N.tabacum cv.Xanthi-NC)、三铠熄|(N.tbcum cv.Samsum)或心11.1-烟(N.glutillosa)为PVY繁殖寄主。4.4 育苗基质直接购买商品化蔬菜育苗基质，或将草炭、监石和菜田土按体积2:1:1 混合均匀，于034士l)C湿热灭菌1h。4.5 其他用品600同金刚砂、硅J(、氯化钙(CaCl，)等。5 抗病性鉴定5.1 材料育苗NY/1 3622-2020 守供鉴定的脱寄健康种薯置于15.C-20.C下11芽。待3白:芽长为1cm-l.5 cm时，

4、播利1于装有育苗基质的育苗钵内，每钵播种1个小辛辛;也可将无1ft细tR苗利于育苗钵中。)1于防虫日光温室里育苗，汩t度保持在21.C-25.C，常生水肥笆迎，向然光!呀!因5.2 接种体制备5.2 1 病毒分离、纯化马铃驱Y病毒的分离、纯化与保存见附录B.5.2 2 接种体繁殖、制备针对育种目的，选择PVY对应株系或混合株系作为接牵Itlf源，PVY株系鉴定按照GB/T36816的规定执行。取少量马铃薯Y病毒供试株系的汤:干111-或在繁殖寄主上保存的病11.1-，力n少量PBS缓冲液在碾钵中碾碎，人工摩擦接种在PVY繁殖寄主幼苗的叫片上，笠25.C-28.C的防虫泪室内培养12周后采收病l

5、叶。1g鲜病IIt加10mL的O.03 mol/L PBS缓冲液(pI-!7.0)，研磨后双层纱布过滤或3000 r/min离心15 min，其泌液或上清液且1I为接种悬浮液，用于人工接利5.3 接种5.3.1 接种时期幼生l是至411.1-6n.1期.5.3.2 接种浓度病11.1-/PBS缓冲液(pI-!7_ 0)为1/10(w/V)，配制方法同5_2.2.5.3.3 接种方法接事l前1d给植株浇足水分，并将马铃薯幼苗黑暗处理24h。接种方法主要有以下2种a)摩擦接利法:按事l前用肥皂将手洗净，选1&植株上百I3片复叶的顶叶，在叶面上均匀掀布lli年层600目金刚砂，然后用一只手掌托起叶片

6、，另一只手用手指蘸取病存按中l 悬浮液沿111-1:按顺序轻轻摩擦接种，用力程度以接种叶片表而无严重损伤为皮.该方法宜月3于少量材料鉴定.b)11由枪接种法:将1昆有金钢f&的马铃薯Y病毒接利;i乎液用喷芬枪距槌株5cm左右处愤射接种，接利时喷:枪压力为1.5 kg/cm-2 kg/cm.该方法宜用于大:1.1材料鉴定。接种后，用洗瓶轻轻冲洗接手1 叶片表丽的残留物。3d-5 d后重复接种l次。鉴定材料随机拍|列，每份材料设3个重复，每重复不少于10株苗。5.3.4 接种后管理接和l后置于白天混度24.C-30.C、夜间不低于20.C的防虫日光温室里培养，常规光照，正常栽培管理。6 病情调查6

7、.1 调查方法接利1后25d-30 d调查每份鉴定材料接利株发病情况，根据表1中的病害症状描述，逐份材料逐株进行调查，记载接种株病情级别，按式(1)计算病fff指数(DiscaseIndcx,D J)。6 2 病情级别划分植株病114分级及其对应的症状捎述见表1.表1马铃薯抗马铃薯Y病毒病接种鉴定的病情级别划分如i悄级jlJ症状描述。元任何症状心叶91脉或轻花叶3 上部l叫片轻，t叶，个)IJIII-I悻或叫柄或兰在上产生坏死5 上1部叫片蓝花11.，少做111脉、IIt柄或茶产尘胡、死;个)IJ11片变小、变脆并皱缩7 多数叫片蓝花叶.部分11.1脉、IIt柄或主主产生较多坏死斑;少放叫片变

8、小、变脆并皱部i或落l叶，租株稍矮化9 多激i叶片1f花叶、变小、变脆)1皱缩，叶柄或主在部:1现摆阔包制、E条斑.或租株明显矮化、落叶，其至死亡2 NY/T 3622-2020 6.3 病情指致计算病情指数(D)按式(1)计算。7丁(，X川)DI=二二一一一一-X100.(1)N X S 式中L;-一各病情级别数自与相对应的各病俯级别植株数乘积的总和;s 各病情级别数值;11 各病情级别的病株数，单位为株;N 调查的总株数，单位为株;S 病m级别的最高数值。7 抗病性评价7.1 抗性评价标准抗性划分标111，见表2.表2马铃薯抗马铃薯Y病毒病的评价标准病悄指敏(Dl)IJL性评价DlO 兔疫

9、(J)。Dl主5i:jjjLCHR)5Dl20 抗病(R)20Dl二351 3560 EU感(HS)7.2 鉴定高效性判别当感病对!i!材料达到其相应感病程度(DI3日，该批次鉴定结果视为有效。7.3 抗性判断依据一鉴定材料3个重复的平均病情指数(D)确定其抗性水平，写出正式鉴定报告，并|咐原始记录(鉴定结果记录见附录C)。8 鉴定材料处理鉴定完毕后，将马铃薯发病植株、残体集中进行无害化处理，用于鉴定的育茵恭质采用高温灭菌。3 NY 11 3622-2020 A.l 症状描述植株敬PVY侵染后，精品种、天气状况和感染类型I!l!,11片有坏死斑点，枯但基本不脱落，挂A 2.1 学名virus)

10、。A 2.2 PVY 甥以非持久茎可能甜莓，传播.坏死反应，在另一些品种的变异或重组株系陆续I也被鉴定，PVY盯忡NW等。附录A(资料性附录)马铃薯Y病毒及株系、皱缩，小11 11-缘向下卷斑、质J览易折，叶片干20多种有翅可传莓，块阳，苗利:耳性1七叶、卷曲、l叶的斑驳，但去IJ造PVyO株系.近年来，一些新0、PVYNW、PVYSYR、PVY怜刷、B_ 1 PVY分离、纯化附录B(规范性附录)病毒分离、纯化NY/1 3622-2020 在马铃薯Y病毒CPVY)发生剔，采集疑似感染马铃ZfY病毒的马铃挡/1-1-片，采用汁液磨擦法接种在PVY的特定分离奇主克色黎CCheno户od川nCll川

11、rallticolor)的叫片上，10多d后，待克包黎接利/1-1-=1:1:现具红褐色边缘的局部枯斑时，取新鲜枯斑连续3次在览色黎IIj片上进行单斑转移馁利以纯化病原物，并将纯化的病原物分另IJ接种到珊l西烟或黄苗榆烟幼苗的/1-1一片上进行繁殖，再用J(jl清学检测、电子显微镜观察病毒粒子形态及RT-PCR等方法对纯化病原物进行鉴定，鉴定方法按GB/T36816和ISN/T 1840的规定执行，确定为马铃薯Y病毒分离物后，最后经和I赫氏法则CKochsRuc)验证，保存备用。B_ 2 毒源保存纯化后的毒i1!，可常年保存在PVY繁殖句主上，植株ff于无虫、温度20.C-28.C、II然光照

12、的防虫illlt室内，也可将分离鉴定的PVYlj;株接种到易感马铃薯品种的无病毒组地苗上，在7.C-8.C低湘、光1m培养箱中继代繁殖。或将鲜病/1-1制作成冻干/1-1-放在装有硅l民或氯化钙的容栋里，置一20e或更低温度的低温冰箱中保存.冻干11-1的简易制作法。将鲜病P-I-剪成小块，与干燥硅!院或氯化钙隔层(用滤纸隔71)放挂在fil，H内容器里，剧将容器宜于4.C冰箱里，ltr2 d每天换1次干燥剂，以后每2d换1次，直到病叫才切成干燥NIlJ戎rfJ;干叫。整个制作过程应防止其他病毒污染。5 NY/1 3622-2020 附录C(规范性附录)马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定结果记录表马铃

13、薯抗马铃薯Y病毒病接利:鉴定结果记录表见表C.10 表C.l马铃薯抗马铃薯Y病毒病鉴定结果记录表品种/种质病haf级别1丙frI平均抗性编号名称来iJ(i.亟:I指数病指l干价O I 3 5 7 9 I H 111 jil种日WJ接种日WJ接种生育WJ按种病毒分离物编号株系类型调查日)9J记及人(签字)市核人签字)6 ONON-NNC凹阳讪Z 中国农业山版社IJ.:版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(III政编码100125网址。)北京印刷一厂印刷新华111.占北京发行所发行各地新华书店经销并*提印张O.75 字数15千字2020年10月北京第1次印刷3叫2020年10月第l版书号16109.8175 定价.18.00元长开本880mmX1230mm 1/16 版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3622-2020