GA∕T 1619-2019 法庭科学 生物检材中灭多威和灭多威肟检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法(公共安全).pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中灭多威和灭多威肟检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for methomyl and methomyl oxime in biological samplesGC-MS and LC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识

2、别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、运城市公安局。本标准主要起草人：王瑞花、张云峰、常靖、任昕昕、王爱华、刘彦军。GA/T 1 法庭科学 生物检材中灭多威和灭多威肟检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中灭多威及灭多威肟的气相色谱-质谱（GC-MS）定性检验方法和液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于生物检材中灭多威和灭多威肟的定性分析和定量分析。其他可疑样品中灭多威及灭多威肟的定性分析和定量

3、分析可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱-质谱法定性，液相色谱-串联质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料

4、 5.1 试剂 气相色谱-质谱实验用水应符合GB/T 6682中规定的三级水，液相色谱-串联质谱实验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)甲醇；b)乙酸乙酯；c)二氯甲烷；d)中性氧化铝或硅镁吸附剂；e)乙腈（色谱纯）；f)丙酮；g)甲酸（色谱纯）；h)无水硫酸钠；i)标准溶液：GA/T 2 1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据灭多威和灭多威肟标准物质的纯度，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 灭多威和灭多威肟标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)0.1mg/mL 混合标准工作溶

5、液：移取 1.0mg/mL 的灭多威和灭多威肟标准物质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到；3)10.0g/mL 灭多威和灭多威肟单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的灭多威和灭多威肟标准物质溶液各0.1mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，配制成浓度为10.0 g/mL的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 10.0g/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。注：特殊情况下可

6、使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)固相萃取柱：Oasis HLB 柱或等效固相萃取柱，依次用甲醇、水活化；注：Oasis HLB 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。d)一次性注射器；e)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；b)液相色谱-质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；c)电子天平；d)离心机；e)振荡器；f)移液器；g)浓

7、缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g于具盖离心管中，加入乙酸乙酯4.0mL8.0mL，振荡5min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，用无水硫酸钠脱水后，置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，GA/T 3 作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS分析。如需净化，按7.1.1.4操作。7.1.1.2 丙酮/水混合溶剂提取 移取血液等液体检材样品5.0mL1

8、0.0mL，或称取铰碎的固体检材样品5.0g10.0g，用丙酮/水混合溶剂（体积比4:1）50mL100mL浸泡3h以上（或超声1h以上）。8000r/min离心10min，分离上清液，置于水浴锅上50浓缩至2mL左右，离心，取上清液移至离心管中，再加入乙酸乙酯6.0mL，振荡10min，8000r/min离心10min，分离有机相，重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS分析。如需净化，按7.1.1.4操作。7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材样品1.0m

9、L2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g于具盖离心管中，用4倍体积水稀释，振荡10min，8000r/min离心20min，取上清液转移至已活化好的C18固相萃取柱中，控制上清液过柱流速为0.5mL/min过柱，依次用1mL水、1mL甲醇/水(体积比5:95)淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用2mL乙酸乙酯或乙酸乙酯/二氯甲烷（体积比1:1）洗脱，控制流速为0.5mL/min，收集洗脱液并置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，作为检材样品提取液供GC-MS分析或用0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供LC-MS分析。如需净化，按7.

10、1.1.4操作。7.1.1.4 样品净化（中性氧化铝柱净化法）净化过程包括：a)装柱：少许脱脂棉，依次加入无水硫酸钠 1g2g、中性氧化铝 2g5g 或硅镁吸附剂、无水硫酸钠 2g3g；b)净化：用与提取液相同的溶剂 6.0mL 预淋洗装好的柱子，弃去预淋液，将检材样品提取液过柱，再用与提取液相同的溶剂 6.0mL 洗脱。收集合并过柱液及洗脱液，置于浓缩器上 45浓缩至干，用 200 L 甲醇溶解，供 GC-MS 分析或用 0.22m 的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。7.1.1.5 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为

11、空白样品，一份添加灭多威或灭多威肟标准物质，作为添加样品（GC-MS添加样品的浓度为1.0 g/mL(g)，LC-MS添加样品的浓度为20ng/mL(g)），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：HP-5柱（30m 0.25mm，0.25m）或等效色谱柱；注：HP-5 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，

12、则可使用这些等效产品。b)色谱柱温程：100保持2min，以30/min速率升至280，保持17.5min；GA/T 4 c)柱流速：1mL/min；d)进样口温度：280；e)传输线温度：230；f)离子源温度：230；g)电子轰击能量：70eV；h)载气：高纯氦；i)进样方式：分流进样，分流比：10:1；j)扫描方式：全扫描（SCAN），质量扫描范围40 amu450 amu；k)灭多威和灭多威肟（灭多威分解产物）的保留时间、特征离子见表1。表 1 灭多威和灭多威肟的保留时间及定性离子 化合物 保留时间 min 定性离子 灭多威 3.57 58,88,105,162 灭多威肟 4.47 5

13、8,88,105 7.1.2.1.2 液相色谱-质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3(2.1mm 50mm，1.7m)或等效柱；注：ACQUITY UPLC HSS T3是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不 是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)流动相：A：乙腈，B：0.1%甲酸；c)洗脱方式：梯度洗脱，梯度见表2；表2 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B-0.5 10%90%1.5 0.5 40%60

14、%2.0 0.5 40%60%2.2 0.5 10%90%3.5 0.5 10%90%d)柱温：35；e)离子源：电喷雾电离源（ESI）；f)检测方式：正离子；g)扫描方式：多反应离子监测（MRM）；h)雾化气、脱溶剂气：氮气；i)碰撞气：氩气；j)离子源温度：150；k)雾化温度：350 l)毛细管电压：3.0kV；m)MS参考条件（定性、定量离子对和锥孔电压、碰撞能量）见表3。GA/T 5 表 3 MS 参考条件 名 称 定量离子对 定性离子对 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 灭多威 162.9105.9 162.96105.9 12 8 162.9687.9 8 灭多威肟 105.957.

15、9 105.957.9 20 10 105.972.8 18 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g5.0g两份，按7.1.1进行操作。另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加灭多威和灭多威肟标准物质作为添加样品（添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(100 50)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。7.2.2 仪器检测 7.2

16、.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1.2 规定的条件分析。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1.2 的分析条件每个样品进样分析23 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：添样添样添样VMAVMAW=.(1)式中：W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M添添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；V样检材样品的定容体

17、积，单位为毫升（mL）；A添添加样品提取液中目标物峰面积平均值；M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.3.2 计算相对相差 GA/T 6 记录 2 份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%10021=XXXRD.(2)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 分析结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 气相色谱-质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差

18、在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 4 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。灭多威和灭多威肟的 GC-MS 相关谱图参见附录 A中图 A.1图 A.3。表 4 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 10 15 20%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。GC-MS 方

19、法检出限参见附录 A。8.1.2 液相色谱-质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 5 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。灭多威和灭多威肟的 LC-MS 相关谱图参见附录 A 中图 A.4 和图 A.5。表 5 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色

20、谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。LC-MS 方法检出限参见附录 A。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。GA/T 7 附 录 A（资料性附录）灭多威和灭多威肟相关资料 A.1 灭多威（分子式为 C5H10N2O2S，又名万灵、快灵，CAS：16752-77-5），是一种高毒广谱型氨基甲酸酯类杀虫剂，并具有药效迅速、渗透力强、分解快、残留低等特点。在通风时、日光下、碱性介质中或在较高温度下迅速分

21、解成灭多威肟（分子式为 C5H10N2O2S），其分解过程如下：CH3CNOCNHCH3CH3CNOHSCH3OSCH3OH灭多威灭多威肟CH3CNOCNHCH3CH3CNOHSCH3OSCH3SCH3OHOH灭多威灭多威肟 A.2 灭多威和灭多威肟的 GC-MS 总离子流图见图 A.1。图A.1 GC-MS分析灭多威（2g/L）总离子流图 A.3 灭多威和灭多威肟的特征离子质谱图分别见图 A.2 和图 A.3。图A.2 灭多威特征离子质谱图 GA/T 8 501001502002503003504004505005500102030405060708090100%58105884220732

22、4391182546457128300367488416261510 图A.3 灭多威肟特征离子质谱图 A.4 灭多威的LC-MS色谱质谱图见图A.4。50ng ST10-Dec-201023:22:14Time0.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.40%00.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.803.003.203.40%00.200.400.600.801.001.201.401.601.802.002.202.402.602.

23、803.003.203.40%020101210Methomyl STD-10MRM of 2 Channels ES+162.964 105.977(Methomyl)7.23e51.2020101210Methomyl STD-10MRM of 2 Channels ES+162.964 87.949(Methomyl)1.00e61.2120101210Methomyl STD-10MRM of 2 Channels ES+TIC(Methomyl)1.69e61.20 图A.4 灭多威LC-MS色谱质谱图 A.5 灭多威肟的LC-MS色谱质谱图见图A.5。mieduoweiwu STT

24、ime0.501.001.502.002.503.003.504.004.50%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.50%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.50%010020171121-2MRM of 2 Channels ES+105.968 72.85(mieduoweiwu)8.98e4Area1.05208820171121-2MRM of 2 Channels ES+105.968 57.977(mieduoweiwu)1.57e7Area1.053779971.08326020171121-2MRM of 2 Channels ES+TIC(mieduoweiwu)1.58e7Area1.053800891.083278 图A.5 灭多威肟LC-MS色谱质谱图 GA/T 9 A.6 GC-MS分析，灭多威和灭多威肟的检出限均为500ng/mL（g）；LC-MS分析，灭多威和灭多威肟的检出限均为10ng/mL（g）。_