GA∕T 1624-2019 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf

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1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for penfluridol in biological samplesLC-MS-发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（

2、SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本标准起草单位：北京市公安司法鉴定中心（一）。本标准主要起草人：杨继锋、乔静、杨士云、刘永涛、王燕燕。GA/T 1 法庭科学 生物检材中五氟利多检验 液相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血液、尿液、肝脏组织）中五氟利多的液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于法庭科学生物检材中五氟利多的定性分析和定量分析。其他可疑样品中五氟利多的定性分析和定量分析可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的

3、修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂及材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)甲醇；b)乙酸乙酯；c)乙腈（色谱纯）；d)无水硫酸钠；e)甲酸铵（色谱

4、纯）；f)甲酸（色谱纯）；g)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据五氟利多标准物质纯度和盐型换算后，称取适量，用甲醇配制 1.0mg/mL 五氟利多标准物质溶液，密封，置于冰箱中 28保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)10.0 g/mL 五氟利多标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的五氟利多标准物质溶液 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的标准工作溶液，密封，置于冰箱中GA/T 2 冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。注：特殊情况下可使用对照溶液代替

5、标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)一次性注射器；d)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)液相色谱-质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；b)电子天平；c)离心机；d)振荡器；e)移液器；f)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体样品1.0g2.0g于具盖离心管中，加入乙酸乙酯4.0mL8.0mL，振荡5min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，用无水

6、硫酸钠脱水后，置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇200L溶解，用0.22m的有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器分析。7.1.1.2 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加五氟利多标准物质，作为添加样品（添加样品的浓度为5ng/mL），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器分析。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件（液相色谱-质谱条件）以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：Zorbax Eclipse Plus C18（2.1m

7、m 50mm，3.5m）；注：Zorbax Eclipse Plus C18柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。GA/T 3 b)流速：0.3mL/min；c)柱温：40；d)进样量：5L；e)流动相：流动相 A：20mmol/L 的甲酸胺水溶液（含 0.1的甲酸），流动相 B：乙腈（含 0.1的甲酸）；f)洗脱方式：梯度洗脱，梯度见表 1；表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B-55%45%1.00 55%45%3.00 10%90%4.00 10%90%5.00

8、55%45%8.00 55%45%g)扫描方式：正离子扫描；h)检测方式：多反应离子监测（MRM）；i)离子源温度：600；j)雾化气：40 psi；k)辅助加热气：40 psi；l)气帘气：20 psi；m)碰撞气：medium；n)MS 参考条件（定性、定量离子和去簇电压、碰撞能量）见表 2。表 2 MS 参考条件 目标物 定性离子对 定量离子对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 五氟利多 524.1109.3 524.1109.3 164 75 524.1149.2 53 524.1203.7 58 524.1274.2 60 524.1292.1 50 7.1.2.2 进样 分别吸取空白、

9、检材和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 分析条件进样分析。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g2.0g两份，按7.1.1.1进行操作。GA/T 4 另取等量相似基质的空白样品四份，其中一份作为空白样品，另三份根据五氟利多在不同基质中的线性范围，分别添加低、中、高浓度的五氟利多（定容后浓度为测定下限、线性范围中点、测定上限），混匀后静置24h以上，然后按7.1.1.1平行操作。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1 规定的条件分析。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、

10、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件每个样品进样分析23 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品中五氟利多定量离子的峰面积值，同一样品两次峰面积值相对相差小于等于 5%。以添加低、中、高的样品浓度（ng/mL 或 ng/g，即样品中添加五氟利多质量/样品体积或质量）为横坐标，对应浓度的两次峰面积均值为纵坐标建立回归方程 Y=Wb+a，当 r0.998 时可以用回归方程来定量检材含量（参见附录 A）。如果不在线性范围内，则应对定容液进行稀释或对检材取样量进行调整。按公式（1）计算含量：.(1

11、)式中：W检材样品中五氟利多的含量，单位为纳克每克或纳克每毫升(ng/g 或 ng/mL)；Y检材样品提取液中五氟利多峰面积平均值；a线性方程的截距；b线性方程的斜率。7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%10021=XXXRD.(2)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 GA/T 5 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内

12、）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 3 离子丰度比的最大允许偏差范围 离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数

13、据不可靠。应按7.2重新提取检验。方法检出限、回归方程及质谱图参见附录A，五氟利多性质参见附录B。GA/T 6 A A 附 录 A（资料性附录）方法检出限、回归方程及谱图 A.1 五氟利多方法检出限及回归方程 生物样品（血液、尿液、肝脏组织）中五氟利多检出限均为 2ng/g（mL）。五氟利多样品在满足 6 次峰面积 RSD2%、相关系数 r0.998 时的线性范围为 8.0ng/mL 400ng/mL，求得的回归方程为：血液样品中：3608.111200yx=+，20.9996r=尿液样品中：3558.57064.8yx=+，20.9998r=肝脏组织样品中：3197.112189yx=+，2

14、0.9997r=A.2 五氟利多质谱图 五氟利多质谱图见图A.1。图A.1 五氟利多质谱图 GA/T 7 附 录 B（资料性附录）五氟利多性质 B.1 药理作用及代谢简介 五氟利多为口服长效抗精神病药。抗精神病作用与其阻断脑内多巴胺受体有关，还可阻断神经系统-肾上腺素受体，抗精神病作用强而持久，口服一次可维持数天至一周。口服吸收缓慢，24h72h血药浓度达峰值，7d后仍可自血中检出。吸收后贮存于脂肪组织，缓慢释放，逐渐透入脑组织。大部分以原型从粪便中排出，少量经尿排出。B.2 理化性质 中文名：五氟利多；英文名称：Penfluridol；化学名：1-4,4-双(4-氟苯基)丁基-4-4-氯-3

15、-(三氟甲基)苯基-4-哌啶醇；英文别名：1-(4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl)-4-hydroxy-4-(3-trifluoromethyl-4-chlorophenyl)piperidine；1-4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl-4-4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl-4-piperidinol；1-4,4-Bis(4-fluorophenyl)butyl-4-4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenylpiperidin-4-ol；1-4,4-Bis(p-fluorophenyl)butyl-4-(4-chloro-a,a,a-trifluoro-m-tolyl)-4-piperidinol；CAS号：26864-56-2；EINECS号：248-074-5；分子式：C28H27ClF5NO；分子量：523.9651；密度：1.29g/cm3；熔点：105107；沸点：587.7（760 mmHg）。_