SN∕T 5381-2021 膨果苋检疫鉴定方法(出入境检验检疫).pdf

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1、ICS 65.020.01 CCS B 16 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 5381-2021 膨果克检疫鉴定方法Detection and identification of amarnthus deflexusL.2021-06-18发布2022-01-01实施中华人民共和国海关总署发布中华人民共和同向入境检验检疫行业标准膨果竟检疫鉴定方法SN/T S:1Rl-2021 兴巾国海关出版社有限公叫出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(OOOZ3)编辑部:(010)65194242-7531网址www.CL 印张1.2S 字数37千字2021年7月第一版2021年7月第一次印刷

2、印苦x:1-500 书专书号155175 675 定价20.00兀SN/T 5381-2021 目IJ1=1 木文件按照GB/T1.1-2020(标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规则起草。本文件由中华人民共和同海关总署提山并归口。本文件起草单位:中同检验检疫科学研究院、福州海关技术中心、二连海关技术中心、青岛海关技术中心、无锡海关综合技术巾心、巾华人民共和国银川海关、广州、|海关技术巾心、南通海关综合技术中.IL0 本文件主要起草人:徐晗、潘绪斌、虞费、袁、淑珍、邵秀玲、孙晃晃、胡诗瑶、吴悔荣、孙民琴OI 膨果宽检疫鉴定方法1 范围本文件规定了膨果觅(Amar川deljZe

3、:r:L.)检疫鉴定方法。本文件适用于膨果觅检疫鉴定。2 规范性引用文件SN/T 5381-2021 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件.仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的11用文件.其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T 1193 基因检字号实验室技术要求SN/T 3710 异株克市属检疫鉴定11法SN/T4715 杂草采集、保存和|制作规范3 术语、定义和缩略i吾3.1 术语和定义SN/T 3710界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1.1 胞果UtricIe|牛果的一种，又称囊果，由合生心皮形成的一类果实，具

4、一枚种子。成熟时，果皮薄且l燥，疏松地包罔种子，极易与种子分离O3.1.2 苞片Bract 在花或花序基部的退化的单片或数片叶或叶状结构.是介于正常叶和花之间的一种变态叶，有保护也芽或果实的作用。3.1.3 高光谱Hyperspectral 光i谱昔分辨率优于波段多的特点光谱通道数多达数十甚至数百个以上，而且各光谱通道间往往是连续的。3.2 缩略语下列缩回再语适用于木文件OPCR:polymerase chain reaction，聚合酶链式反应。DNA:deoxyribonuleic acid，脱氧核糖核酸。ITS:in ternal transcr讪ed叩acers1 and 2 and

5、the interveni吨5.8S ribosomal gene，核糖休DNA内转录间隔仄1和内转录间隔仄2，以及5.8S核糖体基因oTAE:Tris acetate-EDTA buffer，Tris乙酸电泳缓冲液。1 SN/T 5381-2021 4 膨果宽基本信息学名:Amarathusdfle立usL.英文名:largefruit amaranth,Argentina amaranth,deflexed amaranth,low amaranth 分类地位:双子日|植物纲Magnoliopsida，石竹曰Caryophyllales，克科AmaranthaceaeJussieu，克属l

6、maranlh usL.，自克f巨属lmaranlhussuhgen.llh旷五iaCKunth)Gren.Godr.有害生物信息参见附录A。5 方法原理膨呆克植株、花序、花、胞架和种子等形态特征是鉴定该种的主要依据，基于DNA条形码鉴定的分子生物学方法作为形态学鉴定的辅助于段O当植物体组织完好，在花果期，具备花等繁殖器官，可仅使用形态学鉴定方法。当植物体组织不完整，在幼苗期，或仅有种子、叶片等部分组织时.需采用形态学和分子生物学相结什的鉴定方法。种子鉴定可选择性参考高光谱特征(参见附录B)。6 器具和试剂6.1 仪器体视显做镜、电子天平(感量。.001峙，0.001g)、液氮罐、纯水机、电子

7、天平、水浴锅、高斥灭菌器、高温干燥箱、离心机、电泳仪、PCR仪、电泳槽、凝胶成像系统、高通量研磨机、涡旋震荡器等。6.2 设备电动筛或套筛、解剖刀、解剖针、放大镜、直凡、慑子、小毛笔、培养阳、指形管、广口瓶、白瓷盘、分样白、分样板、样品铲、样品袋、标签、记录主氏、标木瓶、标木盒、可调移液器(J000,IlL,200 Ill，J 00 11L,20L，10 JlL,2.5，uL)、可调移液器枪头等。6.3 试剂防虫剂、幢脑精、干操剂。植物基|大|组提取试剂盒、PCR反应体系常用试剂、TAE电泳缓冲液和|核酸分子量标准物质等。7 检测7.1 样品检测7.1.1 口岸监测在检疫现场采集植株鉴定用样品

8、，要求植株完整，形态学特征完好o化部鉴定用样品，要求处于果实成熟期、外型完整。种子鉴定用样品，要求发育成熟、籽粒饱满、外型完好。7.1.2 植物产品检测将现场检疫抽取的送检样品充分混匀，制成平均样品O采用四分法，视样品多少取平均样品的二分之一至四分之三(较少样品时)作为试验样品，称取其重量并记录，每份试验样品不少于1kg，剩余的平均样品加!占标签作为保罔样品保存。送检样品不足1kg的全部检测。7.l.3 胞果和种子过筛检验SN/T 5381-2021 根据样品个体的直径确定套筛的规格.从大到小依次套上不同孔径的规格筛并加上!自筛，将适量样品倒入规格筛的上层内，盖上筛盖，用回旋法过筛(或用电动筛

9、振荡)，使样品充分分离，把过筛的筛上物和筛下物分别倒入内瓷盘内，用摄子挑取杂草籽实，放于培养皿内。?昆杂于植物原粮和种子中的克属胞果或种子，一般在孔径为5mm筛下物巾获得o当样品土重少时，也可将全部样品放入白瓷盘巾进行人工挑检o7.2 镜检在解剖镜或放大镜下镜柿。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时，辅以解剖刀、解剖针等1.具。8 鉴定方法8.1 形态学鉴定8.l.1 克属一年或短时多年生草本，茎直立或伏卧O叶互生，全缘，有叶柄。花单性，雌雄同株或异株，腋生或顶生，聚生成单一或阅惟状穗状花序;每花有1苞片及2小苞片，干膜质;花被片。-5，大小相等或不等，绿色或着色，薄膜质，直立或向外反折，在果

10、期直立，间或在花期后变硬或基部加厚;立在itt;5，少数1-4，花丝钻状或丝状，基部尚生，花药2室;无退化雄疏;子房具1直生胚珠，花柱极短或缺，柱头2-3，钻状或条形，宿存，内面有细齿或做硬毛o胞果球形成卵形，侧扁，膜质，不裂、周裂成不规则开裂o种子双凸镜状，侧扁，黑色、深褐色、红褐色或褐色，平滑，边缘锐或饨，具光泽Oi亥属含克亚属、白克亚属和异株克亚属，约74种，除南北两极外，均有分布。我国有20余种。8.l.2 白宽亚属一年生或短时多年生草本，雌雄同株，平卧或匍旬，少直立。茎光滑或近光滑，有时被短柔毛。叶互生，具柄，形状多变，线形至椭圆形，基部渐狭或模形，先端具小短尖。花序多为腋生忡|簇状

11、或短穗状，少见顶生短穗状。雄花花被片(1-)3-5，推恶(1-)3-5。雌花花被片(1-)3-5，柱头2-30胞果不裂、不规则开裂或周裂。约52种，分布广泛。我国约12种。8.l.3 膨果宽8.l.4.1 植株和茎植株远端被毛或成熟期变光滑。茎倾斜上升或匍旬，基部多分枝，从根茎部向外呈辐射状，通常10 cm50 cm高。8.1.4.2 日十叶柄约为叶片长度的1/2;叶片菱状卵形、RX:卵形至披针形，长1cm 2 cm，宽0.5cm 1 cm，基部渐挟或模形，边全缘、平滑或略皱缩，先端近急、尖、钝状或微凹至浅凹缺，具小短尖。3 SN/T 5381-2021 8.1.4.3 花序1页生同锥花序三角

12、锥状，直立.密生厚实，远端兀叶.腋生花序团簇状o8.1.4.4 苞片苞片线形，长o.5 mml mm，约为花被片长度的1/208.1.4.5 花被片雌花花被片2-3，狭椭罔形或矩同状披针形，不具爪，等长或近等长，长1.2 mm2 mm，先端急尖;花性分支直立，柱头30雄花簇生于花序先端，花被片2-3;雄疏2-308.1.4.6 胞果表面具2-3条纵肋，略做膨大，椭同体型，长2mm3 mm，明显长于花被片，表面光滑，不开裂。8.1.4.7 种子双凸透镜状，椭圆形，长1mm1.2 mm，具明显环边，深褐色至黑色，种脐歪斜，下凹O8.2 分子生物学鉴定8.2.1 DNA提取及浓度测定使用常见商品化试

13、剂盒提取膨果克基因组DJ八。用以提取核酸的植物组织用量参照所采用商品化试剂盒使用说明。用紫外分光光度计或核酸浓度测定仪检测所提取核酸浓度，浓度以达到8.2.2步骤中使用的商品化PCR试剂盒中要求的DN八模板用量为准。8.2.2 PCR及测序膨果克的PCR步骤及测序.参见附录C，防污染措施应符合SN/T1193的规定。9 结果判定9.1 植株鉴定植物体各部分组织完整，符合8.1及附录D、附录E、附录F和附录G所述克属植株、花序、化、胞果等形态特征.可判定为膨果克o9.2 种子及部分组织鉴定符合8.1及附录D、附录E、附录F和附录G所述膨果克种子或叶片等部分组织形态特征，并与附录日所列膨果克ITS

14、参考序列一致性在99%以上时.可判定为膨果克。10 标本和样本的保存和处理杂草标本的保存方法按照SN/T4715的规定o4.1 地理分布附录A(资料性)膨果宽相关信息SN/T 5381-2021 原产南美洲问根廷、坡利维亚、巳丙和秘鲁等地，现入侵于欧洲同班牙、德同、法同等21个同家及地区。北美洲美国东西部沿海地区，中美洲墨西哥，非洲摩洛哥和南非，亚洲日本、印度、以色列和土耳其，以及大洋洲均有分布。中同元分布。.2 经济危害为吉农田、牧草(茵秸)、果同(柑情、甘蔚)等经济作物。适生性强.与作物竞争生长。株产籽量高，一且定殖难以防除。易富集亚硝酸盐，毒害牲畜。被同际应川生物科学中心(CABTnte

15、rnationaD入侵种数据库收录。.3 生物学特性及传播途径一年生或短时多年生克属杂草。喜光照、耐寒甸喜水分充足的砂质士。常见于各种人工干扰生境，如农田、果园、垃圾堆、铁路沿线、园林绿化带等。通过风媒、水媒等近距离传播，借助农作物、土壤调运以及运输T丁具如集装箱等远距离传播。SN/T 5381-2021 附录(资料性)膨果宽种子高光i普波谱曲线B 膨果克种子高光谱波谱曲线见罔B.1 0 1.2 0.4 1.0 0.8 0.6 0.2(85古EE叫E)储苗时RM0.0 1 200 1 000 800 膨果宽种子高光i昔波谱曲线600 图B.1400 200 6 C.1 号|物序列附录C(资料性

16、)ITS序列扩增基本信息TTS1:5-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3;ITS5:5-GG八八GT八八八八GTCGT八八C八八GG-3。注:均为通用I物DC.2 PCR体系及扩增程序SN/T 5381-2021 25，uL或50L体系，采用商品化的PC卫试剂住进行扩增。反应体系中寻|物浓度为10，umol/L，模板DNA含量约20吨或以所采用的商品化PCR试剂盒说明书为准。扩增程序中，ITS序列退火温度推荐为52oc 55 oc。其余参数参照所采用商品化PCR试剂盒说明书oC.3 电泳及测序ITS序列扩增产物电泳条件:5，uLPCR产物，J%国脂糖，JX TAE缓冲液O

17、以D:-JA分子量标记作为对照，ITS序列扩增产物约700bpo ITS序列测序引物为ITS4及ITS50 7 SN/T 5381-2021 D.1 膨果宽种子见罔0.1。附录D(规范性)膨果宽植株、花部、胞果、种子图片(左图为截获臼智利的样本.右圈为采白西班牙的样本)图D.1膨果克种子D.2 膨果宽花被片和胞果见图D.2。(左图为截获山智利的样木，右圈为采白两班牙的样本)图D.2膨果克雌花花被片和胞果8 D.3 膨果宽花序见图D.3 0 图D.3膨果克花序(徐晗拍摄于西班牙茵宿草场2012年)SN/T 5381-2021 9 SN/T 5381-2021 D.4 膨果宽植株及入侵生境见图D.

18、40 图D.4膨果克植株(徐晗拍摄于西班牙首宿草场2012年)10 附录E(规范性)白宽亚属常见种分种检索表SN/T 5381-2021 1.植物体雌雄异株兴异株克亚属Amaranthussuhgen.A川ida1.植物体雌雄同株22.雌花花被片5关克亚属Amarar川ussuhgen.Amar时2.雌花花被片)34C日33.雌花花被片。，败育薄叶克Amaranth川tenuifolius3.雌花花被片发育，34C5)44.雌花花被片35 4.雌花花被片4512 5.圆排花序顶生，顶生花序长于侧生花序，有时也具腋生回簇状花序65.花序腋生，元顶生花序96.植株直立生长，稀斜升76.植株匍甸、平

19、卧后倾斜上升，自基部多分枝87.胞果卵球形至球形，长约2.00mm，不开裂.果皮皱缩皱果克A.川-idi.17.胞果卵状椭阿形.长2.00 mm2.50 mm，周裂，果皮光滑且:A.tricolor 8.叶片先端微凹或凹缺，胞果圆球形至椭圆形，种子填充于果皮中凹头克A.bliLum 8.叶片先端略尖至钝状，胞果略膨大，椭圆形，种子仅占据胞果内部分空间膨果克A.defl口us9.雌花苞片长约为1七被片的2倍.钻形，只芒尖自克A.albus 9.雌花住片短于花被片，三角形或狭三角形10 o.Ji#E花花被片略长丁胞果，最外侧花被片宽匙形旱叶状;苞片狭二:角形或披针形南非克A.enSIS10.雌花花

20、被片短于胞果，披针形;住片三角形11J1.叶片宽卵形.菱状卵形或椭同状卵形;Ji#E七花被片具长不超过0.25mm直伸的小短尖地中海克A.graecizassubs p.sylvestris 11.叶片线状披针形至菱状匙形;雌花花羊皮片先端具O.30 mm O.70 mm略反折的长芒尖腋花克A.p，raecizanssubs户.thellunp，inus 12.Ji#E花花被片4，胞果球形，长2.00mm，此滑，周裂.种子长1.00 mm1.25 mm 北美克A.blitoide.1 12.Ji#Ei七被片5，胞果卵状椭罔形，长2.00 mm3.00 mm，表面有纵纹，不开裂，种子长O.85

21、mm 1.02 mm13 13.雌花花被片匙形，基部具爪;胞果具皱纹菱叶克A.stldleya川S13.雌花花被片基部1/3处合生成筒状，裂片有爪，具3脉;胞果狭椭球状，海绵质合被克A.户。l.ygides(兴备注:异株克亚属和克亚属形态特征参见SN/T3710)11 SN/T 5381-2021 附录F(资料性)膨果宽及近似种种子形态特征比对表膨果克及近似种种子形态特征比对表见表F.1 c 表F.1 膨果宽及近似种种子形态特征比对表形态特征膨呆克长芒克菱叫克合被克糙呆克内1在形状间卵形、矩同形阔卵形阔卵形阳卵形阳卵形、近同形近同形颜色红褐色、褐色红褐邑、祸色、深褐色褐色红褐色、褐色褐色、深褐

22、色褐色、深褐色长(mm)1.OO 1.20。.90 1.12。.9G1.02。.800.9G O.7G0.8G 0.901.00 il:t;(mm)O.70O.80 O.81 1.03。.70O.80。.66O.81。.67O.771.OO1.02 环状边明显明显明显明显不明显明显形态特征凹头克反枝克绿穗克刺克丛L 形状近同形阔卵形阔卵形、近l员|形阔卵形、近同形阔卵形、近l员|形颜色红褐色、褐色、褐色黑、深色褐色、白色、深褐色、黑色红褐色、褐色、揭色、深褐色、探褐色、黑色深褐色黑色长(mm)1.101.15 1.101.15 O.85O.!J!J。.!J51.021.101.15 宽(mm)

23、1.07 1.13。.981.03。.971.01。.81 O.88 1.OG1.10 环状边明、币或不明日明日明5在明眼明日12 皱祟克近同形黑色。.7G0.83。.!JOO.!J8 明显或不明显北美克近|员|形黑色1.051.25 1.OG1.28 明日附录G(资料性)SN/T 5381-2021 膨果宽及近似种种子形态特征图膨果克及近似种种子形态特征罔见罔G.lG.11c图G.1膨果宽(西班牙)图G.2膨果宽(智利)图G.3长芒克图G.4菱叶宽图G.6糙果宽图G.5合被宽13 SN/T 5381-2021 图G.7白克图G.8皱果克图G.9凹头克图G.10反枝克图G.11 绿穗克图G.1

24、2刺宽图G.13克图G.14北美克14 0.1 膨果竟ITS基因参考序列附录H(资料性)膨果宽DNA条形码参考序列二Amaranthus defle.rus(GenBank登录号:MK 905127)SN/T 5381-2021 1 GGTG八八CCTGCGG八八GG八:rC八:rTGTCG八八八CCTGCCT.八GC八G八:rTG八CC八GCG八八C八:rGT61 TTTATCGTAA GCGGAGCGGG GTGCCCTAGC GAAGCCTTGC GGACGAGCTA TTGCCCCCTC 121 CTCCCG八CGTTGGGTGGTGC TCCTCTCTG八 GGGGTGCTGCTCG

25、八:rGC八八C八八CG八八CCCC181 GGCGCGGCCT GCGCCAAGGA ACATGAACTT GAGCGTGCTC GTCTTGTGCC CGGGTCACCG 241 GCGCATGGGA GTGGATGCAC CCAGTACTGA GTATTAAACG ACTCTCGGCAACGGATATCT 301 TGGCTCTCGC ATCGATGAAG AACGTAGCGA AATGCGATAC TTGGTGTGAATTGCAGAATC 361CCGTGAACCATCGAGTTTTTGAACGCAATTC汉、CCCGl户AG(X:T(:TGG(:CAG(:ACXT(:421 TGCC

26、TGGGCG TCACGCATTG CGTCTCCCCC AACCCGCCTA GCTGTGGGAGGGGCGAGGAG 481 GATGGTCTCC CATGCC丁CACCGGGCGTGGA TGGCCTAAAA CAGGAGCCCACGGTTGC心AG541 CTGCTGCGGC GATTGGTGGT GTGCAAGG(丁CTAG(丁CTA工气ATGCAATCGCG TCGCACAGTG 601 CGTGGACCTT GTGGCCTTGA GGACCCTAGA GTGTTGCCCG AGGGCGACCA ACCACTGCGA 661 CC H.2 膨果克ITS基因其他参考序列肌1G6852

27、:-1O、MG6852:-n手UMG 6852:-32。-NON-hhmHZ SN/T 5371-2021 献Aellen P.Amaranthus L.Tn:Hegi G(ed)Illustrierte Flora von Mitteleuropa,2nd ed.,vol 3,Part 2 MJ.Munchen:Carl Hanser Verlag,1959:465-516.2J Bayn N D.Revisintaxonmica de lasespeciesmonoicas de Amanthus L.(Amaranthace ae):AmaraLhu口hg.Alhersiay Amara

28、nLh川uhg.Arnaranlhus J J.文考参lJ 2015,Xu,H.et al.Species identification,phylogenetic analysis and detection of herhicide-resist-ant biolypes of Amarar川basedon ALS a口dTTS JJ.Scienlific Reporls,2020.10,11735.hllps:doi.org/10.10:-l8/s41S98-020-68S41-x.4J 徐晗.中国克属植物的研究口)J.北京:中国科学院植物研究所，20JO.SJ 徐晗等.基于ITS序列的中国外来克属植物系统关系分析JJ.广西植物，2017，:-l7(2):Gard.Bot.岛10.Ann.101:261-383.:-lJ-A哇川A丛fEll-i n叫Jd-i 虞费等.中国门岸首次截获外来有害杂草胀果克JJ.植物检疫，201S,1:93-9S.侵权必究争夺版权专有书号l川175675定价:7L 20.00 SN/T 5381-2021