NY∕T 3138-2017 饲料中艾司唑仑的测定 高效液相色谱法(农业).pdf

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1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3138-2017 饲料中艾司瞠仑的测定高效液相色谱法Determination of estazolam in feeds一High performance liquid chromatography 2017-12-22发布2018-06-01实施咀中华人民共和国农业部发布.-目。昌本标准按照GBjT1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SACjTC76)归口。本标准起草单位:农业部饲料质量监督检验测试中心(广州)。本标准主要起草人:肖田安、方秋华、廖雁平、

2、江庆姊、陈运勤、伍宏凯、胡苑玲。NYjT 3138-2017 I NY/T 3138-2017 饲料中艾司哇仑的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了饲料中艾司瞠仑测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预i昆合饲料以及精料补充料中艾司哇仑的测定。本标准中艾司哇仑的检出限为0.10mg/.2 规范性引用文件日期的版本适用于本文的4件文引本的于期对日件注文不列是下凡件GB/T 14699.1 3 原理色谱法检测，外标法4 试剂与4.1 艾司4.2 4.3 4.4 4.5 碳酸铀。4.6 磷酸二氢钢。4.7 二氯甲皖。4.8 正己皖04.9 甲酸。4.10 氨水。4.11 4.

3、12 2%甲酸水溶液:取甲酸2mL，用水稀释至100mL。4.13 5%氨水甲醇榕液:取氨水10mL，加甲醇至200mL，混匀。4.14 0.4%磷酸二氢饵溶液:取磷酸二氢梆4g，用水榕解并稀释至1000mL。4.15 提取液:取二氯甲皖与正己烧以体积比1:1的比例混匀。4.16 艾司瞠仑标准储备溶液(1.0 mg/mL):准确称取艾司瞠仑标准品50.00mg，于50mL容量瓶中，用甲醇(4.3)溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备溶液。40C保存，保存期6个月。4.17 艾司瞠仑标准工作溶液(50g/mL):准确量取艾司哇仑标准储备榕液(4.16)1mL，于20mL容N

4、Y/T 3138-2017 量瓶中，用甲醇(4.3)稀释并定容，配制成浓度为50g/mL的标准工作榕液。40C保存，保存期3个月。4.18 罔相萃取柱:混合型阳离子交换柱，60mg/3mL;或相当者。5 仪器设备5.1 高效液相色谱仪:配二极管阵列检测器。5.2 分析天平:感量0.01mg。5.3 天平:感量0.001g。5.4 离心机:转速为5000r/min及以上。5.5 水平振荡器。5.6 涡旋1昆合器。5.7 旋转蒸发仪。5.8 罔相萃取装置。5.9 氮吹仪。5.10 微孔滤膜:0.45m，有机相。6 试样制备按照GB/T14699.1的规定抽取有代表性的饲料样品，用囚分法缩减取样。按

5、照GB/T20195的规定制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中，密闭备用。7 分析步骤7.1 提取称取试料2g(精确到0.001g)，于50mL聚丙烯离心管中。加入水20mL，用10%碳酸铀水榕液(4.11)调pH至8.59.0，加入氯化铀19。加人提取液(4.15)15mL，中速振荡10min后，5000r/min 离心5min，将上层有机相转人梨形瓶中。残渣再用提取液(4.15)15mL重复提取一次，合并提取液，在(35士2)C下旋转蒸发至干。用5mL甲醇(4.3)榕解梨形瓶中的残留物，备用。7.2 净化MCX国相萃取柱用3mL甲醇(4.3)、3mL水活化，取

6、备用液(7.1)过柱，用3mL 2%甲酸水恪液(4.12)、3mL甲醇(4.3)淋洗，用5%氨水甲醇溶液(4.13月mL洗脱，收集洗脱液，45C下氮气吹干，准确加人1.0 mL甲醇(4.3)榕解残渣，过0.45m的滤膜，供高效液相色谱测定。7.3 标准曲线的制备精密量取艾司I挫仑标准工作溶液(4.17)适量，用甲醇(4.3)稀释，配制成浓度为0.20g/mL、0.50g/mL、1.0g/mL、2.0g/mL、5.0p.g/mL、10.0g/mL、20.0 g/mL的系列标准榕液，供高效液相色谱分析。以色谱峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程。8 测定8.1在相色

7、谱参考条件2 色谱柱:C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5m;或性能相当者;流动相A为乙脯，流动相B为0.4%磷酸二氢抑、溶液，梯度洗脱程序见表1;流速:1.0 mL/min;检测波长:222 nm;进样量:20L;NY/T 3138-2017 柱温:300C。表1艾司瞠仑梯度洗脱程序表时间，min流动相A，%流动相日，%0.0 44 56 10 44 56 11 75 25 15 75 25 16 44 56 20 44 56 8.2 定性测定在仪器最佳工作条件下，试样中待测物的保罔时间与艾司瞠仑标准榕液中对应的保留时间相对偏差在:1:2.5%之内，且二者光谱阁一致，则可判定试样

8、中存在对应的待测物。光谱图参见附录A中的罔A.l。8.3 定量测定按照上述液相色谱条件测定试样榕液和标准榕液，以色谱峰面积进行单点或多点校正定量，试样榕液中待测物的响应值应在仪器测定的线性范罔内。标准榕液的高效液相色谱罔参见罔A.20 9 结果计算与表示9.1 结果计算9.1.1 单点校准试样中艾司哇仑的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(1)计算。x=xCs xxr(1)As X m J 式中:X一一试样中艾司瞠仑的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);Cs一一标准溶液中艾司I些仑的浓度，单位为微克每毫升(g/mL);A 试样榕液中艾司l哇仑的峰面积;As 标准溶液

9、中艾司瞠仑的峰面积;V一一净化后定容的体积，单位为毫升(mL);m一一试样的质量，单位为克(g);f一-稀释倍数。9.1.2 多点校准试样中艾司I哇仑的含量X，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(2)计算。Cx X V,/r x=一一-一xr(2)m 式中:Cx-由标准曲线得出的试样榕液中艾司I哇仑的浓度，单位为微克每毫升(g/mL)。9.2 结果表示测定结果用平行测定的算术平均值表职，保留3位有效数字。10 重复性在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值的算术平均值的20%。3 NY/T 3138-2017 附录A(资料性附录)艾司瞠仑标准溶液光谱图和色谱图A.1 艾司睡仑标准溶液光谱图见罔A.10 mAU A.2 艾司AU l 5。t,mln 4 中华人民共和同农业行业标准饲料中艾司瞠仑的测定高效液相色谱法NY/T 3138-2017 美l-9导中国农业出版杜出版(北京市朝阳阪麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址.ccap.CO)北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销*毛开本880rnrnX1230rnrn 1/16 印张O.75 字数15千7-2018年5月第1版2018年5月北京第1次印刷书号16109 4344 定价18.00元版权专有侵权必究举报电话(010)65005894 toN|的的HFZM